WS/T 236—2017 生殖器皰疹診斷

皮膚病及性傳播疾病 衛生標準 診斷標準 中華人民共和國衛生行業標準

目錄

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1 拼音

WS/T 236—2017 shēng zhí qì pào zhěn zhěn duàn

2 英文參考

Diagnosis for genital herpes

3 基本信息

ICS 11.020

C 59

中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 236—2017《生殖器皰疹診斷》(Diagnosis for genital herpes)由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會2017年07月24日《關於發佈〈病原微生物實驗室生物安全通用準則〉等5項衛生行業標準的通告》(國衛通〔2017〕7號)發佈,自2018年02月01日起實施,代替WS 236—2003,WS 236—2003同時廢止。

4 發佈通知

關於發佈《病原微生物實驗室生物安全通用準則》等5項衛生行業標準的通告

國衛通〔2017〕7號

現發佈《病原微生物實驗室生物安全通用準則》等5項衛生行業標準,其編號和名稱如下:

一、強制性衛生行業標準

WS 233—2017 病原微生物實驗室生物安全通用準則(代替WS 233—2002);

WS 296—2017 麻疹診斷(代替WS 296—2008)。

二、推薦性衛生行業標準

WS/T 191—2017 軟下疳診斷(代替WS 191—1999);

WS/T 236—2017 生殖器皰疹診斷(代替WS 236—2003);

WS/T 562—2017 克-雅病診斷

上述標準自2018年2月1日起施行,WS 233—2002、WS 296—2008、WS 191—1999、WS 236—2003同時廢止。

特此通告。

國家衛生計生委

2017年7月24日

5 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準代替WS 236—2003《生殖器皰疹診斷標準及處理原則》,本標準自實施之日起,WS 236—2003同時廢止。

本標準與WS 236—2003相比,主要修改如下:

——標準性質由強制性改爲推薦性;

——本標準名稱改爲“生殖器皰疹診斷”;

——增加了術語、定義和縮略語(見第2章和第3章);

——臨牀表現中增加了初發性生殖器皰疹(見5.2.1);

——臨牀表現中增加了非原發感染的初發性生殖器皰疹(見5.2.1.3);

——實驗室檢查中增加了核酸檢測(見5.3.3);

——實驗室檢查中增加了抗體檢測(見5.3.4);

——刪除了處理原則(見2003版的第3章);

——刪除了治療原則(見2003版的3.1);

——刪除了臨牀治癒標準(見2003版的3.2);

——刪除了管理與預防(見2003版的3.3);

——刪除了附錄A中細胞學檢查(Tzanck塗片)(見2003版的附錄A.2);

——刪除了附錄B生殖器皰疹的處理和治療方案(見2003版的附錄B);

——刪除了參考文獻(見2003版的參考文獻);

——增加了附錄C單純皰疹病毒核酸擴增試驗(見附錄C);

——增加了附錄D單純皰疹病毒特異性抗體檢測(見附錄D)。

本標準起草單位:中國醫學科學院皮膚醫院(研究所)、復旦大學附屬華山醫院、中山大學附屬第三醫院

本標準主要起草人:蔣娟、龔向東、王千秋、蘇曉紅、賴偉紅、徐金華、陸春。

本標準所代替標準的歷次版本發佈情況爲:

——WS 236—2003。

6 標準正文

生殖器皰疹診斷

6.1 1 範圍

本標準規定生殖器皰疹的診斷原則、診斷依據、診斷和鑑別診斷。

本標準適用於全國各級各類醫療衛生機構及其醫務人員對生殖器皰疹的診斷。

6.2 2 術語和定義

下列術語和定義適用於本文件。

2.1

單純皰疹病毒 herpes simplex virus;HSV

皰疹病毒科、α皰疹病毒亞科、單純病毒屬的雙鏈DNA病毒基因組DNA長約150 kb,病毒核殼由脂質糖蛋白包裹,具有嗜神經組織特性。

注:根據單純皰疹病毒包膜糖蛋白G (gG)的特異性抗原決定簇gG-1和gG-2,將單純皰疹病毒分爲HSV 1和HSV 2兩種血清型,其基因同源序列約爲50%。單純皰疹病毒2型主要侵犯生殖器與肛門及其周圍部位;單純皰疹病毒1型主要侵犯面部,也可侵犯生殖器與肛門及其周圍部位。

2.2

生殖器皰疹 genital herpes

單純皰疹病毒感染生殖器與肛門及其周圍部位皮膚黏膜,以疼痛水皰及淺表潰瘍爲主要特徵的一種慢性複發性性傳播疾病。

2.3

初發性生殖器皰疹 initial episode

分爲原發感染的初發性生殖器皰疹和非原發感染的初發性生殖器皰疹。前者爲既往無單純皰疹病毒感染,是單純皰疹病毒第一次感染後出現臨牀症狀的首次發作,在感染的個體內不存在單純皰疹病毒抗體;後者爲既往有過單純皰疹病毒1型或2型感染,再次感染另一型別的單純皰疹病毒而出現生殖器皰疹的首次發作,在感染的個體內已經存在與當前感染型別不同的單純皰疹病毒抗體

2.4

複發性生殖器皰疹 recurrent episode

生殖器皰疹臨牀症狀的復發,在首次發作皮損消退後,經過一段無症狀期,皮疹再次出現或反覆發作。無症狀期可間斷性排放病毒生殖器與肛門部位單純皰疹病毒2型感染的復發頻率高於單純皰疹病毒1型感染的復發頻率

6.3 3 縮略語

下列縮略語適用於本文件。

CPE:細胞病變效應(cytopathic effect)

HSV:單純皰疹病毒(herpes simplex virus)

PCR:聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction)

6.4 4 診斷原則

依據流行病學史、臨牀表現及實驗室檢查進行綜合分析,作出診斷。

6.5 5 診斷依據

6.5.1 5.1 流行病學

有不安全性行爲史,或多性伴史,或性伴感染史。

6.5.2 5.2 臨牀表現

6.5.2.1 5.2.1 初發性生殖器皰疹

5.2.1.1 潛伏期2 d~20 d,平均6d。初起爲紅斑和丘皰疹,很快發展爲集簇或散在的小水皰,2d~4d後破潰形成糜爛或淺表潰瘍,有燒灼感和疼痛。病程可持續2周~4周。男性好發於包皮、冠狀溝、龜頭、陰莖體、陰阜等,可伴有尿道炎的表現。女性好發於大小陰脣、陰道、宮頸、會陰和陰阜等。有肛交性行爲者可有肛門直腸受累,表現爲肛周水皰潰瘍肛門疼痛裏急後重便祕直腸黏液血性分泌物等。

5.2.1.2 原發感染的初發性生殖器皰疹,臨牀症狀較重,常伴全身不適、乏力發熱頭痛、肌痛等全身症狀,腹股溝淋巴結腫大,有壓痛,病程較長。

5.2.1.3 非原發感染的初發性生殖器皰疹,臨牀症狀與原發感染類似,部分病例病情相對較輕。

6.5.2.2 5.2.2 複發性生殖器皰疹

與初發性生殖器皰疹相比,自覺症狀較輕,水皰糜爛潰瘍皮損數目較少,病程較短,多在1周內癒合,腹股溝淋巴結腫大和全身症狀少見。發疹前可有前驅症狀,表現爲局部燒灼感、刺痛感覺異常等。少部分患者臨牀症狀不典型,僅表現爲發作性外生殖器肛門周圍紅斑、皸裂糜爛等。

6.5.3 5.3 實驗室檢查

5.3.1 生殖器皰疹實驗室檢測標本採集方法見附錄A。

5.3.2 病毒培養。通過細胞培養法從臨牀標本分離單純皰疹病毒(見附錄B的B.1)。

5.3.3 抗原檢測。以免疫熒光試驗(IFA)或酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測臨牀標本單純皰疹病毒抗原陽性(見B.2)。

5.3.4 核酸檢測。應用核酸擴增試驗從臨牀標本檢測單純皰疹病毒DNA(見附錄C)。

5.3.5 抗體檢測單純皰疹病毒2型特異性血清抗體檢測陽性(見附錄D)。

6.6 6 診斷

6.6.1 6.1 臨牀診斷病例

符合5.2,同時有或無5.1及5.3.5者。

6.6.2 6.2 確診病例

符合臨牀診斷病例,並符合5.3.2、5.3.3、5.3.4中的任一項者。

6.7 7 鑑別診斷

6.7.1 7.1 一期梅毒

臨牀表現爲硬下疳潰瘍一般爲單發,直徑1 cm~2 cm,圓形或橢圓形,界限清楚,邊緣略隆起,瘡面清潔觸診基底堅實,浸潤明顯,呈軟骨樣硬度,無疼痛或觸痛,伴無痛性腹股溝淋巴結腫大。潰瘍面取材暗視野顯微鏡檢查可見梅毒螺旋體梅毒抗體檢測陽性

6.7.2 7.2 軟下疳

生殖器或肛周炎性小丘疹,1 d~2 d後迅速變爲膿皰,破潰形成疼痛潰瘍,基底柔軟,邊緣不整,可潛行穿鑿。周圍可有衛星狀病變,常伴化膿性疼痛性腹股溝淋巴結炎。潰瘍不出現反覆復發。杜克雷嗜血桿菌培養陽性

7 附錄

7.1 附錄A(規範性附錄)生殖器皰疹實驗室檢測標本採集方法

7.1.1 A.1 標本的採集

7.1.1.1 A.1.1 標本採集類型

根據實驗室檢測方法和臨牀表現採集相應的標本,病原學檢測方法採集的標本包括皰液、潰瘍面滲液、尿道拭子、宮頸拭子或直腸拭子;血清抗體檢測採集血液標本

7.1.1.2 A.1.2 不同類型標本的採集方法

A.1.2.1 皰液取材:用1 mL注射器和0.5 mm口徑針頭從成熟水皰膿皰中抽取皰液,或者刺破水皰後用棉拭子或滌綸拭子取樣

A.1.2.2 潰瘍取材:先將潰瘍表面痂皮或污物去除,再用拭子用力擦拭或刮取潰瘍基底部,尤其是潰瘍邊緣部位的組織滲液。

A.1.2.3 紅斑及丘疹等病損取材:先用一拭子清除局部污物,再用另一拭子反覆擦拭紅斑丘疹部位,取皮膚黏膜上皮細胞、或取痂皮及痂下組織液

A.1.2.4 男性尿道內取材:將男用尿道拭子伸入尿道內2 cm~4 cm,捻轉數圈停留10 s後取出。

A.1.2.5 女性宮頸管取材:先用一拭子拭去宮頸表面黏液,再用另一拭子插入宮頸管1 cm~2 cm,捻轉數圈停留10 s後取出。

A.1.2.6 直腸取材:在直腸鏡直視下采集直腸黏液膿性分泌物,無條件者盲取。將拭子插入肛管內2 cm~3 cm,向側方用力避免接觸糞團,從緊靠肛環邊的隱窩中採集分泌物。

A.1.2.7 靜脈標本採集:從肘靜脈穿刺採集5 mL血液,將血液注入不含抗凝劑乾燥清潔的試管中,待血液凝固後,1200 r/min離心10 min分離血清

7.1.1.3 A.1.3 注意事項

取材前不要使用消毒劑,取材時不要使用潤滑劑。疾病不同病期及病損不同形態影響病毒檢測敏感性,應儘量取新出水皰皰液或膿皰液進行檢測

7.1.2 A.2 標本運送

取材後若不能立即進行檢測,用於病毒培養的標本,應儘可能洗入病毒運送液中,棄去拭子,置冰浴或4℃送檢。用於免疫學分子生物學方法檢測標本,置無菌密閉容器送檢。

7.1.3 A.3 標本保存

用於病毒培養的標本,取材當天(24 h內)接種者可暫置4℃冰箱保存;如當天不能接種,置-70℃低溫冰箱保存。用於免疫學分子生物學方法檢測標本,需根據相應方法的要求處理標本,2℃~8℃可保存48 h,更長時間保存需將標本凍存於-20℃或-70℃低溫冰箱中。

7.2 附錄B(規範性附錄)生殖器皰疹實驗室檢測方法

7.2.1 B.1 病毒培養、鑑定和分型

7.2.1.1 B.1.1 材料與儀器

材料與儀器準備如下:

a) 敏感細胞株:常用的細胞系主要有非洲綠猴腎細胞(Vero)、宮頸癌細胞(HeLa)。

b) 細胞生長培養液:含10%小牛血清的RPMI 1640培養液。成分:RPMI  164016.4 g、慶大黴素50 U/mL、二性黴素B 2 μg/mL、胎牛或新生牛血清10%、萬古黴素25μg/mL、HEPES 25mmol/L、碳酸氫鈉3.0 g、L-谷氨醯胺0.2 mmol/L。配製時,雙蒸水加至1000 mL,用碳酸氫鈉調節pH至7.2,正壓過濾除菌,-20℃保存備用。

c) 細胞生長維持液:含2%胎牛或新生牛血清的RPMI 1640維持液。

d) 主要儀器:二氧化碳培養箱、倒置顯微鏡、恆溫離心機、旋渦振盪器。

7.2.1.2 B.1.2 方法

操作步驟如下:

a)  單層細胞的準備。操作步驟如下:

1)  取出凍存細胞,置37℃水浴融化,加入已含有細胞生長培養液的培養瓶中,置37℃孵育8h,待細胞貼壁後換新鮮生長培養液,繼續培養2 d~3 d;

2)  細胞融合成單層後,棄培養液,用適量胰蛋白酶溶液於37℃消化細胞單層4 min~5 min,讓細胞完全離散後加入生長培養液,吸管吹打細胞使之均勻混懸;

3)  用血球計數器計數細胞,再以生長培養液作稀釋,使其達到所需細胞濃度(大約105/mL),分裝於24孔培養板中,每孔加入0.5 mL細胞懸液;

4)  培養板置於5% CO2、37℃及溼潤空氣環境下培養1 d~2 d,待80%的細胞融合,即細胞基本長成單層後,用於標本接種。

b)  標本接種。操作步驟如下:

1)  臨牀標本在旋渦振盪器上振盪混勻,凍存標本則從-70℃取出後立即置37℃水浴融化,    混勻;

2)  吸去細胞單層的培養液,每孔加入標本0.2 mL~0.5 mL,每份標本接種1~2孔;

3)  在50/ CO2、37℃環境中孵育1 h~2 h,使病毒吸附細胞上,吸去標本液,每孔加入生長維持液0.5 mL,在5% CO2、37℃及溼潤空氣環境下培養3 d~7 d。

c)CPE的觀察。接種標本後每天觀察CPE,初步判斷培養結果。培養結果陰性可疑陽性者,應觀察至第7d,或者收集細胞及上清液,重新接種於新鮮細胞。CPE記錄方法如下:

1)  0爲無CPE;

2)  +爲25%以下的細胞出現CPE;

3)  ++爲25%~49%的細胞出現CPE;

4)  +++爲50%~74%的細胞出現CPE;

5)  ++++爲75%以上的細胞出現CPE。

d)  病毒傳代。50%以上細胞出現CPE後收集培養物,再次接種至新鮮細胞中。當培養至50%的細胞出現CPE後,收集感染細胞及上清液。1200 r/min離心10 min後棄上清,用新鮮維持液將沉澱物混懸,用於HSV鑑定及分型。

e)  病毒臨牀分離株的鑑定和分型。常用單克隆抗體免疫熒光試驗進行分型。取細胞懸液塗片,每    個標本均爲雙份,作HSV鑑定和分型。直接免疫熒光試驗分型操作方法如下:

1)  固定:用-20℃冷丙酮甲醇固定標本10 min;

2)  漂洗:用pH 7.2的PBS漂洗3次,每次1 min;

3)  乾燥:37℃或自然乾燥

4)  染色:雙份標本分別滴加異硫氰酸標記的HSV 1和HSV 2單克隆抗體工作液,置37℃溼盒中,結合30 min~1 h;

5)  漂洗:用pH 7.2的PBS漂洗3次,每次5 min;

6)  乾燥:37℃或自然乾燥

7)  封片:用封片液(由90%甘油和10%的PBS組成)1滴封片;

8)  結果觀察:在熒光顯微鏡下(紫外線波長495 nm)觀察記錄,結果記錄方法如下:

● -爲無熒光

● ±爲極弱可疑熒光

● +爲熒光較弱,但清晰可見;

● ++爲熒光明亮;

● +++~++++爲熒光閃亮,且範圍廣泛。

7.2.1.3 B.1.3 結果

檢測結果如下:

a)HSV引起的CPE具有一定的特徵性,典型的CPE表現爲初始時細胞漿顆粒增粗,細胞變大變圓,繼而細胞腫脹,氣球樣變,可見融合細胞或多核巨細胞

b)  應用單克隆抗體免疫熒光試驗鑑定和分型時,陽性細胞細胞漿和細胞核內可見亮綠色熒光,    而陰性細胞則復染成橙紅或暗紅色,無亮綠色熒光

c)  出現典型CPE時初步表明病毒培養陽性。當用免疫學方法分子生物學方法鑑定證實後,可報    告爲“HSV培養陽性”,同時報告相應的HSV型別。

7.2.1.4 B.1.4 注意事項

注意事項如下:

a)  標本取材後應儘快接種,不能於24 h內接種的標本應在-70℃凍存。

b)  標本接種時,注意無菌操作,避免細菌真菌污染。所有待檢標本均應保留部分標本,以便在    培養污染或操作失誤時重複實驗。

c)CPE出現的時間:50%以上的陽性標本CPE出現在接種後24 h~48 h,80%~90%的CPE出現在接種後的3 d~4 d,95%以上在7d內出現CPE,僅有5%左右的標本需7 d以上纔出現CPE。

7.2.1.5 B.1.5 臨牀意義

病毒培養是HSV檢測的“金標準”,對病毒分離特異性強,且可進行分型,是生殖器皰疹病例確診的依據。早期水皰型皮損病毒培養陽性率達90%以上,但在複發性生殖器皰疹患者及非水皰膿皰性病損中,本法敏感性下降至20%~70%。

7.2.2 B.2 抗原檢測

7.2.2.1 B.2.1 免疫熒光試驗
7.2.2.1.1 B.2.1.1 材料與儀器

材料與儀器準備如下:

a)  0.01 mol/L的pH 7.2的PBS緩衝液;

b)  異硫氰酸熒光素標記的抗HSV抗體,用於直接免疫熒光試驗;

c)  無熒光素標記的特異性抗HSV抗體,熒光素標記的抗球蛋白抗體,用於間接免疫熒光試驗

d)  主要儀器:熒光顯微鏡、恆溫培養箱

7.2.2.1.2 B.2.1.2 方法

檢測方法如下:

a)  直接免疫熒光試驗:同病毒培養中的病毒臨牀分離株的鑑定與分型。

b)  間接免疫熒光試驗。操作步驟如下:

1)  待檢標本塗片經固定後,滴加抗HSV抗體後放溼盒中,37℃溫箱孵育30 min後,用PBS漂洗或浸泡3次,每次5 min,然後用雙蒸水洗一次,37℃乾燥

2)  滴加熒光素標記的抗球蛋白抗體,放溼盒中,37℃溫箱孵育30 min後取出,漂洗乾燥、封片。在熒光顯微鏡下觀察結果,觀察與記錄方法病毒培養中的病毒臨牀分離株的鑑定與分型。

3)  結果:HSV抗原陽性時,上皮細胞細胞漿和細胞核內可見亮綠熒光;而陰性時,上皮細胞則復染成橙紅或暗紅色,無亮綠色熒光

7.2.2.1.3 B.2.1.3 注意事項

由於組織細胞中存在自然熒光,易出現非特異性結果,每次試驗均應設置己知陽性陰性標本對照。並且應選擇特異性好、質量可靠的抗體,最好選用單克隆抗體

7.2.2.1.4 B.2.1.4 臨牀意義

免疫熒光法的敏感性是病毒分離培養法的70%~90%,是臨牀病例確診的依據。但陰性結果不能完全排除HSV感染,檢測結果應與臨牀表現及病史相結合。

7.2.2.2 B.2.2 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
7.2.2.2.1 B.2.2.1 材料與儀器

多采用HSV ELISA試劑盒,試劑盒提供了包括標本運送液、HSV單克隆抗體包被的微孔反應板、辣根過氧化物酶或鹼性磷酸酶標記的檢測抗體陰性對照液、陽性對照液、洗滌液、酶反應底物和顯色反應終止液等試劑。主要儀器有酶標儀、洗板機、恆溫培養箱

7.2.2.2.2 B.2.2.2 方法

操作步驟如下:

a)  預處理:將試劑盒及待檢標本恢復至室溫。

b)  加樣:設置空白陰性陽性對照。按要求在微孔中加入待檢標本陰性陽性對照液。

c)  加酶標記物:按要求加酶標記結合物,置35℃~37℃,溼盒內孵育。

d)  洗板:用當日配製的工作濃度洗滌液用洗板機進行洗滌,在吸水紙上拍打吸乾微孔中殘留液體。

e)  顯色:各孔加酶反應底物,置35℃~37℃,溼盒內孵育,避光顯色。

f)  測定:各孔加終止液,用酶標讀數儀在要求的波長下讀取OD值。

7.2.2.3 B.2.2.3 結果

每次試驗的陽性陰性對照OD值應在規定數值範圍內,根據要求計算設定閡值。標本OD值大於或等於閾值爲陽性,小於閾值爲陰性

7.2.2.4 B.2.2.4 注意事項

應選擇經過嚴格質量認證和臨牀評價的試劑盒,並嚴格按操作方法進行操作,不同批號試劑禁止混合使用。

7.2.2.5 B.2.2.5 臨牀意義

酶聯免疫吸附試驗敏感性是病毒分離培養法的85%~95%,特異性在95%以上,該試驗是臨牀病例確診的依據。陰性結果不能完全排除HSV感染,檢測結果應與臨牀表現及病史相結合。

7.2.3 B.3 單純皰疹病毒核酸擴增試驗

單純皰疹病毒核酸擴增試驗參見附錄C。

7.2.4 B.4 單純皰疹病毒特異性抗體檢測

單純皰疹病毒特異性抗體檢測參見附錄D。

7.3 附錄C(資料性附錄)單純皰疹病毒核酸擴增試驗

7.3.1 C.1 材料與儀器

多采用HSV實時熒光PCR試劑盒。試劑盒提供了包括DNA提取液、PCR反應管、陰性質控品、臨界陽性質控品、強陽性質控品、陽性定量參考品等。需要熒光定量PCR儀、高速離心機等主要儀器。

7.3.2 C.2 泌尿生殖道拭子標本核酸擴增方法

C.2.1 標本洗脫步驟如下:

a)  將待檢標本充分洗脫無菌生理鹽水中,12000 r/min離心5 min;

b)  去上清,在沉澱中加無菌生理鹽水1 mL,混勻,12000 r/min離心5 min。

C.2.2 DNA提取步驟如下:

a)  去上清,在沉澱中加入DNA提取液充分混勻,100℃水浴10 min,轉至4℃靜置。12000 r/min離心5 min,上清液備用。

b)  分別取陰性、臨界陽性強陽性質控品,加DNA提取液混勻,100℃水浴10 min,12000 r/min離心5 min備用。陽性定量參考品離心後備用。

C.2.3 加樣:取PCR反應管,按要求分別加入處理後的標本DNA提取液、陰性陽性質控品的上清液陽性定量參考品,離心後置實時熒光PCR儀。

C.2.4 擴增:按對應順序設置陰性陽性質控品以及待檢標本,並根據說明書要求設置樣品名稱、標記熒光基團種類和循環條件,進行擴增。

7.3.3 C.3 結果

C.3.1 反應結束後保存檢測數據文件。根據分析後圖像調節基線的起始值、終止值以及閾值,儀器自動判斷測定結果。

C.3.2 陰性質控品、陽性質控品、陽性定量參考品均應在有效範圍內,否則無效。增長曲線不呈S型或 Ct值=給定值陰性結果。增長曲線呈S型或Ct值<給定值陽性結果。

7.3.4 C.4 臨牀意義

實時熒光PCR敏感性和特異性均很高,且檢測速度快,可同時進行病毒分型,更適合臨牀標本檢測

7.3.5 C.5 注意事項

核酸擴增試驗應由經過專業培訓的實驗室人員嚴格按照試劑盒說明書要求進行。選擇使用經過國家食品藥品監督管理總局批准的試劑盒。

7.4 附錄D(資料性附錄)單純皰疹病毒特異性抗體檢測

7.4.1 D.1 材料與儀器

多采用型特異性抗體診斷試劑盒(ELISA或EIA試劑盒),試劑盒提供了包括血清稀釋液、HSV型特異性糖蛋白G包被的微孔反應板(條)、酶標記的檢測抗體陰性對照液、陽性對照液、洗滌液、酶反應底物、顯色反應終止液和閡值校準物等試劑。主要儀器有酶標儀、洗板機、恆溫培養箱

7.4.2 D.2 方法

操作步驟如下:

a)  將試劑盒或待檢標本恢復至室溫。

b)  標本稀釋:按試劑盒說明書要求,用標本稀釋液將標本陰性對照液、陽性對照液和閾值校準    物進行稀釋。

c)  按要求用洗滌緩衝液浸泡酶標板並吸乾。

d)  加樣:設置空白陰性陽性對照。按要求在微孔中加入己稀釋的標本陰性陽性對照液、    閾值校準物,室溫孵育。

e)  加酶標記物:洗板後按要求加酶標記結合物並室溫孵育。

f)  顯色:洗板後按要求加底物並室溫孵育,避光顯色。

g)  測定:加入終止液,用酶標讀數儀在要求的波長下讀取OD值。

7.4.3 D.3 結果

每次試驗的陽性陰性對照OD值應在規定數值範圍內,根據要求計算設定閾值。標本OD值大於或等於閾值爲陽性,小於閾值爲陰性

7.4.4 D.4 注意事項

選擇經過嚴格質量認證和臨牀評價的試劑盒,並嚴格按操作方法進行操作,不同批號試劑禁止混合使用。

7.4.5 D.5 臨牀意義

D.5.1 HSV型特異性血清抗體檢測對於生殖器皰疹具有輔助診斷價值,其臨牀意義應結合病史與臨牀表現來判定。

D.5.2 具有典型生殖器皰疹臨牀表現者,HSV 2型特異性血清抗體檢測陽性,具有支持性診斷價值。

D.5.3 複發性生殖器皰疹或臨牀症狀不典型者,應用病毒的直接檢測方法檢測陰性時,HSV 2型特異性血清抗體陽性有輔助診斷價值。

D.5.4 型特異性血清抗體檢測還可用於區分初發性生殖器皰疹是原發感染還是非原發感染,但需進行血清學隨訪。如初發時HSV 1型和2型特異性抗體陰性,而在隨訪過程中出現一種型特異性血清抗體陽轉,則可以判斷爲原發感染的初發性生殖器皰疹;如初發時HSV1型或2型的一種型特異性抗體陽性,而在隨訪過程中出現另一型別的血清抗體陽轉,則可以判斷爲非原發性感染的初發性生殖器皰疹。在夫妻或性伴HSV2型特異性抗體不一致時,抗體陰性一方的年感染率爲4%~10%。孕婦在臨近分娩時的原發性生殖器皰疹胎兒新生兒的影響,明顯高於HSV2型特異性抗體已經陽轉的孕婦。

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