血液葡萄糖

血液生化檢查 化驗及醫學檢查 糖類測定

心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

xuè yè pú táo táng

2 英文參考

blood-glucose

blood sugar

3 概述

血清葡萄糖,其測定方法有鄰甲苯胺法、葡萄糖氧化酶法、已糖激酶法、葡萄糖脫氫酶法和幹化學法。其中已糖激酶法爲國際推薦的參考方法,但試劑比較昂貴,我國推薦的葡萄糖氧化酶法在國內外應用甚廣,目前有些單位仍沿用鄰甲苯胺法。

4 血液葡萄糖醫學檢查

4.1 檢查名稱

血液葡萄糖

4.2 分類

血液生化檢查 > 糖類測定

4.3 血液葡萄糖的測定原理

(1)葡萄糖鄰甲苯胺(O~TB)法測定:葡萄糖與鄰甲苯胺在強酸溶液中加熱;葡萄糖醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺,後者脫水生成席夫氏(Schiff)鹼,再經結構重排列,生成有色化合物吸收峯在630nm。

(2)葡萄糖氧化酶(GOD)法:葡萄糖氧化酶(GOD)能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,併產生一分子過氧化化氫。在過氧化物酶(POD)和色原性氧受體(如聯大茴香胺,4-氨基安替比林偶聯酚)的存在下,過氧化化氫分解,釋放出初生態氧,氧化色素原,生成有色化合物。其反應如下:

醌亞胺在480~550nm波長有最大吸收,所產生的顏色強度與血清葡萄糖量成正比,與同樣處理的標準液比較,經計算可求出血葡萄糖的含量。

4.4 試劑

4.4.1 (1)葡萄糖鄰甲苯胺(O~TB)法測定

①鄰甲苯胺試劑:940ml冰醋酸中加入硫脲1.5g,鄰甲苯胺60ml混合,直至硫脲完全溶解,置棕色瓶中,室溫保存。新配試劑應放置24h後(待老化)使用。此試劑腐蝕性極強,避免接觸皮膚,應用自動吸管加液。

②12mmol/L苯甲酸溶液:於900ml蒸餾水中加入苯甲酸(MW=122.12)1.46g加熱助溶,冷卻後置於1L容量瓶中,加蒸餾水至刻度。

葡萄糖標準貯存液及應用液:同血清葡萄糖氧化酶法。

4.4.2 (2)葡萄糖氧化酶(GOD)法

可用成套試劑盒,也可自己配製,配製方法如下:

①0.1mol/L(pH7.0)磷酸緩衝液溶解無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g於800ml蒸餾水中,用1mol/L氫氧化鈉鹽酸調節pH至7.0,然後蒸餾水稀釋至1L。

②酶試劑:取葡萄糖氧化酶1200U,過氧化物酶1200U,4-氨基安替比林10mg,疊氮鈉100mg,加上述磷酸緩衝液至80ml左右,調節pH至7.0,加磷酸緩衝液至100ml。置冰箱保存,至少可穩定3個月。

③酚試劑:重蒸餾酚100mg溶於100ml蒸餾水中(酚在空氣中氧化成紅色,可先配成500g/L的溶液,用時稀釋)。貯存於棕色瓶中。

④酶酚混合試劑:酶試劑及酚試劑等量混合,在冰箱內可以存放一個月。

葡萄糖標準貯存液(100mmol/L):無水葡萄糖(預先置80℃烤箱內乾燥恆重,移置於乾燥器內保存)。稱取1.802g,以12mmol/L苯甲酸溶液溶解並移入100ml容量瓶內,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至100ml刻度處,放置2h後方可應用。

葡萄糖標準應用液(5mmol/L):吸取葡萄糖標準貯存液5ml,於100ml容量瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度,混勻。

4.5 操作方法

(1)葡萄糖鄰甲苯胺(O~TB)法測定:

取數支16mm×150mm試管,按表1進行操作。

混勻後,置沸水中,加熱12min,取出置冷水中冷卻5min。分光光度計波長630nm,比色杯光徑1.0cm,空白管調零比色,讀取標準管與測定管吸光度。

(2)葡萄糖氧化酶(GOD)法:

取數支16mm×100mm試管,按表2進行操作。

混勻,置37℃水浴中,保溫15min,用分光光度計波長505nm,比色杯光徑1.0cm,以空白管調零比色,分別讀取標準管及測定管吸光摩。

4.6 正常值

(1)空腹:

①鄰甲苯胺法(O-TB):   3.89~6.11mmol/L

葡萄糖氧化酶法(GOD):3.89~6.11mmol/L

分光光度法(AAS):    3.88~5.8 mmol/L

④自動生化儀:         3.89~6.11mmol/L

(2)進食後2h:<6.7mmol/L   (<120mg/dl)

4.7 化驗結果臨牀意義

(1)升高

胰島素分泌不足:真性糖尿病

糖類皮質激素增多:肢端肥大症甲狀腺功能亢進庫欣綜合徵巨人症等。

腎上腺素過多:嗜鉻細胞瘤

④肝攝取減少:肝硬化、重症肝炎、血色病

⑤顱內壓升高:腦外傷腦瘤腦出血、重症化膿性腦膜炎等。

維生素B1缺乏:Wernicke腦病(腦性出血性腦灰質炎)。

胰腺癌、急慢性胰腺炎胰島α細胞瘤等。

應激狀態:燒傷休克、感情創傷麻醉等。

藥物與化學毒物中毒咖啡因、茶鹼、ACTH、一氧化化碳和重金屬中毒等。

(2)降低:

胰島素分泌過多:胰島β細胞瘤、胰外腫瘤腎上腺癌、胃癌纖維肉瘤)、傾倒綜合徵、早期糖尿病功能血糖過低症、滋養性血糖過低症、胰高血糖素缺乏症等。

②對抗胰島素內分泌不足:垂體前葉功能減退症、艾迪生病、胰島α細胞功能減退症、甲狀腺功能減退症呆小症、黏液性水腫)。

肝臟葡萄糖供應不足:原發性肝癌肝硬化後期、重症肝炎、重症脂肪肝糖原貯積病(Von Gier Ke病)、半乳糖血症、長期營養不良等。

④其他:蛛網膜下腔出血、腦炎後綜合徵荔枝病、亮氨酸過敏、食物攝入不足、運動、飢餓、藥物(服用胰島素或降糖藥過量)。

4.8 附註

(1)葡萄糖鄰甲苯胺(O~TB)法測定:

①除葡萄糖外,其他糖在反應過程中亦能產生有色化合物,它們吸光度比率分別爲:葡萄糖=1.00;果糖=0.06;甘露糖=0.96;半乳糖=1.42;蔗糖=0.16;麥芽糖=0.09;乳糖=0.39;木糖=0.12。但是,在這些糖中葡萄糖果糖半乳糖存在於正常人血清,而後者在正常人血液中含量甚微,不影響實際測定結果。

②測定液的顯色強度與反應條件有關,鄰甲苯胺批號、鄰甲苯胺試劑的新、老(如試劑配製後過久,顏色變淺)以及加熱溫度和加熱時間等都會影響顯色強度。因此,測定管,標準管、空白管的加熱時間與溫度必須完全一致。每批測定管數不宜過多,以便能較好地控制反應條件。有些批號冰醋酸會產生棕色反應,影響測定結果。

③最終反應液偶爾會產生混濁,最常見原因是高脂血症。此時,可向3ml顯色液中加入1.5ml異丙醇,充分混勻,溶解脂質可消除濁度,所測吸光度乘以1.5。注射右旋糖酐時,由於右旋糖酐不溶於鄰甲苯胺試劑而產生混濁。冷水浴太冷時也可出現混濁。

④輕度溶血不影響測定,但1g/L血紅蛋白能假性增高葡萄糖測定結果

0.11mmol/L,膽紅質也能增高測定管吸光度,342μmol/L膽紅質能假性增高葡萄糖測定結果1.39mmol/L,血標本中含有EDTA(>1mg/ml),氟化鈉(>5mg/ml)時,能增高顯色強度,麝香草酚抑制顏色生成。

⑤鄰甲苯胺法的測定結果基本上與葡萄糖氧化酶法和已糖激酶法相同,但尿毒症患者,鄰甲苯胺法的測定結果略有偏高。

⑥鄰甲苯胺試劑有毒並有致癌性,操作應避免皮膚接觸或直接吸入

(2)葡萄糖氧化酶(GOD)法:

葡萄糖氧化酶對β-D葡萄糖高度特異,溶液葡萄糖約36%爲α型,64%爲β型。葡萄糖的完全氧化需要從α型到β型的變旋反應。國內某些商品葡萄糖氧化酶試劑盒含葡萄糖變旋酶,可加速這一反應,但在終點法中延長孵育時間可達到完成自發變旋過程。新配製的葡萄糖標準液主要是α型,故須放置2h以上(最好過夜),待變旋平衡後方可應用。

葡萄糖氧化酶法測定的特異性較高,能干擾測定結果的物質很少,溶血標本血紅蛋白的濃度達10g/L,黃疸標本膽紅質濃度達342μmol/L。氟化鈉濃度達2g/L,尿素濃度達46.7mmol/L(280mg/dl),尿酸濃度達2.95mmol/L,半胱氨酸的濃度達50mg/dl,甘油三酯濃度達500mg/dl,對測定結果均無影響,維生素C谷胱甘肽、10mg/dl左旋多巴可能引起測定結果的負偏差。

③如果測血漿中糖,標本草酸鉀-氟化鈉抗凝劑較好。取草酸鉀6g,氟化鈉4g,加水溶解至100ml,吸取0.1ml到玻璃試管內,在80℃以下烤乾使用,可使2~3ml血液在3~4h不凝固並抑制分解

方法學評價:GOD法線性範圍至少可達19mmol/L;回收度94%~105%;變異係數批內爲0.7%~2.0%;批間爲2%左右;日間爲2%~3%。準確度精密度都能達到臨牀需要,操作簡便,適用於常規檢驗

4.9 相關疾病

脫水糖尿病肢端肥大症庫欣綜合徵嗜鉻細胞瘤肝硬化血色病腦出血化膿性腦膜炎胰腺癌慢性胰腺炎燒傷胃癌肉瘤傾倒綜合徵甲狀腺功能減退症原發性肝癌脂肪肝糖原貯積病半乳糖血症蛛網膜下腔出血高脂血症黃疸

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