WS/T 513—2016 生殖道沙眼衣原體感染診斷

1 拼音

W S / T 5 1 3 — 2 0 1 6 shēng zhí dào shā yǎn yī yuán tǐ gǎn rǎn zhěn duàn

2 英文參考

Diagnosis of genital chlamydia trachomatis infection

3 基本信息

ICS 11.020

C 59

中華人民共和國衛生行業標準WS/T 513—2016《生殖道沙眼衣原體感染診斷》（Diagnosis of genital chlamydia trachomatis infection）由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會於2016年11月29日《關於發佈〈尖銳溼疣診斷〉等3項推薦性衛生行業標準的通告》（國衛通〔2016〕18號）發佈，自2017年06月01日起實施。

4 發佈通知

關於發佈《尖銳溼疣診斷》等3項推薦性衛生行業標準的通告

國衛通〔2016〕18號

現發佈《尖銳溼疣診斷》等3項推薦性衛生行業標準，其編號和名稱如下：

WS/T 235-2016 尖銳溼疣診斷（代替WS 235—2003）

WS/T 237-2016 性病性淋巴肉芽腫診斷（代替WS 237—2003）

WS/T 513-2016 生殖道沙眼衣原體感染診斷

上述標準自2017年6月1日起施行，WS 235—2003、WS 237—2003同時廢止。

特此通告。

國家衛生計生委

2016年11月29日

5 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準起草單位：首都醫科大學附屬北京地壇醫院、首都醫科大學附屬北京佑安醫院、首都醫科大學宣武醫院、中國醫學科學院北京協和醫院、中國醫學科學院皮膚病研究所、廣東省皮膚性病防治中心。

本標準主要起草人：陳志海、倫文輝、吳昊、連石、鄭和義、王千秋、鄭和平、吳焱、朱威、劉安、宋蕊。

6 標準正文

生殖道沙眼衣原體感染診斷

6.1 1 範圍

本標準規定了生殖道沙眼衣原體感染的診斷依據、診斷原則、診斷標準和鑑別診斷。本標準適用於全國各級各類醫療衛生機構及其醫務人員對生殖道沙眼衣原體感染的診斷。

6.2 2 術語和定義

下列術語和定義適用於本文件。

2.1

衣原體  chlamydia

一類嚴格細胞內寄生、有獨特發育週期、能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。衣原體進入宿主細胞後增大繁殖成爲網狀體，再發育成熟爲小的、緻密的原體，釋放到細胞外感染新的宿主細胞。

注：根據衣原體的抗原結構和DNA同源性特點，衣原體屬分爲沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體等。根據主要外膜蛋白（MOMP）的不同，沙眼衣原體可分爲不同的血清型，其中D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K、Ga血清型主要感染生殖道，引起尿道炎、宮頸炎等。

2.2

生殖道沙眼衣原體感染  genital chlamydia trachomatis infection

由沙眼衣原體引起的以生殖道部位炎症爲主要表現的性傳播疾病，包括無症狀沙眼衣原體感染者和患者兩類。前者僅在實驗室檢查中發現沙眼衣原體，但無相應臨牀表現，後者同時具有生殖道症狀體徵。

2.3

萊特爾綜合徵  Reiter syndrome

感染後出現以結膜炎、尿道炎、關節炎爲特點的三聯症，多見於成年男性。

注：生殖道沙眼衣原體感染所致的萊特爾綜合徵一般發生在尿道炎之後4周左右，患者關節液中可分離到衣原體。

6.3 3 診斷依據

6.3.1 3.1 流行病學史

有不安全性行爲史，或性伴感染史，或多性伴史。

6.3.2 3.2 臨牀表現

6.3.2.1 3.2.1 男性生殖道沙眼衣原體感染

潛伏期平均1周～3周，多數感染者症狀輕微。有症狀者主要表現爲尿道刺痛或癢感，部分伴有輕重不等的尿頻、尿急、尿痛、排尿困難及陰莖體局部疼痛。尿道口輕度紅腫，可有少量稀薄漿液性或漿液膿性分泌物。長時間不排尿或晨起首次排尿前可見尿道口分泌物結成黏糊狀，或分泌物污染內褲。部分感染者併發前列腺炎、附睾炎。偶有感染者出現萊特爾綜合徵。

6.3.2.2 3.2.2 女性生殖道沙眼衣原體感染

潛伏期平均1周～3周，多數感染者症狀輕微。

有症狀者主要表現爲白帶異常及下腹部不適，可伴有輕度尿頻、尿急、尿痛。可見宮頸充血、水腫及漿液性或漿液膿性分泌物，觸之易出血。部分感染者併發急性輸卵管炎、子宮內膜炎、盆腔炎等。

6.3.3 3.3 實驗室檢查

3.3.1 塗片鏡檢，採樣方法見附錄A，塗片鏡檢方法見附錄B的B.1，判斷標準如下：

a) 男性尿道分泌物革蘭染色塗片檢查，平均每視野白細胞計數≥5個（油鏡10×100倍）。晨尿（前段尿15 mL）沉澱物檢查，平均每視野白細胞計數≥10個（高倍鏡10×40倍）。

b) 女性宮頸黏液膿性分泌物革蘭染色塗片檢查，平均每視野白細胞計數≥10個（油鏡10×100倍）。

3.3.2 對分泌物標本進行細胞培養，沙眼衣原體陽性，方法見附錄B的B.2。

3.3.3 對分泌物標本進行抗原檢測，沙眼衣原體抗原陽性，方法見附錄B的B.3。

3.3.4 對分泌物標本進行核酸擴增法檢測，沙眼衣原體核酸陽性，方法見附錄C。

6.4 4 診斷原則

根據流行病學史、臨牀表現及實驗室檢查進行綜合分析，作出診斷。

6.5 5 診斷標準

6.5.1 5.1 確定診斷

符合3.2、3.3.1表現，以及3.3.2、3.3.3、3.3.4中之一，同時有或無3.1。

6.5.2 5.2 無症狀感染

符合3.3.2、3.3.3、3.3.4之一，同時有或無3.1。

6.6 6 鑑別診斷

6.6.1 6.1 淋病

多數男性淋病患者臨牀表現明顯，起病急，白尿道口流出大量黃色膿性分泌物，呈急性尿道炎表現。多數女性淋病患者無明顯症狀，有症狀者表現爲膿性白帶、宮頸充血、尿道口充血和膿性分泌物等。分泌物塗片可見多形核白細胞，白細胞內可見革蘭陰性雙球菌。分泌物培養或核酸擴增法檢測淋球菌陽性。

6.6.2 6.2 其他

女性患者還應該注意與外陰陰道假絲酵母菌病、滴蟲性陰道炎、細菌性陰道病、生殖道支原體感染相鑑別。

7 附錄A（規範性附錄）生殖道沙眼衣原體標本採集方法

7.1 A.l 尿道標本採集方法

A.1.1 男性尿道拭子：將拭子插入男性尿道內2 cm～4 cm，旋轉拭子3 s～5 s後取出。

A.1.2女性尿道拭子：用手指自恥骨下方沿女性尿道走向輕輕按摩，觀察尿道口有無分泌物。將尿道拭子插入尿道內1 cm～2 cm，輕輕轉動後取出。

A.1.3採樣前應至少1h內不排尿。

7.2 A.2 宮頸標本採集方法

A.2.1 拭子採樣：清潔宮頸口外表面，然後將拭子插入宮頸內1 cm～1.5 cm處，輕輕壓迫並轉動拭子15 s～20 s後取出，獲取柱狀上皮細胞標本。拭子採樣時應避免碰到陰道壁。

A.2.2 細胞刷採樣：清潔宮頸口外表面，將細胞刷插入宮頸管內1 cm～1.5 cm處，旋轉數圈，停留數秒後取出。孕婦不應選擇細胞刷採樣方法。

7.3 A.3 尿液標本採集方法

A.3.1 採集清晨首次尿液或禁尿2 h～4 h後尿液，尿液量15 mL。

A.3.2 採集的尿液應置於無菌容器。24 h以內檢測的尿液，應置於4℃冰箱保存，超過24 h檢測時，應凍存於-20℃冰箱。

8 附錄B（規範性附錄）生殖道沙眼衣原體細胞學檢測和抗原檢測

8.1 B.l 塗片鏡檢

8.1.1 B.1.1 儀器材料包括：

a) 顯微鏡；

b) 革蘭染液、吉姆薩染液、丙酮；

c) 檢驗標本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子。

8.1.2 B.1.2 操作步驟如下：

a) 塗片固定：將標本均勻地塗布於載玻片上，空氣中自然乾燥；通過火焰固定後行革蘭染色；

b)染色方法包括：

1) 革蘭染色：結晶紫染色30 s～60 s，流水沖洗；

2) 碘液染色60 s，水洗；95%乙醇脫色30 s～60 s，水洗；

3) 用沙黃或鹼性復紅液復染30 s，水洗。

c) 鏡檢及結果判定方法爲：

1) 革蘭染色結果：使用100×油鏡檢查多形核白細胞；

2) 男性尿道分泌物平均每視野≥5個爲陽性，有臨牀意義；

3) 女性宮頸口黏液膿性分泌物平均每視野≥10個爲陽性，有臨牀意義。

8.2 B.2 細胞培養法

8.2.1 B.2.1 儀器材料包括：

a) 二氧化碳培養箱、倒置顯微鏡、培養瓶、培養板、圓形蓋玻片、恆溫離心機；

b) 敏感細胞株有McCoy、HeLa229或BHK-21細胞等；

c) 胰酶EDTA液、蔗糖-磷酸鹽標本運送培養基、衣原體生長培養基、衣原體分離培養基；

d) 染色液：碘染色液、吉姆薩染色液或衣原體熒光單克隆抗體試劑；

e) 檢驗樣本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子。

8.2.2 B.2.2 操作步驟如下：

a) 按照下列方法進行標本接種及感染細胞：

1) 取生長良好的單層細胞，加入0.5 mL～1 mL標本（凍存樣本先置於35℃水浴中速溶），每份樣本接種2孔；

2) 每板設陽性和陰性對照孔；

3)將接種後的培養板於22℃～35℃、3000×g條件下離心1h，去除標本液，每孔加衣原體培養基1 mL，培養48 h。

b) 染色鑑定方法包括：

1)碘染色：培養孔棄去培養液，每孔加入0.2 mL甲醇，固定感染細胞10 min，棄去甲醇後加碘液0.2 mL，染5 min～10 min，取出蓋玻片置顯微鏡下觀察結果；

2) 吉姆薩染色：培養孔棄去培養液，每孔加入0.2 mL甲醇，固定感染細胞10 min，棄去甲醇後加吉姆薩染液0.2 mL，染30 min，取出蓋玻片置顯微鏡下觀察結果；

3) 直接免疫熒光法：感染細胞的蓋玻片用甲醇固定10 min，棄去甲醇後加熒光標記單克隆抗體，37℃染30 min，洗滌數次，用鹼性甘油封片後熒光顯微鏡下檢查。

8.2.3 B.2.3 結果報告：

顯微鏡檢查，碘染色見細胞內深棕色包涵體，或吉姆薩染色見細胞內紫紅色包涵體，或熒光單抗染色見蘋果綠色熒光的包涵體和原體，均提示有沙眼衣原體生長。

8.2.4 B.2.4 注意事項如下：

a) 細胞培養法是診斷沙眼衣原體感染檢測的“金標準”，特異性可達100%，其敏感性依實驗室和樣本類型而不同；

b) 尿液、精液標本，以及患者使用抗生素或陰道製劑後採集的樣本，不宜做衣原體培養；

c) 第一孔染色陰性時，將第二孔進行盲傳，可增加1%～29%的陽性率；

d) 直接免疫熒光法敏感性優於碘染色和吉姆薩染色，培養36 h～48 h即可進行鑑定。

8.3 B.3 抗原檢測法

8.3.1 B.3.1 酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)

8.3.1.1 B.3.1.1 儀器材料包括：

a) 酶標儀、洗板機；

b)標本處理液、陽性對照、陰性對照、酶標抗體結合物、洗液、底物、終止液；

c) 檢驗樣本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子和尿沉渣等。

8.3.1.2 B.3.l.2 操作步驟如下：

a) 抗原提取：在標本中加入樣本處理液，振盪數秒鐘，充分混勻；取陽性和陰性對照，加入樣本處理液；將樣本和陰、陽性對照管置於95℃～100℃水浴中處理後冷卻至室溫；

b) 加樣：將陰、陽性對照和樣本分別加入酶標板中，孵育；

c) 加酶結合物：洗板後，加入酶標抗體，孵育；

d) 顯色：洗板後，加入底物，避光顯色數秒；

e) 終止：加入終止液，置酶標儀檢測各孔吸光值( ()D值）。

8.3.1.3 B.3.l.3 結果判定方法：

a) 計算陰性質控平均值及臨界值（cut-off值）；

b) 陽性：標本OD值大於或等於cut-off值；

c) 陰性：標本OD值小於cut-off值。

8.3.2 B.3.2 抗原快速檢測試驗（免疫層析試驗）

8.3.2.1 B.3.2.1 儀器材料包括：

a) 恆溫水浴箱；

b)抗原提取液、陽性質控物、陰性質控物、檢測板；

c) 檢驗樣本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子和尿沉渣等。

8.3.2.2 B.3.2.2 操作步驟如下：

a) 將拭子置於採集管內，加入抗原提取緩衝液；

b) 80℃恆溫水浴中作用5 min～8 min，放置室溫冷卻；

c) 在管壁旋轉擠壓拭子，充分釋放液體後棄去拭子；

d) 滴加標本提取物於檢測板的檢測窗，靜置規定時間。

注：靜置時間參考生產廠家的使用說明書。

8.3.2.3 B.3.2.3 結果判定方法：

a) 陽性：結果窗出現條帶，質控窗出現條帶；

b) 陰性：結果窗未出現條帶，質控窗出現條帶；

c) 試驗無效：質控窗未出現條帶。

8.3.3 B.3.3 直接免疫熒光法

8.3.3.1 B.3.3.1 儀器材料包括：

a) 熒光顯微鏡；

b) 熒光標記的抗沙眼衣原體單克隆抗體、陽性和陰性對照片、磷酸鹽緩衝液、鹼性甘油封片劑；

c) 檢驗樣本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子和尿沉渣等。

8.3.3.2 B.3.3.2 操作步驟如下：

a) 將標本均勻塗布於載玻片上，空氣中自然乾燥，甲酮固定10 min；

b) 標本、陰性和陽性對照載玻片中，各滴加熒光標記抗沙眼衣原體抗體30 μL，覆蓋整個標本；

c) 置於溼盒中，37℃孵育15 min；

d) 磷酸鹽緩衝液洗滌數次，空氣乾燥；

e) 滴加鹼性甘油後加蓋玻片，熒光顯微鏡（40×10倍）下觀察結果。

8.3.3.3 B.3.3.3 結果判定方法：

a) 陽性：每片可見≥10個單一針尖樣發蘋果綠熒光顆粒；

b) 可疑：每片可見<10個單一針尖樣發蘋果綠熒光顆粒，應重新採集樣本檢測；

c) 陰性：未發現典型發蘋果綠熒光顆粒。

9 附錄C（規範性附錄）生殖道沙眼衣原體核酸檢測

9.1 C.1 核酸擴增試驗

9.1.1 C.1.1 總述

通過擴增沙眼衣原體的7.5 kb隱蔽性質粒(cryptic plasmid)、主要外膜蛋白基因(ompl)和16SrRNA等靶基因來檢測病原體。ompl基因爲1.2 kb DNA，包括4個可變區和5個保守區，由於每個衣原體只有一個ompl基因，故用其檢測特異性高，但敏感性稍差；隱蔽性質粒爲7.5 kb DNA，每個衣原體含有7～10個拷貝，故檢測的敏感性較高；16sRNA數量與衣原體繁殖及活躍程度相關，檢測敏感性主要取決於模板RNA的提取效果。目前主要使用的方法爲實時熒光聚合酶鏈式反應(PCR)。

9.1.2 C.1.2 實時熒光PCR技術

9.1.2.1 C.1.2.1 儀器材料包括：

a) 熒光PCR儀。

b) 檢驗樣本：男性尿道拭子、女性宮頸拭子和尿沉渣等。

c) 擴增引物設計：沙眼衣原體隱蔽性質粒引物設計位置常見於5個區域，分別於202～943、1206～1965、2539～3222、5308～5802和6787～7499。如擴增區域270～378的引物與探針，上游：5'-CAG CTT GTA GTC CTG CTT GAG AGA-3'，下游：5'- CAA GAG TAC ATCGGT CAA CGA AGA-3',TaqMan探針：FAM-5'-CCC CAC CAT TTT TTC CGG AGC GATAMRA -3'。ompl引物設計，如擴增區域199～414的引物：上游：5'-GAC TTT GTT TTCGAC CGT GTT-3'，下游：5'-ACA RAA TAC ATC AAR CGA TCC CA-3'，TaqMan探針：FAM-MGB-5'-ATC TTT ACV AAY GCY GCT T- TAMRA 3'。

d) DNA抽提液，PCR反應液，臨界陽性質控標準品，陰性和陽性質控品。

9.1.2.2 C.1.2.2 操作步驟如下：

a) DNA提取（可使用商品化DNA提取試劑盒按說明進行提取）：將標本充分洗脫至無菌生理鹽水中，離心沉澱；沉澱中加DNA提取液並充分混勻，沸水浴處理10 min，轉至4℃靜置以保證充分裂解；離心沉澱，取上清液做PCR反應模板液；質控品處理：取陰、陽性對照質控標準品加DNA提取液混勻，提取DNA方法同標本。

b) 加樣：根據待檢測樣本數量將PCR反應液分裝至PCR反應管中，然後分別加入已處理好的待檢樣品，陰性和陽性質控標準品，以及臨界陽性質控標準品，加蓋後離心數秒鐘。

c)PCR擴增：將各反應管放入實時熒光PCR儀，按對應順序設置陰陽性質控標準品以及未知標本，並設置樣品名稱、標記熒光基團種類和擴增條件。設置擴增參數：依據試劑盒和儀器的不同而有所不同，如95℃變性5 min，以95℃30 s、60℃30 s擴增40個循環，在60℃進行熒光檢測。

9.1.2.3 C.1.2.3 結果判定方法：

a)根據分析後圖像調節基線起始、終止值以及閾值。閾值設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照擴增曲線的最高點，或可根據儀器噪音情況進行調整。

b)儀器自動判斷測定結果。

9.2 C.2 質量控制

C.2.1 制定實驗室質量保證與質量控制計劃。

C.2.2 建立實驗室質量控制制度。

C.2.3 定期參加實驗室室間檢測能力驗證活動。

10 標準下載

WS/T 513—2016 生殖道沙眼衣原體感染診斷

11 解讀

《非淋菌性尿道炎診斷標準和處理原則》對非淋菌性尿道炎的合理診治起到了很重要的指導作用，當前醫學界對非淋性尿道炎的概念、檢測、治療等方面的認識都有了很大的變化。現在已經基本不再使用非淋菌性尿道炎這一名稱，代之以生殖道沙眼衣原體感染，診斷方法和治療方案也取得一定進展。因此，有必要制定《生殖道沙眼衣原體感染診斷標準》。本標準的制定將爲生殖道沙眼衣原體感染的臨牀診治工作提供指導，爲其流行病學監測和疫情報告提供診斷依據。

本標準適用於全國各級各類醫療衛生機構及其醫務人員對生殖道沙眼衣原體感染的診斷。主要依據《中華人民共和國傳染病防治法》，參考中國疾病預防控制中心性病控制中心編寫的《性傳播疾病臨牀診療指南》（2007）、美國《性傳播疾病治療指南》（2010）等，結合我國性病診治臨牀實踐而制定。其內容主要包括前言、範圍、術語和定義、診斷原則、診斷依據、診斷標準、鑑別診斷及三個規範性附錄。

在診斷標準中，設置了“確定診斷”和“無症狀感染”，沒有設置“疑似診斷”和“臨牀診斷”。生殖道沙眼衣原體感染的臨牀表現缺乏特異性，如果設置“疑似診斷”和“臨牀診斷”，可導致各種生殖道感染均進入疑似診斷及臨牀診斷。在目前技術進步和普及條件下，快速、準確診斷成爲可能，故只設置“確定診斷”和“無症狀感染”，以提高診斷的準確性，減少誤診。