3 概述
血栓素(thromboxane,TXA2)是前列腺素中的一種,由血小板產生,具有血小板凝聚及血管收縮作用,與前列環素作用相反,兩者動態平衡以維持血管舒縮功能及血小板聚集作用。TXA2生物半衰期僅30s,迅速轉化爲無活性的血栓素B2(TXB2)。
4 尿血栓素B2的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 尿血栓素B2的測定原理
血栓素A2(TXA2)是由血小板在聚集過程中釋放的一種具有強烈收縮血管的活性物質。生物半衰期僅30s,迅速轉化爲無活性的血栓素B2(TXB2)。TXB2在生物樣品濃度甚微,目前均採用放射免疫測定法。樣品中的TXB2經提取純化。樣品和[3H]-標記高比放射活性TXB2共同競爭性的與限量抗體結合。平衡後加活性炭吸附遊離型[3H]-標記物,上清液加至閃爍液中,測β射線的放射性強度。從標準曲線上得出樣品中的值。
4.5 試劑
(1)抗血清:取TXB2(Sigma公司產品)5mg,高純度BSA5mg,經碳化二亞胺偶聯劑作用,製成TXB2-BSA結合物。免疫家兔獲得特異性抗血清。滴度達1∶32000。臨用前用PBS稀釋。
(2)I3H-TXB2:英國Amersham公司產品,高比放射活性5.18 TBq(1.40Ci)/mmol,置-20℃以下保存。臨用前取37kBq(1μCi)加至10.5ml PBS中。
(3)標準TXB2貯存液(1.6μg/ml)用無水乙醇配製,放-20℃可長期保存。
(4)標準TXB2工作液:取標準貯存液2μl(3.2ng)至12nm×100nm管中,氮氣吹乾,加2mlPBS溶液。另取試管6只,各加PBS 1ml。將標準液作倍比稀釋。此係列標準濃度爲25~1600pg/ml。臨用前配製。
4.6 操作方法
(2)取8mm×75mm玻璃管,總計數管(T)加PSB300μl,非特異結合管(NSB)加PBS200μl,零標準管(S0)加PBS100μl。標準曲線管(S1~7)加不同濃度標準工作液100μl。測定管加經純化樣品液100μl。
(3)向S0、S1~7和測定管加稀釋抗血清100μl,放4℃反應6~12h。
(4)向所有管各加[3H]-TXB2工作液100μl,放4℃6~12h。
(5)除T管外,各加活性炭分離劑100μl,混勻後放4℃15min,離心3500r/min(4℃)15min。
(6)將上清液全部傾出至預先加有11ml閃爍液的計數瓶中,充分混合,放置12h後在液體閃爍計數器上測量放射性。
(7)在半對數座標紙上以logit B/B0爲縱座標,各標準管TXB2pg爲橫座標,按直線回歸法繪製標準曲線。然後依據樣品管的logit B/B0值從標準曲線上求出樣品管濃度。如液體閃爍計數器帶有數據處理系統,可直接給出標準曲線、有關參數及樣品管濃度。
4.7 正常值
尿液:(174.1±50.2)pg/min
4.8 化驗結果臨牀意義
血栓素水平變化見於:動脈粥樣硬化、心絞痛、冠心病、糖尿病、高脂血症等增高,TXA2/PGI2比值升高易於導致血小板聚集、血栓形成,促使動脈粥樣硬化和冠心病。出血、損傷和內毒素休克動物血漿中TXB2顯著增加,這與休克時肺循環阻力升高有關。
慢性腎衰患者尿中TXB2和6-酮-PGF1α下降。腎血管性高血壓、腎病綜合徵和Batter綜合徵患者尿中PG亦有顯著性變化。
惡性腫瘤患者動脈組織中TXA2有所改變,PGI2、TXA2正常時,能阻止腫瘤細胞侵襲血小板進而黏附在血管表面。抑制血小板TXA2生成和增加血管內皮細胞PGI2生成的因素有抗腫瘤轉移作用。
4.9 附註
血漿樣品經乙酸乙酯和石油醚兩次提取,達到純化目的,各項技術指標和國外報告的柱層析法相似。