2010年版藥典三部附錄XIV

心氣虛，則脈細；肺氣虛，則皮寒；肝氣虛，則氣少；腎氣虛，則泄利前後；脾氣虛，則飲食不入。

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1 拼音

2010 nián bǎn yào diǎn sān bù fù lù XIV

《中華人民共和國藥典》（2010年版）三部附錄XIV 細菌生化反應培養基

下列各類培養基常用於測定細菌的糖類代謝試驗、氨基酸和蛋白質代謝試驗、碳源和氮源利用試驗等生化反應。

1.1 1．糖、醇發酵 培養基

（1）成分

基礎液

蛋白腖 10g

氯化鈉 5g

0.5%酸性品紅指示液 10ml

（或0.4%溴麝香草酚藍指示液）（6ml）

水 1000ml

糖、醇類

每100ml基礎液內各加0.5g

（2）製法取蛋白腖和氯化鈉加入水中，微溫使溶解，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，加入指示液混勻。每100ml分別加入1種糖、醇或糖苷，混勻後分裝於小管中（若需觀察產氣反應，在小管內另放置杜漢小倒管）。於116℃滅菌15分鐘。

常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纖維二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、澱粉、甘露醇、衛矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水楊素、七葉苷等。

（3）用途鑑別各種細菌對糖類的發酵生化反應，發酵者產酸，培養基變色（加酸性品紅者由無色至紅色或再至黃色；加溴麝香草酚藍者由藍色至黃色）；產氣時，小倒管內有小氣泡。

1.2 2．七葉苷培養基

1.3 （1）成分

蛋白腖 5g

七葉苷 3g

磷酸氫二鉀 1g

水 1000ml

枸櫞酸鐵 0.5g

（2）製法除七葉苷外，取上述成分混合，微溫使溶解，加人七葉苷混勻，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，分裝於試管中，121℃滅菌15分鐘。

（3）用途用於鑑別細菌對七葉苷的水解試驗，產生棕黑色沉澱爲陽性反應。

1.4 3．磷酸鹽葡萄糖腖水培養基

（1）成分

蛋白腖 7g

葡萄糖 5g

磷酸氫二鉀 3.8g

水 1000ml

（2）製法取上述成分混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，分裝於小試管中，121℃滅菌15分鐘。

（3）用途用於鑑別細菌的甲基紅試驗（M-R反應）和乙酰甲基甲醇試驗（V-P反應）。

①甲基紅試驗（M-R反應）取可疑菌落或斜面培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中，置35℃培養2～5天，於培養管內加入甲基紅指示液（稱取甲基紅0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解後，加水至500ml）數滴，立即觀察，呈鮮紅色或橘紅色爲陽性，呈黃色爲陰性。

②乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P反應）取可疑菌落或斜面培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中，置35℃培養48小時，量取2ml培養液，加入α-萘酚乙醇試液（稱取α-萘酚5g，加無水乙醇溶解使成100ml）1ml，混勻，再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，立刻或數分鐘內出現紅色，即爲陽性反應；無紅色反應爲陰性，如爲陰性反應，置35℃水浴4小時後再觀察。

1.5 4．蛋白腖水培養基

（1）成分

蛋白腖 10g

水 1000ml

氯化鈉 5g

（2）製法取上述成分混合，微溫使溶解，調pH值使蔑菌後爲7.3±0.1，分裝於小試管．121℃滅菌15分鐘。

（3）用途用於鑑別細菌能否分解色氨酸而產生靛基質的生化反應。

①靛基質試驗取可疑菌落或斜面培養物，接種於蛋白腖水培養基中，置35℃培養24～48小時，必要時培養4～5天，沿管壁加入靛基質試液數滴，液麪呈玫瑰紅色爲陽性，呈試劑本色爲陰性。

②靛基質試液稱取對二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇（或異戊醇）75ml，充分振搖，使完全溶解後，再取鹽酸25ml徐徐滴入，邊加邊振搖，以免驟熱導致溶液色澤變深。或稱取對二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振搖，使完全溶解後，再取鹽酸20ml徐徐滴入。

1.6 5．三糖鐵瓊脂 培養基

（1）成分

蛋白腖 20g

硫酸亞鐵 0.2g

牛肉浸出粉 5g

硫代硫酸鈉 0.2g

乳糖 10g

0.2%酚磺酞指示液 12.5ml

蔗糖 10g

瓊脂 12～15g

葡萄糖 1g

水 1000ml

氯化鈉 5g

（2）製法除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶脹後，再加入其餘成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，製成高底層（2～3cm）短斜面。

（3）用途用於初步鑑別腸桿菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察：取可疑菌落或斜面培養物，做高層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養24～48小時，觀察結果。培養基底層變黃色爲葡萄糖發酵陽性，斜面層變黃色爲乳糖、蔗糖發酵陽性；底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。

1.7 6．克氏雙糖鐵瓊脂 培養基

（1）成分

蛋白腖 20g

枸櫞酸鐵 0.3g

牛肉浸粉 3g

硫代硫酸鈉 0.3g

酵母浸粉 3g

0.2%酚磺酞指示液 12.5ml

乳糖 10g

瓊脂 12～15g

葡萄糖 1g

水 1000ml

氯化鈉 5g

（2）製法除乳糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，加入瓊脂，加熱溶脹後，再加入其餘成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，製成高底層（2～3cm）短斜面。

（3）用途用於初步鑑別腸桿菌科細菌對糖類的發酵反應和產生硫化氫試驗。

方法和結果觀察：取可疑菌落或斜面培養物，做高層穿刺和斜面劃線接種，置35℃培養24～48小時，觀察結果。培養基底層變黃色爲葡萄糖發酵陽性，斜面層呈黃色爲乳糖發酵陽性，斜面層呈紅色爲乳糖發酵陰性；底層或整個培養基呈黑色表示產生硫化氫。

1.8 7．脲（尿素）培養基

（1）成分

蛋白腖 1g

0.2%酚紅溶液 6ml

葡萄糖 1g

20%無菌脲溶液 100ml

氯化鈉 5g

水 1000ml

磷酸氫二鉀 2g

（2）製法除脲溶液外，取上述成分，混合，調pH值使滅菌後爲6.9±0.1，混勻後，121℃滅菌15分鐘，冷至50～55℃，加入無菌脲溶液（經膜除菌過濾），混勻，分裝於滅菌試管中。

（3）用途用於鑑別細菌的尿素酶反應。

方法和結果觀察：取可疑菌落或少量斜面培養物接種於培養基內，置35℃培養24小時，觀察結果。培養基變爲紅色爲尿素酶反應陽性；不變色爲陰性，陰性者需延長觀察至1周。

1.9 8．苯丙氨酸 瓊脂 培養基

（1）成分

磷酸氫二鈉 1g

氯化鈉 5g

酵母浸膏 3g

瓊脂 12～15g

DL-苯丙氨酸（DL-phenylalanine） 2g

水 1000ml

（或L-苯丙氨酸）（1g）

（2）製法除瓊脂外，取各成分溶於水，調pH值使滅菌後爲7.3±0.1，再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝試管，121℃滅菌15分鐘，製成長斜面。

（3）用途用於鑑別細菌的苯丙氨酸脫氨酶試驗（也稱苯丙酮酸試驗）。

方法和結果觀察：取斜面培養物，大量接種於苯丙氨酸瓊脂斜面，置35℃培養4小時或18～24小時，取4～5滴10%三氯化鐵溶液試劑，由斜面上部流下，若出現墨綠色，即爲苯丙氨酸脫氨酶試驗陽性；倘若不變色則爲陰性。

1.10 9．氨基酸脫羧酶試驗培養基

（1）成分

①基礎液

蛋白腖 5g

1.6%溴甲酚紫指示液 1ml

酵母浸出粉 3g

水 1000ml

葡萄糖 1g

⑦氨基酸

L-賴氨酸 0.5g（需加鹼溶液溶解）

L-鳥氨酸 0.5g （需加鹼溶液溶解）

L-精氨酸 7.5g （不需加鹼溶液溶解）

（2）製法

先配製基礎液備用；將溶解後的3種氨基酸，各分別加至100ml基礎液（使氨基酸的終濃度爲0.5%），混勻，調pH值使滅菌後爲6.8。分裝於小試管中，每管2.5ml並滴加1層液體石蠟；同時分裝一部分基礎液於小試管，作爲對照培養基，均置116℃滅菌10分鐘。

（3）用途用於鑑別細菌的脫羧酶、雙水解酶試驗。方法和結果觀察：取疑似菌斜面培養物分別接種於上述3種培養基及基礎液對照培養基，置35℃培養24～48小時。在培養初期由於待檢細菌發酵葡萄糖產酸，試驗培養基和對照培養基應呈黃色，繼續培養時，試驗培養基如呈紫色或紫紅色，即爲陽性反應；如至培養末期，培養基仍同對照管呈黃色，則判爲陰性反應。