3 甲型肝炎滅活疫苗（人二倍體細胞）藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Jiaxing Ganyan Miehuoyimiao （Ren Erbeiti Xibao）
3.1.3 英文名
Hepatitis A Vaccine （Human Diploid Cell），Inactivated
3.2 定義、組成及用途
本品系用甲型肝炎（簡稱甲肝）病毒接種人二倍體細胞，經培養、收穫、病毒純化、滅活後，加入鋁佐劑製成。用於預防甲型肝炎。
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 生產用細胞
生產用細胞爲人二倍體細胞（2BS株、KMB17株或其他經批准的細胞株）。
3.4.1.1 2.1.1 細胞管理及檢定
應符合“生物製品生產檢定用動物細胞基質製備及檢定規程”的有關規定。取自同批工作細胞庫的1支或多支細胞，經復甦擴增後的細胞僅用於一批疫苗的生產。
2BS株原始細胞庫細胞代次應不超過第14代，主細胞庫細胞代次應不超過第31代，工作細胞庫細胞代次應不超過第44代；KMB17株原始細胞庫細胞代次應不超過第6代，主細胞庫細胞代次應不超過第15代，工作細胞庫細胞代次應不超過第45代。
3.4.1.2 2.1.2 細胞製備
取工作細胞庫中的1支或多支細胞，經復甦、胰蛋白酶消化、37℃±0.5℃靜置或旋轉培養製備的一定數量並用於接種病毒的細胞爲一個細胞批。
3.4.2 2.2 毒種
3.4.2.1 2.2.1 名稱及來源
生產用毒種爲甲肝病毒TZ84株、呂8株或其他批准的人二倍體細胞適應的甲肝病毒株。
3.4.2.2 2.2.2 種子批的建立
甲肝病毒TZ84株原始種子批應不超過第20代，主種子批應不超過第22代，工作種子批應不超過第23代，生產的疫苗應不超過第24代。呂8株原始種子批應不超過第24代，主種子批不超過第25代，工作種子批不超過第30代，生產的疫苗應不超過第31代。
3.4.2.3 2.2.3 種子批毒種的檢定
主種子批應進行以下全面檢定，工作種子批進行2.2.3.1～2.2.3.4項檢定。
3.4.2.3.1 2.2.3.1 鑑別試驗
用甲肝病毒特異性免疫血清和甲肝病毒抗體陰性血清分別與500～1000 CCID50/ml甲肝病毒等量混合，置37℃水浴60分鐘，接種人二倍體細胞2BS株或KMB17株，置35℃培養至病毒增殖高峯期，提取甲肝病毒後用酶聯免疫法測定，經中和的病毒液檢測結果應爲陰性，證明甲肝病毒被完全中和；未經中和的病毒液檢測結果應爲陽性，證明爲甲肝病毒。
3.4.2.3.2 2.2.3.2 病毒滴定
將毒種做10倍系列稀釋，取至少3個稀釋度，分別接種人二倍體細胞，置35℃培養至病毒增殖高峯期，收穫後提取甲肝病毒，用酶聯免疫法測定，病毒滴度應不低於6.50 lg CCID50/ml。
3.4.2.3.3 2.2.3.3 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.4.2.3.4 2.2.3.4 支原體檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ B），應符合規定。
3.4.2.3.5 2.2.3.5 病毒外源因子檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ C），應符合規定。供試品可不經甲肝病毒免疫特異性血清中和，直接接種小鼠觀察。
3.4.2.3.6 2.2.3.6 免疫原性檢查
用主種子批毒種製備原疫苗。取甲肝病毒抗體陰性、肝功能指標正常、體重爲1.5～4.5kg的健康恆河猴7只，其中試驗組5只，肌內注射1.0ml（甲肝病毒抗原含量應不低於一個成人劑量），另設2只爲對照。免疫後28天採血，採用酶聯免疫法檢測甲肝病毒坑體。對照組甲肝病毒抗體應全部爲陰性，試驗組至少有4只血清抗體陽轉爲合格。
3.4.2.4 2.2.4 毒種保存
毒種應於-60℃以下保存。
3.4.3 2.3 原液
3.4.3.1 2.3.1 細胞製備
按2.1.2項進行。
3.4.3.2 2.3.2 培養液
培養液爲含適量滅能新生牛血清的MEM或Earle's液。新生牛血清的質量應符合要求（2010年版藥典三部附錄Ⅻ D），且甲肝抗體檢測應爲陰性。
3.4.3.3 2.3.3 對照細胞病毒外源因子檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ C），應符合規定。
3.4.3.4 2.3.4 病毒接種和培養
將毒種按0.05～1.0 MOI接種細胞（同一工作種子批毒種應按同一MOI接種）。於適宜溫度下培養，培養期間根據細胞生長情況換維持液，維持液爲含適宜濃度新生牛血清的MEM或Earle's液。
3.4.3.5 2.3.5 病毒收穫
培養至病毒增殖高峯期後，採用適宜濃度的胰蛋白酶或其他適宜方法消化含甲肝病毒的細胞，經離心或過濾的方法收集後爲病毒收穫物。
3.4.3.6 2.3.6 病毒收穫物檢定
按3.1項進行。
3.4.3.7 2.3.7 病毒提取
檢定合格的病毒收穫物經凍融和（或）超聲波或其他適宜方法處理收穫病毒後，用三氯甲烷抽提以提取甲肝病毒。
3.4.3.8 2.3.8 合併
3.4.3.9 2.3.9 病毒純化
採用柱色譜法或其他適宜的方法進行純化。純化前或純化後超濾濃縮至規定蛋白質含量範圍內，純化後取樣進行抗原含量測定。
3.4.3.10 2.3.10 病毒滅活
應在規定的蛋白質含量範圍內進行病毒滅活。將純化後甲肝病毒液除菌過濾後，加入終濃度不超過250μg/ml的甲醛，於37℃±1℃滅活12天，病毒滅活到期後，每個病毒滅活容器應立即取樣，分別進行病毒滅活驗證試驗。滅活後的病毒液即爲原液。
3.4.3.11 2.3.11 原液保存
於2～8℃保存。
3.4.3.12 2.3.12 原液檢定
按3.2項進行。
3.4.4 2.4 半成品
3.4.4.1 2.4.1 配製
病毒原液經鋁吸附後，按規定的抗原含量進行稀釋，可加入適宜濃度的2-苯氧乙醇作爲防腐劑及其他適宜穩定劑，即爲半成品。
3.4.4.2 2.4.2 半成品檢定
按3.3項進行。
3.4.5 2.5 成品
3.4.5.1 2.5.1 分批
3.4.5.2 2.5.2 分裝
3.4.5.3 2.5.3 規格
每支0.5ml或1.0ml，每1次成人用劑量爲1.0ml，兒童劑量爲0.5ml，成人劑量和兒童劑量含甲肝病毒抗原含量按批准的執行。
3.4.5.4 2.5.4 包裝
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 病毒收穫物檢定
3.5.1.1 3.1.1 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.1.2 3.1.2 支原體檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ B），應符合規定。
3.5.1.3 3.1.3 抗原含量
採用酶聯免疫法測定，應按批准的標準執行。
3.5.1.4 3.1.4 蛋白質含量
採用2010年版藥典三部附錄Ⅵ B第二法測定，應按批准的標準執行。
3.5.2 3.2 原液檢定
3.5.2.1 3.2.1 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.2.2 3.2.2 抗原含量
採用酶聯免疫法測定，應按批准的標準執行。
3.5.2.3 3.2.3 蛋白質含量
採用2010年版藥典三部附錄Ⅵ B第二法測定，應按批准的標準執行。
3.5.2.4 3.2.4 病毒滅活驗證試驗
取滅活後病毒液，接種人二倍體細胞，置33～35℃培養適宜時間（TZ84株不少於21天，呂8株不少於12天）收穫，同法盲傳2代，用酶聯免疫法檢測甲肝病毒，應爲陰性。
3.5.2.5 3.2.5 牛血清白蛋白殘留量
應不高於100ng/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅷ I）。
3.5.2.6 3.2.6 去氧膽酸鈉殘留量
採用去氧膽酸鈉作爲細胞裂解劑的，按本品種附錄1進行檢測，殘留量應不高於20μg/ml。
3.5.2.7 3.2.7 聚山梨酯80殘留量
生產過程中使用聚山梨酯80的，殘留量應不高於20μg/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅵ H）。
3.5.3 3.3 半成品檢定
3.5.3.1 3.3.1 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.3.2 3.3.2 pH值
應爲5.5～7.0（2010年版藥典三部附錄Ⅴ A）。
3.5.3.3 3.3.3 鋁吸附效果測定
取吸附後上清液，用酶聯免疫法檢測甲肝病毒抗原含量，上清液中甲肝病毒抗原含量應不高於吸附前抗原總量的5%。
3.5.3.4 3.3.4 鋁含量
應不高於1.20mg/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅶ F）。
3.5.3.5 3.3.5 聚乙二醇6000殘留量
生產過程中加入聚乙二醇6000的，殘留量應小於10μg/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅵ G）。
3.5.4 3.4 成品檢定
3.5.4.1 3.4.1 鑑別試驗
3.5.4.2 3.4.2 外觀
應爲微乳白色混懸液體，可因沉澱麗分層，易搖散，不應有搖不散的塊狀物。
3.5.4.3 3.4.3 裝量
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅰ A），應不低於標示量。
3.5.4.4 3.4.4 pH值
應爲5.5～7.0（2010年版藥典三部附錄Ⅴ A）。
3.5.4.5 3.4.5 鋁含量
應不高於1.20mg／ml（2010年版藥典三部附錄Ⅶ F）。
3.5.4.6 3.4.6 遊離甲醛含量
應不高於50μg/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅵ L）。
3.5.4.7 3.4.7 三氯甲烷殘留量
應不高於0.006%（2010年版藥典三部附錄Ⅵ V）。
3.5.4.8 3.4.8 2-苯氧乙醇含量
採用2-苯氧乙醇作爲防腐劑的進行該項檢測，按本品種附錄2進行檢測，成爲4.0～6.0mg/ml。
3.5.4.9 3.4.9 體外相對效力測定
應不低於0.75（2010年版藥典三部附錄Ⅹ S）。
3.5.4.10 3.4.10 抗生素殘留量
生產過程中加人抗生素的應進行該項檢查。採用酶聯免疫法，應不高於50ng/劑。
3.5.4.11 3.4.11 無菌檢查
3.5.4.12 3.4.12 細菌內毒素檢查
應不高於10EU/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅻ E凝膠限度試驗）。
3.5.4.13 3.4.13 異常毒性檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ F），應符合規定。
3.6 4 保存、運輸及有效期
3.7 5 附錄
附錄1 去氧膽酸鈉殘留量測定法
附錄2 2-苯氧乙醇含量測定法
3.8 6 使用說明
3.9 附錄1 去氧膽酸鈉殘留量測定法
本法系依據去氧膽酸鈉在酸性條件下生成有色化合物，用比色法測定供試品中去氧膽酸鈉的殘留量。
3.9.1 試劑
3.9.1.1 （1）去氧膽酸鈉對照品溶液（100μg/ml）
精密稱取乾燥至恆重的去氧膽酸鈉0.05g於燒杯內，加入冰醋酸30ml使溶解，轉入50ml量瓶內，用適量水沖洗燒杯洗液轉入容量瓶，再補加水至50ml。臨用前10倍稀釋即爲100μg/ml。
3.9.1.2 （2）60%醋酸溶液
取冰醋酸150m1，加水100ml，混勻。
3.9.1.3 （3）43.5%硫酸溶液
量取濃硫酸453ml，緩慢加入500ml水中，邊加邊攪拌，補水至1000ml。
3.9.2 測定法
取供試品1.0ml於50ml比色管中，加43.5%硫酸溶液14.0ml，搖勻，於70℃加熱20分鐘，冷卻至室溫，照紫外一可見分光光度法（2010年版藥典三部附錄Ⅱ A）在波長387nm處測定吸光度。
精密吸取去氧膽酸鈉對照品溶液（100μg/ml）0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml於50ml比色管中，各加60%乙酸溶液至1.0ml，使去氧膽酸鈉濃度分別爲0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml，自“加43.5%硫酸溶液14.0ml”起，同法操作，測定各管吸光度。
以去氧膽酸鈉對照品溶液的濃度對其相應的吸光度作直線迴歸，將供試品溶液的吸光度代入迴歸方程，計算供試品中去氧膽酸鈉含量。
3.10 附錄2 2-苯氧乙醇含量測定法
照高效液相色譜法（2010年版藥典三部附錄Ⅲ B）測定。
3.10.1 色譜條件
採用C18柱，粒度10μm；流動相爲水－乙腈（ 50/50）．檢測波長爲270nm，流速爲每分鐘1ml。
3.10.2 對照品溶液的製備
準確稱取2-苯氧乙醇對照品50mg於10ml量瓶中，用流動相定容至10ml，用0.45μm濾膜過濾。
3.10.3 供試品溶液的製備
取供試品1ml，用0.45μm濾膜過濾。
3.10.4 測定法
精密量取同體積的對照品溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖：上樣量爲10μl。
按下式計算：
【藥品名稱】
通用名稱：甲型肝炎滅活疫苗（人二倍體細胞）
英文名稱：Hepatitis A Vaccine（Human Diploid Cell），Inactivated
漢語拼音；Jiaxing Ganyan Miehuo Yimiao （Ren Erbeiti Xibao）
【成分和性狀】
本品系用甲型肝炎病毒株接種人二倍體細胞，經培養、收穫、病毒純化、滅活和鋁吸附製成。爲微乳白色混懸液體，可因沉澱而分層，易搖散．可含有防腐劑。
【接種對象】
【作用和用途】
接種本疫苗可刺激機體產生抗甲型肝炎病毒的免疫力。用於預防甲型肝炎。
【規格】
每瓶0.5ml或1.0ml。每1次成人劑量爲1.0ml，每1次兒童劑量爲0.5ml，成人劑量和兒童劑量含甲肝病毒抗原按批准的執行。
（1）上臂三角肌肌內注射。
（2） 16歲及以上用成人劑量，1～15歲用兒童劑量。初次免疫接種1劑疫苗，間隔6個月加強免疫1劑疫苗。
【不良反應】
常見不良不反應：
接種疫苗後，少數人可能出現輕度低熱反應、局部疼痛、紅腫，一般在72小時內自行緩解。
罕見不良不反應：
（1）局部硬結，1～2個月即可吸收。
（2）偶有皮疹出現，不需特殊處理，必要時對症治療。
極罕見不良不反應：
（1）過敏性皮疹：一般接種疫苗後72小時內出現蕁麻疹，出現反應時，應及時就診，給予抗過敏治療。
（2）過敏性休克：一般接種疫苗後1小時內發生。應及時注射腎上腺素等搶救措施進行治療。
（3）過敏性紫癜：出現過敏性紫癜反應時應及時就診，應用皮質固醇類藥物給予抗過敏治療，治療不當或不及時有可能併發紫癜性腎炎。
（4）血小板減少性紫癜。
【禁忌】
（1）已知對該疫苗所含任何成分，包括輔料、甲醛以及抗生素過敏者。
（2）妊娠期婦女。
（3）患急性疾病、嚴重慢性疾病、慢性疾病的急性發
作期、發熱者。
【注意事項】
（1）有以下情況者慎用：家族和個人有驚厥史者、患慢性疾病者、有癲癇史者、過敏體質者。
（2）疫苗瓶有裂紋、標籤不清或失效者、疫苗出現渾濁等外觀異常者均不得使用。
（3）疫苗瓶開啓後應立即使用。
（4）注射人免疫球蛋白者應至少間隔1個月以上接種本疫苗，以免影響免疫效果。
（5）應備有腎上腺素等藥物，以備偶有發生嚴重過敏反應時急救用。接受注射者在注射後應在現場觀察至少30分鐘。
（6）嚴禁凍結。
【貯藏】
於2～8℃避光保存和運輸。
【包裝】
按批准的執行。
【有效期】
按批准的有效期執行。
【執行標準】
【批准文號】
【生產企業】
企業名稱：
生產地址：
郵政編碼：
電話號碼：
傳真號碼：
網 址：
3.11 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版