GB 22255—2014 食品安全國家標準 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定

1 拼音

GB 22255—2014 shí pǐn ān quán guó jiā biāo zhǔn shí pǐn zhōng sān lǜ zhè táng （zhè táng sù ）de cè dìng

中華人民共和國國家標準GB 22255—2014《食品安全國家標準 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會於2015年01月28日發佈，自2015年07月28日起實施，同時代替GB/T 22255—2008《食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》。

2 前言

本標準代替GB/T 22255—2008《食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》。本標準與GB/T 22255—2008相比，主要變化如下：

——標準名稱修改爲“食品安全國家標準 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定”；

——增加了示差檢測器的應用；

——增加固相萃取柱淨化、分離的試樣製備步驟；

——增加發酵酒、配製酒、不含蛋白的飲料的試樣製備步驟。

食品安全國家標準

食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定

3 1 範圍

本標準規定了食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定方法。本標準適用於食品中三氯蔗糖的測定。

4 2 原理

試樣中三氯蔗糖用甲醇水溶液提取，除蛋白、脂肪，經固相萃取柱淨化、富集後用高效液相色譜儀、反相C18色譜柱分離，蒸發光散射檢測器或示差檢測器檢測，根據保留時間定性，以峯面積定量。

5 3 試劑和材料

注：除非另有說明，本方法所用試劑均爲分析純，水爲GB/T 6682規定的一級水。

5.1 3.1 試劑

3.1.1 甲醇（CH₃OH）。

3.1.2 乙腈（CH₃CN）：色譜純。

3.1.3 正己烷（C₆H₁₄）。

3.1.4 乙酸鋅[Zn（CH₃COO）₂·2H₂O]。

3.1.5 亞鐵氰化鉀[K₄Fe（CN）₆·3H₂O]。

3.1.6 中性氧化鋁（100目～200目）。

5.2 3.2 試劑的配製

3.2.1 乙酸鋅溶液（219 g/L）：稱取21.9 g乙酸鋅，加3 mL乙酸，加水溶解至100 mL。

3.2.2 亞鐵氰化鉀溶液（106 g/L）：稱取10.6 g亞鐵氰化鉀，加水溶解至100 mL。

3.2.3 甲醇水溶液（75+25）：量取75 mL甲醇，加25 mL水，混勻。

3.2.4 乙腈水溶液（11+89）：量取11 mL乙腈，加89 mL水，混勻。

5.3 3.3 標準品

三氯蔗糖標準品（C₁₂H₁₉C₁₃O₈）：CAS編號56038-13-2，純度≥99%。

5.4 3.4 標準溶液的製備

3.4.1 三氯蔗糖標準貯備溶液（10.0 mg/mL）：稱取三氯蔗糖標準品0.25 g（精確至0.0001 g）於25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻，其中三氯蔗糖濃度爲10.0 mg/mL。貯備液置於4℃冰箱中保存，保存期爲6個月。

3.4.2 三氯蔗糖標準中間液（1.00 mg/mL）：吸取5.00 mL三氯蔗糖標準貯備溶液於50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻，其中三氯蔗糖濃度爲1.00 mg/mL。置於4℃冰箱中保存，保存期爲3個月。

3.4.3 三氯蔗糖標準工作液：分別吸取0.200 mL、0.500 mL、1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL三氯蔗糖中間液於10 mL容量瓶中，用水定容至刻度。其中三氯蔗糖T作液濃度分別爲0.0200 mg/mL、0.0500 mg/mL、0.100 mg/mL、0.200 mg/mL、0.400 mg/mL。

5.5 3.5 材料

固相萃取柱（200 mg，類型爲N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯親水親脂平衡型填料）使用前依次用4 mL甲醇、4 mL水活化。

6 4 儀器和設備

4.1 高效液相色譜儀：配示差檢測器或蒸發光散射檢測器。

4.2 天平：感量爲0.1 mg和1 mg。

4.3 渦旋混合器。

4.4 離心機：轉速≥3000 r/min。

4.5 離心機：轉速≥10000 r/min。

4.6 超聲波清洗儀：工作頻率35 kHz。

4.7 水浴鍋。

7 5 分析步驟

7.1 5.1 試樣製備

7.1.1 5.1.1 含蛋白脂肪試樣

5.1.1.1 稱取粉碎均勻後固體試樣1 g～2 g（精確到0.001 g），混勻後液體試樣1 g～5 g（精確到0.001 g）置於50 mL離心管中，加入5 mL水，渦旋混合器上振盪3 min後加入15 mL甲醇，繼續振盪30 s，超聲波提取20 min，以3000 r/min離心10 min，將上清液移人50 mL離心管中。沉澱物加入5.0 mL甲醇水溶液（75+25），玻棒攪拌均勻後，渦旋混合器上振盪30 s，以3000 r/min離心10 min，重複提取2次，將上清液合併於150 mL分液漏斗中。

5.1.1.2 在150 mL分液漏斗內，加入30 mL正己烷，振搖2 min，靜置分層，20 min後，下層水相移置於50 mL蒸發皿。蒸發皿於沸水浴上蒸發，當蒸發皿中液體在1 ml。左右時用9 mL水分三次沖洗蒸發皿，沖洗液合併移置於15 mL離心管中，超聲波處理5 min，以3 000 r/min離心10 min。

5.1.1.3 取全部上清液移入已活化的固相萃取柱，控制液體流速不超過每秒1滴，柱上液麪爲2 mm左右時加入1 mL水，繼續保持液體流速爲每秒1滴，到柱中液體完全排出後，用3 mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液。洗脫液置於50 mL蒸發皿內，於沸水浴上蒸乾，殘渣用1.00 mL乙腈水溶液（11+89）溶解（如溶液有渾濁現象可將其移人離心管，10000 r/min離心5 min），溶液過0.45μm濾膜，濾液爲製備的試樣溶液，備用。

注：果凍類樣品經提取後的上清液需50℃水浴加熱後趁熱過柱，否則易堵塞萃取柱。

7.1.2 5.1.2 醬及醬製品、醋、醬油

稱取混勻後試樣2g（精確到0.001 g），置於50 mL離心管中，加入1.0 g中性氧化鋁，加入3 mL水，渦旋混合器上振盪3 min後加入15 mL甲醇，以下步驟白5.1.1.1“繼續振盪30 s，超聲波提取20 min，以3000 r/min離心10 min”開始，到5.1.1.3“濾液爲製備的試樣溶液，備用。”爲止依次處理。

7.1.3 5.1.3 含酒精的試樣（發酵酒、配製酒）

稱取混勻後試樣5g（精確到0.001 g），置於50 mL蒸發皿中，於沸水浴上蒸乾，殘渣用1.00 mL乙腈水溶液（11+89）溶解，溶液過0.45μm濾膜，濾液爲製備的試樣溶液，備用。

7.1.4 5.1.4 飲料

稱取混勻後試樣5g（精確到0.001 g），置於15 mL離心管中，加入5 ml。水，渦旋混合器上振盪30 s。以3000 r/min離心10 min。以下步驟按5.1.1.3處理。

7.1.5 5.1.5 風味發酵乳、奶茶

稱取混勻後試樣1 g～5 g（精確到0.001 g）置於50 mL離心管中，加入5 mL水，渦旋混合器上振盪3 min後加入15 mL甲醇、0.50 mL乙酸鋅溶液、0.50 mL亞鐵氰化鉀溶液，以下步驟白5.1.1.1“繼續振盪30 s，超聲波提取20 min，以3000 r/min離心10 min”開始，到5.1.1.3“濾液爲製備的試樣溶液，備用。”爲止依次處理。

不同試樣的前處理需要同時做試樣空白試驗。

7.2 5.2 儀器參考條件

5.2.1 色譜柱：C₁₈柱（4.6 mm×150 mm，5μm）或性能相當者。

5.2.2 流動相：水+乙腈=89+11。

注：當檢測樣品基質複雜，強保留物質影響後續檢測時，可採取洗脫程序（蒸發光散射檢測器適用），參見附錄A。

5.2.3 流速：1.0 mL/min。

5.2.4 柱溫：35℃。

5.2.5 示差檢測器條件：

——檢測池溫度：35℃；

——靈敏度：16。

5.2.6 蒸發光散射檢測器條件：按不同品牌蒸發光散射檢測器在高水相流動相條件下的要求設置。

如SEDEX 75：

霧化壓力：3.5 Bar；

增益：8；

蒸發溫度：40℃。

或性能相當者。

5.2.7 進樣量：20.0μL。

7.3 5.3 標準曲線的製作

7.3.1 5.3.1 示差檢測器

取三氯蔗糖標準工作液分別進樣20.0μL，在上述色譜條件下測定峯面積，然後作峯面積三氯蔗糖濃度（mg/mL）標準曲線，曲線方程依示差檢測原理，見式（1）：

y =ax+b   ………（1）

式中：

y ——峯面積；

a、b ——與檢測池溫度、流動相性質等實驗條件有關的常數；

x ——三氯蔗糖的濃度，單位爲毫克每毫升（mg/mL）。

7.3.2 5.3.2 蒸發光散射檢測器

取三氯蔗糖標準工作液分別進樣20.0μL，在給定的色譜條件下測定峯面積，然後作峯面積三氯蔗糖濃度（mg/mL）標準曲線，曲線方程依蒸發光散射檢測原理，見式（2）：

y=bx^a   ………（2）

式中：

y ——峯面積；

a、b ——與蒸發室溫度、流動相性質等實驗條件有關的常數；

x ——三氯蔗糖的濃度，單位爲毫克每毫升（mg/mL）。

按儀器數據處理軟件的處理方式不同，也可作對數方程，即lgy=b+algx。

7.4 5.4 試樣溶液的測定

取製備的試樣溶液和空白試樣溶液各20.0μL進樣，進行高效液相色譜分析。以保留時間定性，以峯面積外標法定量，見附錄B。

8 6 分析結果的表述

試樣中三氯蔗糖含量按式（3）計算：

式中：

X ——試樣中三氯蔗糖的含量，單位爲克每千克（g/kg）；

c ——由標準曲線查得試樣進樣液中三氯蔗糖的濃度，單位爲毫克每毫升（mg/mL）；

c₀——由標準曲線查得空白試樣進樣液中三氯蔗糖的濃度，單位爲毫克每毫升（mg/mL）；

V ——試樣定容體積，單位爲毫升（mL）；

m ——試樣質量，單位爲克（g）；

1000 ——換算係數。

結果保留三位有效數字。

9 7 精密度

在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。

10 8 其他

當取樣量2.00 g，定容至1.00 mL時，檢出限均爲0.0025 g/kg，定量限均爲0.0075 g/kg。

11 附錄A 複雜情況下的液相色譜洗脫程序（蒸發光散射檢測器適用）

當檢測樣品基質複雜，強保留物質影響後續檢測時，可採取洗脫程序，見表A.1。

表A.1 液相色譜洗脫程序（蒸發光散射檢測器適用）

12 附錄B 三氯蔗糖（蔗糖素）高效液相色譜圖

三氯蔗糖（蔗糖素）標準溶液（0.200 mg/mL）的液相色譜圖（蒸發光散射檢測器）見圖B.1。

圖B.1 三氯蔗糖（蔗糖素）標準溶液的液相色譜圖（蒸發光散射檢測器）

三氯蔗糖（蔗糖素）標準溶液（0.200 mg/mL）的液相色譜圖（示差檢測器）見圖B.2。

圖B.2 三氯蔗糖（蔗糖素）標準溶液的液相色譜圖（示差檢測器）