血清補體C3

1 拼音

xuè qīng bǔ tǐ C3

2 英文參考

Serum C3

3 概述

C₃主要是由巨噬細胞、單核細胞、淋巴組織、骨髓、腹膜和肝髒等合成的一種β球蛋白。C₃在C₃裂解酶的作用下進一步裂解，參與所有補體的激活。

4 血清補體C3的醫學檢查

4.1 檢查名稱

血清補體C3

4.2 分類

免疫學檢查 > 血清補體測定

4.3 取材

血液

4.4 血清補體C3的測定原理

（1）單向免疫擴散法：將含有抗補體抗體的瓊脂鋪在玻璃板上，然後打孔，加抗原（補體）。在合適的溫度、溼度環境中，經過一定時間擴散，抗原與混勻在瓊脂中的抗體在比例合適處可形成清晰的沉澱環。沉澱環直徑大小與抗原的濃度在一定範圍內成正比。用標準抗原製成標準曲線，可查出被測抗原的含量。

（2）火箭免疫電泳法：同單向火箭免疫電泳。

4.5 試劑

（1）單向免疫擴散法：

①0.1mol/L pH8.6巴比妥緩衝生理鹽水：巴比妥3.68g，巴比妥鈉，20.6g，加蒸餾水至1000ml。臨用時與生理鹽水等量混合，調pH8.6，按1/2000加入NaN₃防腐。

②15.0g/L瓊脂：稱取優質瓊脂粉15g，加入蒸餾水500ml水浴煮沸，使瓊脂溶解。然後再加入預先溫熱的0.1mol/L pH8.6巴比妥緩衝生理鹽水500ml，混勻後分裝小瓶，4℃冰箱保存備用。

（2）火箭免疫電泳法

①pH8.6，0.075mol/L巴比妥緩衝液。

②巴比妥-Tris-甘氨酸緩衝液：

A.巴比妥鈉6.5g，巴比妥1.035g溶於500ml蒸餾水中。

B.甘氨酸28.1g，Tris22.6g，溶於500ml蒸餾水中。

臨用前取A、B液等量混合後加7倍體積混合即成。

③8.0g/L瓊脂糖：用巴比妥-Tris-甘氨酸緩衝液配製。含40.0g/L聚乙二醇。

④0.01mol/L戊二醛溶液：取25%戊二醛0.4ml加蒸餾水100ml。

4.6 操作方法

（1）單向免疫擴散法：

①稀釋抗C₃血清及製備含抗C₃血清的瓊脂板：先按要求的稀釋度計算出稀釋液的用量，其中的半量採用緩衝液。抗C₃血清用緩衝液稀釋後放56℃水浴預溫。然後再加等量的、已預溫的15.0g/L瓊脂，使抗血清的最終稀釋度達到要求。按單向免疫擴散法常規澆製含抗C₃血清的瓊脂板，冷卻凝固後打孔（孔徑3mm），孔距1.5cm以上。

②標準曲線繪製：將冷凍乾燥的C₃參考血清，按規定加入準確量的蒸餾水，充分混勻後，再用0.1g/L硫柳汞生理鹽水稀釋至500μg/ml，然後按表1作一系列稀釋。

一般用1∶25，1∶50，1∶75，1∶100四個稀釋度抗C₃血清制板後，用微量注射器在孔中分別加入上述不同濃度的C₃參考血清（每孔中加10μl），經37℃48h保溫後，測得沉澱環直徑。以沉澱環直徑爲縱座標，相應的C₃含量的對數爲橫座標，初步繪製標準曲線。一般以沉澱環直徑在4～8mm所繪製的標準曲線較佳。

③正式試驗：先將受檢血清用0.1g/L硫柳汞生理鹽水稀釋5倍，按序加入瓊脂板相應孔中（每塊板應同時作5個以上不同濃度的C₃參考血清作對照）將瓊脂板放溼盒內，置37℃48h後測量結果。所得C₃參考血清沉澱環直徑與原先繪製的標準曲線上相應值相比，最低濃度C₃參考血清的沉澱環不應比原先大0.1mm，最高濃度不大於0.3mm，其他3個濃度不大於0.2mm，否則應重新測定。

（2）火箭免疫電泳法：

①取融化的瓊脂糖15.6ml，待冷至56℃時加入1∶10稀釋的C₃抗血清0.4ml，混勻，立即澆板（13cm×8cm）。

②在瓊脂糖膠板距邊緣2cm處打一排孔，孔徑3mm，孔距2mm。

③取血清0.01ml，加0.01mol/L戊二醛液0.39ml混勻。將參考標準物用0.01mol/L戊二醛液稀釋成1∶25，1∶40，1∶50，1∶100，1∶160，用4管或6管作標準曲線均可。醛化30min即用微量注射器依次加樣，每孔加10μl。

④電泳用2mA/cm，電泳4.5h。

⑤取出瓊脂糖膠板放入自來水中浸泡1h左右，再用自來水沖洗一下，放上數層濾紙稍加壓力吸乾水份。放溫箱中，片刻即幹。用5.0g/L考馬斯亮藍染液染10～15min，再用20%醋酸溶液洗幾次，自來水衝一下，置溫箱幹後測量峯高。

⑥量取參考標準物各濃度的沉澱峯，繪製標準曲線，再按每個血清標本的峯高，查標準曲線並計算結果。

4.7 正常值

（1）單向免疫擴散法：0.80～1.20g/L。

（2）火箭免疫電泳法：正常人血清87份（男56人、女31人），±SD＝1.2219±0.234g/L，範圍0.9879～1.4559g/L。

4.8 化驗結果臨牀意義

補體動態變化在臨牀上越來越受到重視。抗原-抗體複合物引起的胃炎病人血清總補體和C₃均明顯下降。大多數全身性紅斑狼瘡患者血清補體的降低和病情惡化有關。活動性全身性紅斑狼瘡患者血清中C₁、C₄、C₂和C₃降低，病情緩解時血清補體水平恢復正常。傳染病及組織損傷和急性炎症時，C₂、C₃、C₄均增加，總補體活性正常或升高。但晚期則降低。腫瘤患者補體量升高，特別是肝癌，C₃升高最爲明顯，具有診斷意義。也有報道胰腺癌晚期與隱性淋巴細胞白血病患者C₃降低。肝臟疾病患者C₃多爲降低，腎移植病人C₃的水平不穩定，C₃在排異反應開始時升高，然後下降到正常以下。

4.9 附註

（1）單向免疫擴散法：

①澆瓊脂板時注意避免產生氣泡。

②稀釋血清、抗血清所使用的吸量管必須固定。稀釋參考血清和患者血清皆用統一校正過的吸管，否則要用同一根吸管。其他器材也最好統一。

③所用瓊脂濃度一定要嚴格控制，分裝後防止乾燥，不要反覆溶解。溶解時不要煮沸時間過長，以防水份蒸發。56℃溫度要嚴格，太熱會破壞血清，太冷易凝固。混合要迅速、充分。

④加好血清後放的位置一定要保持水平，以防擴散圈變形。

⑤受檢者血清須新鮮。如條件不許可，可將血清冰凍保存或稀釋後保存，數天之內影響不大，時間久後易使C₃值增高。

（2）火箭免疫電泳法：

①試驗前首先要找出合適的抗血清濃度，使沉澱峯高度適中，峯形清晰。做法是用參考標準物稀釋幾個濃度做實驗，使峯高確定在一定範圍（2～5cm）。以滿意的峯高峯形將抗血清濃度確定下來。在此基礎上，再用參考標準物稀釋各種濃度作爲抗原進行測定，以選擇出最適血清標本稀釋度，即選出其測定結果基本上與參考標準物含量一致的稀釋度，作爲血清標本的最適稀釋度。

②測定補體蛋白時，血清分離後應立即使用。

③抗原用戊二醛醛化，在C₃電泳中可促進負離子的泳動。

④PEG可抑制免疫複合物解離，促進免疫複合物進一步聚合成更大的凝聚物而被沉澱，有助於提高試驗的靈敏度。

⑤本法靈敏度爲5.65μg/ml，CV爲1%。

⑥其他同單向火箭免疫電泳。

4.10 相關疾病

紅斑狼瘡、胰腺癌