4 概述
20世紀60年代後期隨着可曲性纖維支氣管鏡(簡稱纖支鏡)的開發與應用,逐漸興起支氣管肺泡灌洗(bronchoalvoelar lavage,BAL)技術。中華醫學會呼吸病學分會根據我國具體情況分別於1993年和2002年也制定出有關支氣管肺泡灌洗液(bronchoalvoelar lavage fluid,BALF)細胞學檢查技術規範(草案),使此項檢查技術在國內得到推廣應用。由於BAL能直接獲取肺內炎症免疫效應細胞,是探討肺局部免疫病理過程的一種相對比較安全有用的檢查方法。因此,BAL已成爲某些肺疾病,特別是瀰漫性間質性肺疾病以及免疫受損患者肺部感染等疾病的輔助臨牀診斷、病變活動性和預後判定的重要檢測手段。
5 適應症
支氣管肺泡灌洗術適用於:肺部感染,特別是免疫受損、免疫缺陷肺部感染的病原學診斷;瀰漫型和周圍型肺部腫瘤的細胞學診斷;間質性肺疾病,如結節病、特發性肺間質纖維化、外源性變應性肺泡炎、肺泡蛋白沉着症、膠原血管伴肺纖維化等的診斷、治療、療效和預後估計。
6 禁忌症
心肺功能損害嚴重,氧分壓低於6.67kPa,新近大咯血,活動性肺結核未經治療等。
3.嚴重通氣和換氣功能障礙患者,PaO2<6.67kPa(50mmHg)或吸氧狀態下PaO2<9.33kPa(70mmHg)。
8 方法及內容
1、術前3-4h禁食。術前30min肌注地西泮(安定)10mg及阿托品0.5mg。
3、纖維支氣管鏡經鼻腔插入氣管,嵌入右肺中葉或左肺舌葉段支氣管管口(侷限性肺病變應選相應支氣管肺泡段),注入2%利多卡因2-3ml局麻後,用50ml注射器將37℃生理鹽水分次注入,每次25-50ml總量100-300ml,注入後立即通過負壓吸引裝置吸引、回收至硅質灌洗液收集瓶內。一般回收液量應達注入液量的40%-60%。
4、回收液用雙層無菌紗布過濾,除去粘液,記錄總回收液量,裝入硅質容器中,置於冰水(-4℃)中送檢驗室,應在2-3h內對灌洗液進行檢查、分析。
9 支氣管肺泡灌洗術細胞學檢查方法
①將上述回收灌洗液裝入塑料離心管內以1200r/min,在4℃下離心10min,上清(原液或10倍濃縮)-70℃儲存,用做可溶性成分的檢測。
②經離心沉澱的細胞成分用Hank液(不含Ca2+、Mg2+)在同樣條件離心沖洗2次,每次5min。棄去上清後加Hank液3~5ml製成細胞懸液。也可以用灌洗液原液減少細胞丟失。
③然後在改良的Neubauer計數臺上計數BALF中細胞總數,一般以1×106/ml表示。如果細胞數過高時,再用Hank液稀釋,調整細胞數爲5×106/ml,並同時將試管浸入碎冰塊中備用。
④細胞分類計數,採用細胞離心塗片裝置,加入備用細胞懸液(細胞濃度爲5×106個/ml)100μl,在4℃下以1200r/min離心10min,通過離心作用將一定數量的BALF細胞直接平鋪於鹽載玻片上。取下載玻片立即用冷風吹乾,置於無水乙醇中固定30min後進行染色,一般用Wright或HE染色。
①採用間接免疫熒光法,將上述獲得的BALF細胞成分,用10%小牛血清RPMI 1640培養液3~5ml製成細胞懸液。
②將細胞懸液倒入平皿中,置於5% CO237℃培養箱中孵育2h,進行貼壁處理,去除肺泡巨噬細胞。
③取出細胞懸液,再用Hank液沖洗離心1次,棄上清留20~100μl。經貼壁處理後的細胞懸液中,肺泡巨噬細胞顯著減少,淋巴細胞相對增多。
④將經貼壁處理的細胞懸液分裝3個小錐形離心管內,每管20~30μl,用微量加樣器向標本中加單克隆抗體CD3、CD4和CD8各20~40μl,混勻置於4℃冰箱中作用1~2h。
⑤取出標本,先用Hank液沖洗離心2次,以12000r/min離心20s,然後加羊抗鼠熒光抗體各20~40μl,置於冰箱作用30min。
⑥取現標本用Hank液以同樣速度和時間離心沖洗2次,棄上清留20μl充分混勻細胞,取1滴於載玻片上加蓋玻片。熒光顯微鏡下數200個淋巴細胞並計算出標有熒光的細胞陽性率。