3 注射用A型肉毒毒素藥典標準
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 漢語拼音
Zhusheyong A Xing Roudu Dusu
3.1.3 英文名
Botulinum Toxin Type A for Injection
3.2 定義、組成及用途
3.3 1 基本要求
生產和檢定用設施、原材料及輔料、水、器具、動物等應符合“凡例”的有關要求。
3.4 2 製造
3.4.1 2.1 菌種生產用菌種
3.4.1.1 2.1.1 名稱及來源
生產用菌種爲產毒力高的A型肉毒梭菌Hall株或其他A型肉毒梭菌。
3.4.1.2 2.1.2 種子批的建立
3.4.1.3 2.1.3 種子批的傳代
3.4.1.4 2.1.4 種子批菌種的檢定
檢定菌種可採用明膠瓊脂半固體培養基、血瓊脂平板培養基、乳糖卵黃瓊脂平板培養基或其他適宜培養基。菌種應具有典型的形態特徵和培養特性及生化特性，應產生不低於1.0×105LD50/ml的A型肉毒毒素。
3.4.1.5 2.1.5 種子批的保存
主種子批和工作種子批均應凍千保存於8℃以下，工作種子批也可接種於適宜培養基，8℃以下保存。
3.4.2 2.2 毒素原液
3.4.2.1 2.2.1 生產用種子
啓開工作種子批菌種復甦後，在適宜培養基上擴增培養，製備生產用種子。
3.4.2.2 2.2.2 產毒培養基
採用含胰酶消化酪蛋白、酵母透析液（或酵母浸出粉）、葡萄糖培養基，或經批准的其他適宜培養基。
3.4.2.3 2.2.3 接種和培養
生產用種子接種產毒培養基後，在適宜溫度培養一定時間。每瓶取樣鏡檢，應無雜菌，經除菌過濾，即爲原制毒素，其毒力應不低於1.0×105LD50/ml。
3.4.2.4 2.2.4 結晶毒素
3.4.2.4.1 2.2.4.1 純化及結晶
原制毒素可經等電點沉澱、核糖核酸酶處理、離子交換色譜、硫酸銨濃縮和透析及自然結晶等程序，或用經批准的其他適宜方法進行純化。純化毒素經自然結晶後即爲結晶毒素。
3.4.2.4.2 2.2.4.2 保存
於2～8℃避光保存。
3.4.2.4.3 2.2.4.3 結晶毒素檢定
按3.1項進行。
3.4.2.5 2.2.5 透析
3.4.2.6 2.2.6 原液檢定
按3.2項進行。
3.4.3 2.3 半成品
3.4.3.1 2.3.1 配製
用生理氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液將已知毒力的毒素溶液稀釋至適當濃度，加入適宜穩定劑，使每1ml毒素溶液的毒力在規定範圍內。
3.4.3.2 2.3.2 半成品檢定
按3.3項進行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分裝及凍幹
應符合“生物製品分裝和凍幹規程”及2010年版藥典三部附錄Ⅰ A有關規定。在凍幹過程中製品溫度應不高於35℃，真空或充氮封口。
3.4.4.3 2.4.3 規格
3.4.4.4 2.4.4 包裝
應符合“生物製品包裝規程”及2010年版藥典三部附錄Ⅰ A有關規定。
3.5 3 檢定
3.5.1 3.1 結晶毒素檢定
3.5.1.1 3.1.1 結晶毒素
3.5.1.2 3.1.2 毒力測定
可選擇下列一種方法進行。毒力應不低於1.0×106LD50/ml。
3.1.2.1 本品溶解透析後做適當倍數稀釋，按Broff法測定毒力，計算出本品的毒力。即取體重14～16g小鼠5只，每隻尾靜脈注射0.1ml本品（或稀釋的供試品），求其平均死亡時間（以分鐘計），從毒素劑量與死亡時間的標準曲線中求得毒素的毒力。
3.1.2.2 按常規方法稀釋本品，各稀釋度腹腔注射體重14～16g小鼠4只，每隻注射0.5ml，根據動物4天內死亡情況，用統計學方法（Reed-Muench法）計算本品的毒力。
3.5.1.3 3.1.3 純度測定
3.1.3.1 根據波長280nm處吸光度計算的蛋白質濃度及3.1.2項測定的毒力，求出結晶毒素的純度，每1mg蛋白質純度應在1.0×107LD50以上。
3.1.3.2 波長260nm處吸光度與波長280nm處吸光度之比（A260/A280）應不高於0.6。
3.5.1.4 3.1.4 特異性檢查
取注射用水1ml，溶解A、B、C、D、E、F型凍乾肉毒診斷血清，分別於各血清管中加1ml含100LD50左右的本品。另取2支試管，各加1ml生理氯化鈉溶液，再分別加入上述同濃度的本品溶液，其中1支煮沸20分鐘作爲毒素陰性對照，另1支與混有毒素的診斷血清管同時置37℃結合45分鐘，作爲毒素陽性對照。各組分別腹腔注射體重14～16g小鼠2～3只，每隻注射0.5ml，觀察4天，記錄動物存亡情況。本品應爲A型。
3.5.2 3.2 原液檢定
按3.1.2～3.1.4項進行。
3.5.3 3.3 半成品檢定
3.5.3.1 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.4 3.4 成品檢定
除水分測定、裝量差異檢查外，每瓶加入0.5ml氯化鈉注射液，復溶後進行以下檢定。
3.5.4.1 3.4.1 鑑別試驗
按3.1.4項進行，應符合規定。每批成品至少抽取1瓶做鑑別試驗。
3.5.4.2 3.4.2 物理檢查外觀
應爲白色疏鬆體，復溶後輕輕搖動，應呈無色或淡黃色澄明液體。
3.5.4.3 3.4.3 化學檢定水分
應不高於3.0%（2010年版藥典三部附錄Ⅶ D）。
3.5.4.4 3.4.4 效價測定
取本品10～20瓶混合測定效價。復溶後，將等量混合的溶解毒素進行不同倍數稀釋，各稀釋度分別腹腔注射體重14～16g小鼠4只，每隻注射0.5ml，觀察4天，記錄小鼠死亡數，用統計學方法計算每瓶本品的LD50（1LD50定爲1U）。應爲標示量的80%～120%。
3.5.4.5 3.4.5 無菌檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。
3.5.4.6 3.4.6 細菌內毒素檢查
依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ E），應不高於7.5EU/瓶。
3.5.4.7 3.4.7 稀釋劑
3.6 4 保存、運輸及有效期
3.7 5 使用說明
3.8 版本
《中華人民共和國藥典》2010年版