1 拼音
GB 8270—2014 shí pǐn ān quán guó jiā biāo zhǔn shí pǐn tiān jiā jì tián jú táng gān
中華人民共和國國家標準 GB 8270—2014《食品安全國家標準 食品添加劑 甜菊糖苷》由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會於2015年01月28日發佈，自2015年07月28日起實施，代替GB 8270—1999《食品添加劑 甜菊糖甙》。
2 前言
本標準代替GB 8270—1999《食品添加劑 甜菊糖甙》。
本標準與GB 8270—1999相比，主要變化如下：
——標準名稱修改爲“食品安全國家標準 食品添加劑 甜菊糖苷”；
——修改了標準結構；
——取消了理化指標中的等級要求，統一指標；
——修改了鑑別試驗；
食品安全國家標準
3 1 範圍
本標準適用於以甜葉菊（Stevia Rebaudiana Bertoni）幹葉爲原料，經提取、精製而得的食品添加劑甜菊糖苷。主要糖苷爲甜菊苷和瑞鮑迪苷A，其他已知糖苷包括瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊雙糖苷。
4 2 分子式、結構式和相對分子質量
4.1 2.1 主要糖苷的分子式
甜菊苷：C38H60O18
瑞鮑迪苷A：C44H70O23
4.2 2.2 9種糖苷的結構式
9種糖苷的壓合物名稱、R1位取代基和R2位取代基見表1。
表1 9種糖苷的壓合物名稱、R1位取代基和R2位取代基
化合物名稱 | |||
中文名稱 | 英文名稱 | R1位取代基 | R2位取代基 |
stcvioside | β-Glc | β-Glc-β-Glc（2→1） | |
瑞鮑迪苷A | rebaudioside A | β-Glc | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鮑迪苷B | rcbaudioside B | H | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鮑迪苷C | rebaudioside C | β-Glc | β-Glc-α-Rha（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鮑迪苷D | rcbaudioside D | β-Glc-β-Glc（2→1） | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鮑迪苷F | rcbaudioside F | β-Glc | β-Glc-β-Xyl（2→1） β-Glc（3→1） |
表1（續）
化合物名稱 | |||
中文名稱 | 英文名稱 | R1位取代基 | R2位取代基 |
杜克苷A | dulcoside A | β-Glc | β-Glc-α-Rha（2→1） |
甜茶苷 | rubusoside | β-Glc | β-Glc |
甜菊雙糖苷 | stcviolbioside | H | β-Glc-β-Glc（2→1） |
4.3 2.3 主要糖苷的相對分子質量
瑞鮑迪苷A:967.03（按2007年國際相對原子質量）
6 附錄A 檢驗方法
6.1 A.1 一般規定
本標準所用試劑和水，在沒有註明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T 6682中規定的三級水。試驗中所用標準滴定溶液、雜質測定用標準溶液、製劑及製品，在沒有註明其他要求時，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的規定製備。試驗中所用溶液在未註明用何種溶劑配製時，均指水溶液。
6.2 A.2 鑑別試驗
A.2.1 甜菊苷和瑞鮑迪苷A試驗
在甜菊糖苷含量試驗中，試樣溶液的液相色譜圖中甜菊苷和瑞鮑迪苷A兩個主峯應與混合標準溶液的色譜圖相對應。
稱取1g試樣，溶於100 mL水中，用酸度計測定試樣溶液的pH在4.5～7.0。
6.3 A.3 甜菊糖苷含量的測定
6.3.1 A.3.1 方法一
A.3.1.1 試劑和材料
A.3.1.1.1 乙腈：色譜純。
A.3.1.1.2 磷酸二氫鈉：色譜純。
A.3.1.1.3 磷酸：色譜純。
A.3.1.1.4 水：GB/T 6682—2008中規定的一級水。
A.3.1.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的體積比爲30：70。
A.3.1.1.6 磷酸鈉緩衝液（pH 2.6）：稱取1.20 g磷酸二氫鈉（NaH2PO4），溶於800 mL水中，用磷酸調節pH至2.6。
A.3.1.1.7 甜菊苷標準品：甜菊苷含量（質量分數，以幹基計）≥99.0%。
A.3.1.1.8 瑞鮑迪苷A標準品：瑞鮑迪苷A含量（質量分數，以幹基計）≥99.0%。
A.3.1.1.9 其他7種糖苷標準品：瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊雙糖苷。
6.3.1.1 A.3.1.2 儀器和設備
6.3.1.2 A.3.1.3 參考色譜條件
A.3.1.3.1 色譜柱：C18反相色譜柱，250 mm×4.6 mm，粒徑5μm；或其他等效的色譜柱。
A.3.1.3.2 流動相：乙腈：磷酸鈉緩衝液=32：68。
A.3.1.3.3 流動相流速：1.0 mL/min。
A.3.1.3.4 檢測波長：210 nm。
A.3.1.3.5 進樣量：2μL～10μL。
A.3.1.3.6 柱溫：40℃。
6.3.1.3 A.3.1.4 分析步驟
分別稱取適量甜菊苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷標準品，置於同一個容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解後定容，得到混合標準品溶液。混合標準品溶液用於確定9種糖苷的相對保留時間。
A.3.1.4.2 標準溶液的製備
分別稱取0.05 g甜菊苷標準品和瑞鮑迪苷A標準品，精確至0.001 g，分別置於50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解後稀釋至刻度，得到甜菊苷標準溶液和瑞鮑迪苷A標準溶液。
稱取0.05 g～0.1 g試樣，精確至0.001 g，置於50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解後稀釋至刻度，得到試樣溶液。
6.3.1.4 A.3.1.5 測定
在A.3.1.3參考色譜條件下，分別對混合標準品溶液、標準溶液和試樣溶液進行色譜分析。將試樣溶液的色譜圖與混合標準品溶液的色譜圖相比較，以確定試樣溶液色譜圖中各組分對應的峯。記錄試樣溶液色譜圖中甜菊苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷的峯面積及標準溶液色譜圖中甜菊苷和瑞鮑迪苷A的峯面積。
6.3.1.5 A.3.1.6 結果計算
瑞鮑迪苷A含量（以幹基計）的質量分數wa按式（A.1）計算：
式中：
mR——瑞鮑迪苷A標準溶液中瑞鮑迪苷A的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
m——試樣溶液中試樣的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
其他8種糖苷含量（以幹基計）的質量分數wi按式（A.2）計算：
式中：
i——s、b、c、d、f、da、ru、sb，分別對應甜菊苷、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷；
ms——甜菊苷標準溶液中甜菊苷的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
m——試樣溶液中試樣的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
fi——i組分與甜菊苷的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.00（瑞鮑迪苷B）、1.18（瑞鮑迪苷C）、1.40（瑞鮑迪苷D）、1.16（瑞鮑迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊雙糖苷）；
由式（A.1）和式（A.2）計算得到9種組分的含量wa、ws、wb、wc、wd、wf、wda、wru和wsb，取各組分含量之和即爲試樣中甜菊糖苷含量。
6.3.2 A.3.2 方法二
6.3.2.1 A.3.2.1 試劑和材料
A.3.2.1.1 乙腈：色譜純。
A.3.2.1.2 磷酸二氫鈉：色譜純。
A.3.2.1.3 磷酸：色譜純。
A.3.2.1.4 水：GB/T 6682—2008中規定的一級水。
A.3.2.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的體積比爲30：70。
A.3.2.1.6 磷酸鈉緩衝液（pH 2.6）：稱取1.20 g磷酸二氫鈉（NaH2PO4），溶於800 mL水中，用磷酸調節pH至2.6，用水稀釋至1000 mL。
A.3.2.1.7 甜菊苷標準品：甜菊苷含量（質量分數，以幹基計）≥99.0%。
A.3.2.1.8 其他8種糖苷標準品：瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊雙糖苷。
6.3.2.2 A.3.2.2 儀器和設備
同A.3.1.2。
6.3.2.3 A.3.2.3 參考色譜條件
同A.3.1.3。
6.3.2.4 A.3.2.4 分析步驟
分別稱取適量甜菊苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷標準品，置於同一個容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解後定容，得到混合標準品溶液。混合標準品溶液用於確定9種糖苷的相對保留時間。
A.3.2.4.2 標準溶液的製備
稱取0.05 g甜菊苷標準品，精確至0.001 g，置於50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解後稀釋至刻度，得到甜菊苷標準溶液。A.3.2.4.3 試樣溶液的製備稱取0.05 g～0.1 g試樣，精確至0.001 g，置於50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解後稀釋至刻度，得到試樣溶液。
6.3.2.5 A.3.2.5 測定
在A.3.2.3參考色譜條件下，分別對混合標準品溶液、標準溶液和試樣溶液進行色譜分析。將試樣溶液的色譜圖與混合標準品溶液的色譜圖相比較，以確定試樣溶液色譜圖中各組分對應的峯。記錄試樣溶液色譜圖中甜菊苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷的峯面積及標準溶液色譜圖中甜菊苷的峯面積。
6.3.2.6 A.3.2.6 結果計算
9種糖苷含量（以幹基計）的質量分數wi按式（A.3）計算：
式中：
i——s、a、b、c、d、f、da、ru、sb，分別對應甜菊苷、瑞鮑迪苷A、瑞鮑迪苷B、瑞鮑迪苷C、瑞鮑迪苷D、瑞鮑迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊雙糖苷；
ms——甜菊苷標準溶液中甜菊苷的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
m——試樣溶液中試樣的質量（以幹基計），單位爲毫克（mg）；
fi——i組分與甜菊苷的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.20（瑞鮑迪苷A）、1.00（瑞鮑迪苷B）、1.18（瑞鮑迪苷C）、1.40（瑞鮑迪苷D）、1.16（瑞鮑迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊雙糖苷）；
由式（A.3）計算得到9種組分的含量訓ws、wa、wb、wc、wd、wf、wda、wru和wsb，取各組分含量之和即爲試樣中甜菊糖苷含量。
6.4 A.4 甲醇和乙醇的測定
6.4.1 A.4.1 試劑和材料
A.4.1.1 甲醇：色譜純。
A.4.1.2 乙醇：色譜純。
A.4.1.3 水：一級水。
6.4.2 A.4.2 儀器和設備
6.4.3 A.4.3 參考色譜條件
A.4.3.1 色譜柱：鍵合聚乙二醇熔融石英毛細管柱（柱長爲30 m，柱內徑爲0.25 mm，膜厚度爲0.25 μm），或其他等效的色譜柱。
A.4.3.2 載氣：氮氣（純度≥99.99%）。
A.4.3.3 載氣流量：5.0 mL/min。
A.4.3.4 柱溫：40℃保持5 min，以10℃/min升溫至120℃，保持2 min，最後以16℃/min升溫至200℃，保持5 min。
A.4.3.5 進樣口溫度：200℃。
A.4.3.6 檢測器溫度：250℃。
A.4.3.7 進樣體積：1 mL。
A.4.3.8 分流比：1：50。
6.4.4 A.4.4 參考頂空條件
A.4.4.1 頂空瓶溫度：80℃。
A.4.4.2 頂空瓶平衡時間：30 min。
6.4.5 A.4.5 分析步驟
6.4.5.1 A.4.5.1 空白溶液的製備
移取2 mL水，置於頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。
6.4.5.2 A.4.5.2 標準溶液的製備
稱取0.1 g甲醇，精確至0.001 g，用水稀釋後轉移至一個1000 mL的容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得100 mg/L的甲醇標準儲備溶液。將該溶液配製成一系列濃度爲50 mg/L、20 mg/L、10 mg/L、5 mg/L和2.5 mg/L的甲醇標準溶液。移取上述系列濃度溶液各2 mL，分別置於頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。
稱取0.1 g乙醇，精確至0.001 g，用水稀釋後轉移至一個100 mL的容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得1000 mg/L的乙醇標準儲備溶液。將該溶液配製成一系列濃度爲750 mg/L、500 mg/L、200 mg/L、100 mg/L和50 mg/L的乙醇標準溶液。移取上述系列濃度溶液各2 mL，分別置於頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。
6.4.5.3 A.4.5.3 試樣溶液的製備
稱取1.0 g試樣，精確至0.001 g，用水溶解後轉移至一個10 mL的容量瓶中，在室溫下超聲處理約3 min，加水稀釋至刻度，搖勻。移取該溶液2 mL置於頂空瓶中，迅速壓緊瓶蓋，備用。
6.4.6 A.4.6 測定
在參考操作條件（A.4.3和A.4.4）下，分別對空白溶液、標準系列溶液和試樣溶液進行測定，記錄甲醇或乙醇的峯面積值。以標準系列溶液色譜圖中甲醇或乙醇的峯面積值爲y軸，以對應溶劑濃度（mg/L）爲X軸，繪製標準曲線，得到甲醇標準曲線或乙醇標準曲線。根據試樣溶液色譜圖中甲醇或乙醇的峯面積值，從標準曲線求得試樣溶液中甲醇或乙醇的濃度（mg/L）。
6.4.7 A.4.7 結果計算
甲醇或乙醇含量w以毫克每千克（mg/kg）計，按式（A.4）計算：
式中：
c——從標準曲線求得的試樣溶液中甲醇或乙醇的濃度，單位爲毫克每升（mg/L）；
m——試樣的質量，單位爲克（g）。
