5 苷-膽酸醫學檢查
5.1 分類
5.2 原理
（1）乙醇提取法（RIA）法：膽酸是一種甾體類化合物，缺少可供磺化標記的基團。需要對結構進行修飾，製成甘膽酸一組胺結合物，將125I標記到組胺分子上。血清中的CG和血漿蛋白相結合，加乙醇使蛋白變性而分離。樣品中的甘膽酸和標記物在緩衝溶液中競爭性與抗體結合，根據競爭抑制的基本原理，從標準曲線上求得血清CG濃度。
（2）直接測定法（RIA）法：血清中的甘膽酸絕大部分和蛋白質相結合，向反應液中加一定量的δ-苯胺-1-萘磺酸（ANS）使結合的甘-膽酸解離成遊離狀態，然後與標記物共同競爭性的和抗體結合。從標準曲線直接查得血清中的CG值。
5.3 試劑
（1）乙醇提取法（RIA）法：
①緩衝液：取0.2mol/L pH7.4 PB100ml，加NaCl 18.5g，明膠（Sigma公司產品）1g，NaN3 1g，加蒸餾水至1000ml，放37℃至溶後放4℃貯存。
②標準液：取甘膽酸，用無水乙醇配製成100nmol/L。臨用前用80%乙醇稀釋至0.1、0.2、0.5、2.0、5.0μmol/L。
③PR分離劑。
（2）直接測定法（RIA）法：
①緩衝液：同上法。
②標準液：取正常混合血清，經乙醇提取法測定血清中的甘膽酸濃度，然後向其中加入標準甘膽酸或用20g/L BSA液稀釋，使濃度爲0.5、2.0、5.0、15、30μmol/L。分裝每瓶0.25ml，冷凍乾燥。4℃保存，臨用前加0.25ml蒸餾水溶解。
③2g/L ANS液：取ANS 1g溶於500ml緩衝液中。
④抗血清：製備方法同上法，按可供測100管量分裝，冷凍乾燥，4℃保存。臨用前加緩衝液22ml溶解。
⑤125Ⅰ-組胺-甘膽酸：按每瓶74kBq/100μl分裝，4℃保存。臨用前加ANS液11ml。
⑥PR分離劑。
5.4 操作方法
（1）乙醇提取法（RIA）法：
①取血清0.1ml，加無水乙醇0.4ml，充分混合，離心（3000r/min）5min。
②取10mm×75mm塑料管，按表1加入樣品和試劑。
③加入PR分離劑後，混合，放37℃水浴30min，離心（3500r/min）15min，棄去上清液，在自動γ免疫計數器上測放射性。
④以B/B0Log或B/B0%爲縱座標，標準液濃度（μmol/L）爲橫座標繪製標準曲線。從標準曲線上查得樣品μmol/L，再乘5即得血清中甘膽酸濃度μmol/L。
（2）直接測定法（RIA）法：
①取10mm×75mm塑料試管，按表2加入樣品和試劑。
②加入PR分離劑後混合，放37℃ 30min。離心15min，棄去上清液，測沉澱物的放射性強度。
③以B/B0%對標準液濃度繪製標準曲線，依測定管的B/B0%從標準曲線上直接讀出血清中甘膽酸μmol/L。
5.5 正常值
乙醇提取法（RIA）法：
空腹 男2.17±1.23μmol/L
女2.18±1.04μmol/L
餐後2h 男3.79±1.90μmol/L
女3.39±1.29μmol/L
5.6 臨牀意義
（1）反映肝細胞損傷的敏感指標：急性肝炎、慢性活動性肝炎、肝硬化及原發性肝癌患者血清CG均明顯升高，其陽性率均在80%以上，依次爲急性肝炎＞慢性活動性肝炎＞原發性肝癌＞肝硬化＞慢性遷延性肝炎。當瀰漫性肝損傷時，血清CG水平與肝臟病變範圍及程度密切相關。急性肝炎、慢性活動性肝炎及重症肝炎患者，由於肝細胞廣泛變性壞死，血清中CG與ALT同時升高，但以血清CG升高更敏感，升高幅度更大。11例肝功能正常或基本正常的混合性肝硬化，肝性腹水患者13例次血清CG檢測值爲10855～66328μg/L。陽性率爲100%。Mannes報道，29例經病理或手術證實的ALT正常的肝炎後肝硬化患者空腹及餐後血清CG陽性率分別爲93%和97%，而其餘肝功能試驗的陽性率在69%以下。張建軍等報道272例肝膽疾病患者血清CG含量均明顯高於對照組，急性肝炎、慢活肝、肝硬化、肝癌時陽性率均在90%以上，慢遷肝、肝炎恢復期及膽道疾病陽性率在60%以上，CG的敏感性顯著高於常規肝功能試驗。肖波等報道，肝炎後肝硬化患者和原發性肝癌患者血清CG含量的異常率明顯高於常規肝功能試驗。以上結果均表明，血清CG是反映肝損傷的敏感指標。急性肝炎肝功能指標的相關性研究發現，血清CG的變化與ALT、GGT和血清總膽紅素呈正相關，但血清CG的恢復較ALT和血清總膽紅素爲遲，顯示在反映殘存病變方面血清CG優於ALT、血清總膽紅素。丙型肝炎患者雖然症狀較輕，但肝細胞的超微結構已經改變，這些改變常規肝功能試驗不能檢出，只有測其血清CG才能顯示。
近年來衆多學者認爲，餐後2h測定CG較空腹時更敏感。當肝臟攝取CG或清除CG功能輕度下降時，空腹CG可能正常。但餐後2h肝臟負擔最大。易發現血清CG升高，故檢測其值更有意義。空腹與餐後血清CG相關性研究發現，空腹血清CG陽性率爲32.1%，餐後則高達67.9%（P＜0.01），21例空腹血清CG正常和稍高者，試餐後有12例增高。因此，對空腹CG正常或接近正常的可疑患者，宜進行餐後CG測定，可提高輕型肝病的檢出率。
（2）用於急性肝炎的病情觀察及預後判斷：急性黃疸型肝炎患者，黃疸期ALT與血清CG陽性率均爲100%；恢復期常規肝功能指標多恢復正常，ALT轉陰率爲97.87%，而CG僅爲46.67%，二者間有顯著性差異。50%以上的急性肝炎患者常規肝功能試驗恢復正常，ALT轉爲陰性作爲治癒出院者，而CG仍高於正常，提示肝臟仍有實質性損傷。因此有必要將血清CG是否恢復正常作爲治癒出院的標準。根據血清CG進行適當調整或定期隨訪觀察，有助於急性肝炎的病情監測。多數資料顯示。急性肝炎患者在其恢復過程中CG持續升高，提示預後不良，有發展爲慢性肝炎的可能，尤其在乙型肝炎中更爲常見。
（3）判斷慢性肝炎的活動程度及鑑別診斷：慢性遷延性肝炎患者，常規肝功能指標及組織學檢查均未明顯異常改變，而CG升高可作爲肝炎活動或復發的早期敏感指標。有資料報道，慢性肝炎病情穩定持續緩解組（A組）及停藥後復發組（B組），當組織學檢查無肝炎活動證據時，A組血清CG在正常或正常值的2倍以下，而B組大部分在正常值的2倍以上。說明血清CG可提示疾病緩解抑或復發。動態觀察顯示，疾病復發時血清CG升高先於ALT升高。因此，血清CG測定是監測慢性肝炎的較好指標，並可避免肝活檢的創傷性檢查。慢性活動性肝炎CG的增高程度和頻率均明顯高於慢性遷延性肝炎，故血清CG測定有助於二者的鑑別診斷。乙醇性肝病患者由於肝細胞攝取和排泄功能受影響較少，無論空腹或餐後血清CG均正常，而GGT則因位於肝細胞漿中的微粒體部分而顯著升高，反映了光面內質網的增生，這對鑑別乙醇性肝病有一定價值。急性黃疸型戊型肝炎患者空腹血清膽汁酸均有不同程度的升高，但升高的幅度較急性黃疸型乙型肝炎爲低。因此，檢測急性期空腹膽汁酸，對病毒性肝炎的病原分型可能有價值。
（4）判斷肝硬化的預後：Mannes等對76例肝硬化患者隨訪1年，以比較臨牀和實驗室檢查以及按Child分級與血清CG含量對肝硬化預後的意義，發現各項指標中，血清CG是預測肝硬化預後的最好指標。按患者血清CG升高程度分類，對肝硬化死亡率的預測與Child分類法結果相似。胡懋琳等報道，肝硬化患者血清CG含量與Child分級呈顯著正相關，與血清白蛋白呈顯著負相關。任成山等對106例肝硬化患者血清CG含量測定，並隨訪1年，依血清CG含量升高的程度，對病死率預測與Child分級比較。血清CG＜10μmol/L提示預後良好，45例中僅5例（11.1%）於1年內死亡，與Child A級的25例中2例（8.0%）死亡相近。血清CG＞20μmol/L則預後較差，32例中有22例（68.8%）在1年內死亡，近似於Child C級的33例有24例（72.9%）死亡。用Logistic同歸分析對血清CG和Child分級的11個變量進行多元分析，只有血清CG最有統計學意義（P＜0.001）。這可能是由於膽酸升高與肝功能衰竭的關係比其他指標更爲密切。張建民等對40例肝硬化患者血清CG含量進行了檢測及1年的預後隨訪，發現血清CG與HA一樣在判斷肝硬化預後方面確實優於GGT、AKP及白蛋白，血清CG濃度高則預後差，死亡組與生存組之間有顯著差異。因此，血清CG測定是判斷肝硬化預後的良好指標。
（5）反映肝臟病的嚴重程度：Ferracis報道血清CG和ALT對嚴重肝臟病的特異性和敏感性無顯著性差異。章華礎等進一步研究發現，急性肝炎和重症肝炎血清CG的陽性率均爲100%，而ALT的陽性率分別爲73.7%和50%，不僅證明血清CG測定對嚴重肝病的診斷優於常規肝功能試驗，且在臨牀上起到決定作用。Jara對病理證實的慢性持續性肝炎檢測結果顯示，常規肝功能的陽性率在8%～72%之間，而血清CG的陽性率達100%，且重症肝炎血清CG升高幅度明顯高於ALT。
（6）其他疾病：原發性肝癌（PHC）患者AFP和CG的陽性率分別爲78.3%和85.8%，表明血清CC對PHC的診斷具有重要價值。膽石症患者CG明顯升高，可爲正常的50倍，一般認爲單純
5.7 附註
測定苷氨膽酸與苷鵝脫氧膽酸的比值可能具有診斷價值，因爲約80%肝細胞疾病患者該比值＜1，而80%膽汁鬱積性疾病患者該比值＞1。