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PCR实验技术
3.促进PCR的添加剂退火温度,引物设计和镁离子浓度的优化足以对大多数模板进行高特异性的扩增,但是,某些模板,包括高GC含量的模板,需要其他的措施。所有的加样器和吸头需固定放于其中,不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA:1.PCR用水应为高压的双蒸水;下一个部份将讨论此类系统中的变性甲酰胺梯度凝胶系统。
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淋病
淋球菌对不同细胞敏感性不同,对前尿道粘膜的柱状上皮细胞最敏感。(四)淋菌性心内膜炎:抗生素使用前几十年中,淋球菌是心内膜炎的主要病原体,目前淋菌性心内膜炎几乎见不到,淋菌性心内膜炎和其他类型心内膜炎有相同的临床表现。咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病,因为其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。
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WS 216—2018 登革热诊断
b)符合5.1,并同时符合3.3.2、3.3.3中任一项。A.1.2材料和试剂:所需材料和试剂如下:a)洗板机、酶标仪、恒温温箱或水浴箱(37℃±2℃);B.2应用乳小白鼠分离登革病毒:B.2.1原理:新生小白鼠对登革病毒十分敏感,根据观察病毒对其产生的致病等现象和应用特异、敏感的检测技术,检出病毒的存在和型别。3日龄乳小白鼠。
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WS/T 571—2017 裂头绦虫幼虫检测
基本信息:ICS11.020C62中华人民共和国卫生行业标准WS/T571—2017《裂头绦虫幼虫检测》(Detectionofdiphyllobothroidlarvae)由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会2017年8月1日《关于发布〈钉螺调查〉等9项推荐性卫生行业标准的通告》(国卫通〔2017〕11号)发布,自2018年2月1日起实施。琼脂糖凝胶;
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分子标记
分子标记的概念有广义和狭义之分。但它的技术费用昂贵,对DNA的纯度和内切酶的质量要求很高。CAPS的基本原理是利用己知位点的DNA序列资源设计出一套特异性的PCR引物(19—27bp),然后用这些引物扩增该位点上的某一DNA片段,接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得扩增产物,凝胶电泳分离酶切片段,染色并进行RFLP分析。
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端粒酶活性
概述:端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构,由一富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成。试剂:聚合酶链反应的基本条件包括纯化的DNA或RNA基因组,用于合成DNA的单核苷酸,寡聚核苷酸引物DNA聚合酶,各种缓冲液,快速改变温度的能力及专用检测系统。端粒酶有可能成为诊断肝癌的肿瘤标志物。
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杨梅疮
晚期梅毒的树胶肿其肉芽肿样病理变化,细胞反应与迟发型变态反应相似,损害中很少见到梅毒螺旋体,几乎都是细胞浸润的免疫病理作用所致,细胞免疫反应还可在全身见到,如淋巴结病,外周血单核细胞增加,吞噬能力增强。梅毒性白斑,多见于妇女患者。湿丘疹、扁平湿疣及已破溃脓疱的糜烂面均有大量梅毒螺旋体。
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梅毒
2.晚期胎传梅毒患儿发育不良,智力低下,可有前额圆凸,镰刀胫,胡氏齿,桑椹齿,马鞍鼻,锁骨胸骨关节骨质肥厚,视网膜炎,角膜炎,神经性耳聋,脑脊液异常,肝脾肿大,鼻或腭树胶肿导致口腔及鼻中隔穿孔和鼻畸形。梅毒性白斑,多见于妇女患者。湿丘疹、扁平湿疣及已破溃脓疱的糜烂面均有大量梅毒螺旋体。
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定点突变
概念定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。)正反向引物的延伸产物退火后配对成为带缺刻的开环质粒。单酶切反应产物,直接转化EcoliBMH71-18mutS(错配修复缺陷株)。
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WS/T 594—2018 蝇类抗药性检测方法 家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法
2.3342G、342V和342A:342G、342V和342A分别表示家蝇乙酰胆碱酯酶第342氨基酸残基位点上的氨基酸为甘氨酸(Gly)、缬氨酸(Val)和丙氨酸(Ala)。引物设计参照附录A。图D.1家蝇乙酰胆碱酯酶342位点不同基因型PCR产物的酶切结果标准下载:WS/T594—2018蝇类抗药性检测方法家蝇不敏感乙酰胆碱酯酶等位基因检测法.
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WS 283—2020 炭疽诊断
A.1.2血液标本:所有疑似病例,都应无菌操作采集血液标本5mL,用于显微镜检查、培养、抗原和核酸检测,并留取血清做抗体检测。在焦痂期,用两根生理盐水湿润的无菌棉签在焦痂处反复涂抹。可疑菌落也可进行核酸检测,检出炭疽芽胞杆菌特异性核酸片段可判定为炭疽芽胞杆菌(见附录D)。酶标板置37℃湿盒中孵育60min。
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WS/T 381—2021 囊尾蚴病诊断标准
引物序列见表D.1。2)具有头痛、头晕、癫痫、颅内压升高、精神或神经性症状等临床表现或查见黄豆大小囊性病变、脑实质多发钙化等非典型异常影像疑似病例,同时符合抗体检测阳性、诊断性治疗有效或囊性病变中查见头节的典型影像中任何一项临床诊断病例,同时符合病原或核酸检测阳性眼囊尾蚴病1)流行病学史;
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猪囊尾蚴病
定义:囊尾蚴病(cysticercosis)又称猪囊尾蚴病、囊虫病,是由猪囊尾蚴寄生于人体所致的一种人兽共患寄生虫病。退变死亡期:囊尾蚴退变死亡时,头节显示不清,囊内容物蛋白含量增多,在T1WI及FLAIR图像上囊泡信号增高,T2WI图像上信号减低,囊壁增厚,病灶周围出现进行性水肿,占位效应加重;2.猪囊尾蚴核酸检测阳性。
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囊尾蚴病
定义:囊尾蚴病(cysticercosis)又称猪囊尾蚴病、囊虫病,是由猪囊尾蚴寄生于人体所致的一种人兽共患寄生虫病。退变死亡期:囊尾蚴退变死亡时,头节显示不清,囊内容物蛋白含量增多,在T1WI及FLAIR图像上囊泡信号增高,T2WI图像上信号减低,囊壁增厚,病灶周围出现进行性水肿,占位效应加重;2.猪囊尾蚴核酸检测阳性。
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WS 273—2018 梅毒诊断
4.2.3实验室检查:4.2.3.1暗视野显微镜检查、镀银染色检查或核酸扩增试验:二期梅毒皮损如扁平湿疣、湿丘疹及黏膜斑,其刮取渗液可查见梅毒螺旋体,或核酸扩增试验检测梅毒螺旋体核酸阳性(见A.1、A.2、A.3)。对一期梅毒的敏感性为74%~阴性报告:血清与致敏颗粒和未致敏颗粒均不发生凝集反应。树胶肿同皮肤树胶肿。
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解脲脲原体
第三步延伸:在合适缓冲液,即镁离子和4种脱氧核苷酸存在的条件下,DNA聚合酶能忠实地根据模板碱基序列合成互补链,从引物的3'端进行延伸,合成的方向为5'→3',从而合成与原来结构相同的基因片段2分子。加数滴液体石蜡防止蒸发。相关疾病:尿道炎、不孕症、非特异性尿道炎、早产、新生儿化脓性脑膜炎、化脓性脑膜炎
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WS/T 590—2018 基孔肯雅热诊断
g)按50 L/孔加入辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,37℃湿盒孵育1h,洗板5遍。A.2.3检测方法:按以下步骤操作:a)取出抗原片,平衡至室温;B.2.2.4结果判断:RT-PCR扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测,如果条带的分子量与预期片段大小(330bp)相同,可判定CHIKV核酸扩增阳性。一般无关节痛症状。数天后消退。
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WS/T 785—2021 人类白细胞抗原基因分型检测体系技术标准
3.3基于序列特异性引物的基因分型sequence-specificprimer,SSP采用等位基因特异性引物进行核酸扩增的基因分型方法。d)凝胶电泳时核酸染料没有混合均匀或浓度不足,应重新配制凝胶或核酸染料溶液。b)微珠混合不均匀,应确保每一步骤严格按照标准操作规程进行;应使用带滤芯吸头以防移液器管腔被气溶胶污染。
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流行性感冒病毒核酸检测试剂注册申报资料指导原则
(6)RT-PCR各阶段的温度、时间设置、循环数设置及相关注意事项。在进行最低检测限的确认时,参与研究的甲型流感病毒各亚型和乙型流感病毒应至少包括不同来源的两个具有代表性的病毒株的系列稀释梯度。申请人应对内部阳性/阴性参考品的来源、型别鉴定、病毒滴度等信息进行精确的实验验证,并提交详细的验证资料。
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WS/T 564—2017 巴贝虫病诊断
典型形态为梨形,常在一个红细胞内有多个虫体寄生,以1~D.1.2.2瑞氏染色:在薄血膜上加瑞氏染液5~在包被巴贝虫抗原的96微孔板中加入稀释的待检样品100μL(复孔检测),设阳性对照2孔,阴性对照2孔,并设空白对照2孔,置37℃孵育30min。弃去孔内液体,用洗涤液洗涤3次,每次间隔1mm,甩干。其热型为稽留或驰张型。
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WS/T 487—2016 隐孢子虫病的诊断
人摄入卵囊后,在消化液的作用下卵囊内子孢子逸出,附着并侵入肠上皮细胞的微绒毛区(刷状缘层内),形成纳虫泡,虫体在纳虫泡内行裂体增殖,发育为滋养体,经3次核分裂发育为Ⅰ型裂殖体。再滴加10%硫酸溶液至涂片呈粉红色为止(脱色1min~D.1.4.2染色方法先进行金胺酚染色后,再用改良抗酸染色法复染。
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尖锐湿疣
4.核酸杂交可检出HPV-DNA相关序列,PCR检测可见特异性HPV-DNA扩增区带。细胞免疫比体液免疫更为重要。宫颈CA和宫颈上皮内瘤样病变(CIN)病损中朗格罕细胞明显减少。二、免疫组织学检查常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。每支反应管中含有的PCR反应试剂见表3。
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WS/T 235—2016 尖锐湿疣诊断
其宿主细胞为人皮肤黏膜的鳞状上皮细胞。6鉴别诊断:尖锐湿疣应与阴茎珍珠状丘疹、绒毛状小阴唇、皮脂腺异位症、二期梅毒、鲍恩样丘疹病、生殖器鳞状细胞癌、传染性软疣等鉴别诊断(参见附录C)。除了实时荧光PCR检测方法外,还有核酸扩增流式荧光检测、微板杂交捕获检测、基因芯片检测等不同原理的HPV核酸检测试剂盒。
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2010年版药典三部附录Ⅸ
测定法:精密量取DNA标准品溶液和供试品溶液各400μl于1.5ml离心管中,分别加入新配制的双链DNA荧光染料400μl,混匀后,避光室温放置5分钟。测定法:取兔抗大肠杆菌菌体蛋白质抗体适量,用包被液溶解并稀释成每1ml中含10μg的溶液,以100μl/孔加至96孔酶标板内,4℃放置过夜(16~(6)溶血素兔抗羊红细胞血清。
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WS/T 562—2017 克-雅病诊断
200mA稳流70min(湿式)或60mA60min(半干式)电转移到硝酸纤维素膜。o)加第二抗体(用1:100正常羊血清/PBS稀释)孵育30min,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗兔抗体1:200稀释,用于多克隆抗体检测;扁桃体活检组织提取物经蛋白酶K水解后仍在17KD~b)血液样品储存应为-70℃,在此条件下DNA样品可长期保存。
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WS/T 513—2016 生殖道沙眼衣原体感染诊断
2.2生殖道沙眼衣原体感染genitalchlamydiatrachomatisinfection由沙眼衣原体引起的以生殖道部位炎症为主要表现的性传播疾病,包括无症状沙眼衣原体感染者和患者两类。可见宫颈充血、水肿及浆液性或浆液脓性分泌物,触之易出血。将尿道拭子插入尿道内1cm~3)女性宫颈口黏液脓性分泌物平均每视野≥10个为阳性,有临床意义。
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WS 296—2017 麻疹诊断
b)出疹后3d内采集的血标本检测麻疹IgM抗体阴性,合格咽拭子/尿液标本中麻疹病毒核酸阴性,且不符合3.1.1和/或3.1.2;微波炉加热使琼脂糖熔化;5d,自耳后、发际、前额、面、颈部开始自上而下波及躯干和四肢手掌足底,疹间皮肤正常,皮疹初为淡红色斑丘疹,以后部分融合成暗红色,出疹时体温达到高峰,全身症状加重;
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逆转录聚合酶链反应
逆转录聚合酶链反应(ReversetranscriptionPCR;RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、OligodT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
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RT-PCR
逆转录聚合酶链反应(ReversetranscriptionPCR;RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、OligodT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
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EBLV-1
EBLV-1分类类型:种分类:单分子负链RNA病毒目弹状病毒科狂犬病毒属欧洲蝙蝠病毒1型GeneBank编号:[U22845,U22844,AF049113,AF049117]欧洲蝙蝠狂犬病毒的发现:一位名叫大卫·麦克雷的56岁英国艺术家和野生动物保护者11月24日因为狂犬病而死于医院,但让他感染上狂犬病毒的,却是他研究了15年之久的蝙蝠。
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欧洲蝙蝠病毒1型
EBLV-1分类类型:种分类:单分子负链RNA病毒目弹状病毒科狂犬病毒属欧洲蝙蝠病毒1型GeneBank编号:[U22845,U22844,AF049113,AF049117]欧洲蝙蝠狂犬病毒的发现:一位名叫大卫·麦克雷的56岁英国艺术家和野生动物保护者11月24日因为狂犬病而死于医院,但让他感染上狂犬病毒的,却是他研究了15年之久的蝙蝠。
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非特异性尿道炎
婴儿在通过产道时可发生生殖器的支原体移生(colonization),1/3的女婴在生殖道可分离到脲原体,而人型支原体仅在少部分婴儿中分离到。未治疗的宫颈衣原体感染可持续1年或更长时间,且会出现各种临床表现和并发症,如尿道炎、急性尿道炎综合征、子宫内膜炎、成人沙眼衣原衣原体眼部感染等。
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NGU
婴儿在通过产道时可发生生殖器的支原体移生(colonization),1/3的女婴在生殖道可分离到脲原体,而人型支原体仅在少部分婴儿中分离到。未治疗的宫颈衣原体感染可持续1年或更长时间,且会出现各种临床表现和并发症,如尿道炎、急性尿道炎综合征、子宫内膜炎、成人沙眼衣原衣原体眼部感染等。
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非淋球菌性尿道炎
婴儿在通过产道时可发生生殖器的支原体移生(colonization),1/3的女婴在生殖道可分离到脲原体,而人型支原体仅在少部分婴儿中分离到。未治疗的宫颈衣原体感染可持续1年或更长时间,且会出现各种临床表现和并发症,如尿道炎、急性尿道炎综合征、子宫内膜炎、成人沙眼衣原衣原体眼部感染等。
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反转录病毒科
病毒复制开始以tRNA的3’末端为引物,用反转录酶将病毒RNA反转录成负链cDNA转录本,起始的短序列转移,通过RNA的双倍体末端序列的功能,从基因组的3’端进一步合成cDNA。整合的原病毒使用细胞RNA聚合酶II转录成病毒粒子RNA和对病毒LTRs信号响应的mRNA。一些囊膜糖蛋白的型决定子涉及病毒中和介导的抗体。
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乙型脑炎减毒活疫苗
乙型脑炎减毒活疫苗药典标准:品名:中文名:乙型脑炎减毒活疫苗汉语拼音:YixingNaoyanJianduHuoyimiao英文名:JapaneseEncephalitisVaccine,Live定义、组成及用途:本品系用乙型脑炎(简称乙脑)病毒减毒株接种于原代地鼠肾细胞,经培养、收获病毒液,加入适宜稳定剂冻干制成。
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WS/T 237—2016 性病性淋巴肉芽肿诊断
——在实验室检查部分中增加核酸检测与分型鉴定(见4.3.3);LGV由Ll、L2、L3血清型沙眼衣原体感染生殖器、肛门直肠部位所致的,以局部化脓性淋巴结病或出血性直肠炎为主要特征的一种慢性性传播疾病。d)用滤纸吸干水分,将盖玻片的细胞面朝下,放于滴加有封固液的洁净载玻片上,置荧光显微镜下观察(10×40倍)。
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卡介菌多糖核酸注射液
若有可疑病灶时,应做涂片和组织切片检查,并采取部分病灶磨碎,加少量生理氯化钠溶液混匀,由皮下注射2只豚鼠,若证实系结核病变,该菌种即应废弃。2.2.2菌种传代与培养:启开工作种子批菌种,在苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培养基以及液体苏通培养基上每传1次为1代。版本:《中华人民共和国药典》2010年版第二增补本
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定量PCR技术
由于样本与阳性参照在一个容器内反应,用同样的Taq酶和反应参与物,存在竟争性抑制,起始模板量浓度高的反应会抑制起始模板量浓度低的反应,所以定量不准。在探针相邻两个碱基上分别结合两个荧光染料,一个染料接受激发光得到的能量传给了第二个染料,接受能量的第二个染料通过发射特征光子回到稳定态。
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新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第三版)
出现眼部感染症状的病例,需采集眼结膜拭子标本;出现腹泻症状的病例,需留取便标本。标本种类:1.上呼吸道标本:包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物等。将收集器头部插入鼻腔或气管,接通负压,旋转收集器头部并缓慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采样液冲洗收集器1次(亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集器)。
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新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南(第二版)
标本种类:1.上呼吸道标本:包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物。3.血液标本:尽量釆集发病后7天内的急性期抗凝血。将收集器头部插入鼻腔或气管,接通负压,旋转收集器头部并缓慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采样液冲洗收集器1次(亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集器)。(四)灭活材料的操作。
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基因探针
基因探针(probe)就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;有了mRNA作模板后,在逆转录酶的作用下,就可以合成与之互补的DNA(即cDNA),cDNA与待测基因的编码区有完全相同的碱基顺序,但内含子已在加工过程中切除。
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诺瓦克病毒性胃肠炎
但是目前众多学者的研究表明,该病毒在基因组结构、编码蛋白及病毒的形态结构上都与杯状病毒最相似,故在病毒分类上已经归于杯状病毒科(Calieiviridae)。使上皮细胞酶活性发生改变,引起糖类及脂类吸收障碍,导致肠腔内渗透压增高,体液进入肠道,从而出现腹泻和呕吐症状。鉴别诊断:本病与细菌性、寄生虫性腹泻不难鉴别;
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H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)
1.2.样本裂解及核酸吸附1.2.1在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液,加入200μl待处理样本,剧烈震荡2分钟,室温静置10分钟。1.3.2在核酸吸附柱中加入500μl洗液B,静置1分钟,6000g离心1分钟。如果该份样本的RNP检测Ct值≥33.0,可能为以下原因:3.1未采集到足够的正常人上皮细胞,应重新采样。
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WS/T 633—2018 巴贝虫检测 虫种核酸鉴定法
PROGRAM=blastnPAGE_TYPE=BlastSearchLINK_LOC=blasthome),根据序列的相似度,判断样本所扩增序列的巴贝虫种类:a)18SrRNA基因序列与GenBank中巴贝虫18SrRNA序列相似度96%以上,或是ITS基因序列与GenBank中ITS序列相似度95%以上,判定为巴贝虫;
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2010年版药典一部附录XVIII
设定限值:热原和细菌内毒素检查的限值根据临床1小时内最大用药剂量计算。100cfu的孢子悬液。采用平皿法或薄膜过滤法(照2010年版药典一部附录XIIIC微生物限度检查法,其中测定细菌用胰酪胨大豆琼脂培养基,测定真菌用沙氏葡萄糖琼脂培养基)测定每份供试品中所含的菌数。50℃的水浴中,不得超过8小时。
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WS 588—2018 手足口病诊断
f)孵育:用封板膜封板后,37℃孵育30min;A.1.4试剂对照范围:A.1.4.1阴性对照OD值≤0.1。附录B(规范性附录)手足口病相关肠道病毒核酸检测:B.1RT-PCR法检测肠道病毒核酸:B.1.1试验材料:B.1.1.1可用于手足口病肠道病毒检测的临床标本:鼻咽拭子、肛拭子、粪便、疱疹液、脑脊液或尸检标本,或其病毒分离培养物。
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医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序
可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中,以便提高检出率。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等,如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性,或弱阳性质控样本来源困难,可暂不设弱阳性质控。将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱,重新离心一次,弃套管中的液体。