4 不穩定血紅蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 不穩定血紅蛋白的測定原理
（1）熱不穩定試驗：不穩定Hb在體外經加熱後加速變性沉澱。由加溫後血紅蛋白溶液濃度的減低可以計算出被沉澱的不穩定Hb含量。
（2）異丙醇試驗：異丙醇是一種非極性化合物，可使血紅蛋白內部非極性的氫鍵結合減弱，從而血紅蛋白的穩定性減低。正常血紅蛋白加入異丙醇孵育於37℃ 40min以後纔出現沉澱，而不穩定血紅蛋白孵育5min即出現沉澱，故可用以鑑定不穩定血紅蛋白。
（3）紅細胞變性珠蛋白小體檢查：不穩定血紅蛋白與氧化還原染料煌焦油藍共同孵育後，可形成變性的珠蛋白小體（Heinz小體）貼於紅細胞膜附近，又稱爲紅細胞包涵體。
4.5 試劑
（1）熱不穩定試驗：
①0.1mol/L Tris緩衝液：（配製方法見異丙醇試驗）。
②氰化高鐵血紅蛋白稀釋液，取NaHCO30.1g，KCN 5mg及高鐵氰化鉀20mg溶於100ml蒸餾水中。
（2）異丙醇試驗：
①0.1mol/L Tris緩衝液（pH7.4）：取三羥甲基氨基甲烷1.21g溶於20ml蒸餾水中。以0.1mol/LHCl校正pH達7.4（約需0.1mol/LHCl 70～80ml），加蒸餾水到100ml，密封冰箱保存。
②17%（V/V）異丙醇溶液：取異丙醇17ml於100ml容量瓶中，再加pH7.4 Tris緩衝液至刻度。加蓋密封，冰箱可存1周。
（3）紅細胞變性珠蛋白小體檢查：10g/L煌焦油藍：煌焦油藍1g，檸檬酸鈉0.4g溶解於100ml生理鹽水中，過濾，冰箱中可保存2個月。
4.6 操作方法
（1）熱不穩定試驗：
①取新鮮製備的溶血液0.5ml，加入0.1mol/LTris緩衝液2.5ml中，混勻後，取1.5ml於另1試管中。
②將兩試管均加塞，其一放於冰箱做對照，另一放於50℃水浴中，爲測定管，計時。
③2h後同時取出兩管，將加熱管用自來水衝冷後，兩管同時離心。3000r/min，10min。
④取試管3支分別標明空白、對照、測定。各加入5ml氰化高鐵血紅蛋白稀釋液。然後於空白管加入Tris緩衝液0.1ml，對照，測定管分別加入離心
後的相應溶血液0.1ml，室溫放置20min。
⑤以空白調零，分別在540nm測兩管吸光。
⑥計算：
沉澱血紅蛋白%＝
（2）異丙醇試驗：
①將放於37℃水浴中預熱5min的裝有17%異丙醇溶液1ml的小試管取出，立即加入0.1ml血紅蛋白液，混勻後再放入水浴中，立即計時，於5、10、20、30、40min分別觀察沉澱產生。
②結果判斷：
（＋＋＋＋）5min出現沉澱，20min出現大塊沉澱。
（＋＋＋） 5min出現混濁。到40min出現粗顆粒。
（＋＋） 10min出現混濁，到40min出現細顆粒。
（＋） 20min出現混濁，40min出現極細顆粒。
（－） 溫育40min後仍透明或稍混濁而無顆粒。
①取煌焦油藍試劑0.5ml置小試管內，加新鮮血3～4滴，混勻，加塞，置37℃溫箱中孵育。
②在10min，1h，24h各取出一滴製成薄血片，立即風乾，油鏡下觀察。
③在油鏡下計數500個紅細胞，記錄出現藍色顆粒狀折光小體的紅細胞數目，求出陽性百分率。
4.7 正常值
加熱法：＜5%。
4.8 化驗結果臨牀意義
4.9 附註
（1）熱不穩定試驗：
①被檢Hb要新鮮製備。陳舊Hb可轉變爲高鐵Hb。會出現假陽性。
②保溫時間要準確，溫度要恆定以免出現假陽性。
（2）異丙醇試驗：
②血紅蛋白液須新鮮。如保存較久，出現高鐵血紅蛋白，可形成假陽性。
②孵育時間與不穩定血紅蛋白性質有關。一般1～2h即可出現明顯的藍色球形折光小體，但也有的不穩定血紅蛋白需更長時間的孵育。纔出現典型的變性珠蛋白小體。
③製片後應及時計數，存放過久，則紅細胞內變性珠蛋白小體消失。如不能及時計數，可存放於乾燥器或37℃溫箱。
④煌焦油藍染色後不能用伊紅-美藍染色液復染，復染後可減少計數結果。
⑤變性珠蛋白小體需與網織紅細胞鑑別。前者包涵體呈較大圓形，均勻，彌散沉澱，整個紅細胞基質消失，而且需培育10min以上才逐漸清晰。而網織紅細胞在血液與煌焦油藍混合後數分鐘內顯示出網狀沉澱，紅細胞基質完整。