3 概述
IgM佔血清免疫球蛋白總量的6%，主要存在血管內，是機體受抗原刺激後最先產生的抗體，起“先鋒免疫”作用具有很強的細胞毒活性和細胞溶解活性。由於其主要在血管內，是抗血管內感染的第一線抗體，對防止敗血症的發生有重要作用。
4 血清免疫球蛋白M的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清免疫球蛋白M的測定原理
（1）單向免疫擴散法：將被檢血清做一定倍數的稀釋，加入抗體瓊脂板的孔內，讓其自由擴散，當抗原抗體比例適當，出現白色沉澱環。其直徑與抗原（IgM）濃度的對數成直線關係。查標準曲線，乘以稀釋倍數即得免疫球蛋白的含量。
①透射比濁法：抗原與抗體在比例合適（抗體必須過量）時，形成免疫複合物（IC），後者在PEG等作用下，在液相中形成微粒。當抗體濃度固定時，IC的量與檢樣中抗原的量成正比，測其吸光度可間接反映抗原的含量。
②終點散射比濁法：抗原和相應抗體結合後，經一定時間形成複合物，用散射比濁儀，測定複合物散射光強度，間接反映抗原含量。
4.5 試劑
①0.12mol/L pH 8.6巴比妥緩衝液。
②10g/L 0.12mol/L pH 8.6巴比妥瓊脂。
③抗人IgG、IgA、IgM血清和參考標準血清，生物製品所供應。
④5ml/L過氧乙乙乙酸。
⑤8cm×14.5cm，厚3mm的玻璃板或按本單位檢驗數量設計數塊，洗淨後乾燥備用。
⑥“凹”型模板：自制用厚5mm、長14.5cm，寬8cm的玻璃絲層壓板或電木製成，呈“凹”型，邊寬1cm，中間部分去掉即成。也可用生物製品所出售的成品塑料模板。
⑦打孔器：爲金屬圓筒，內徑3mm。
⑧鐵夾子或文具夾1套3只。
①透射比濁法：包括：抗血清（要求高效價、高純度、高親和力，且不含任何干擾粒子）；參考品（採用國際參考品或經其標化的參考品）；緩衝液（各儀器常有指定緩衝液）。
②終點散射比濁法：免疫比濁儀配有IgG、IgA、IgM、C3、C4試劑盒，內含稀釋液、緩衝液、抗血清等，按介紹配製。
4.6 操作方法
①抗體瓊脂板的製備：將“凹”型模板夾於兩塊玻璃板之間，在玻璃板左、右、下各用鐵夾1只夾緊。將上述加熱融化的10g/L瓊脂分裝3支試管，每管14.7ml，然後移入56℃水浴中，待試管內溫度降至56℃後，分別加入上述抗人IgG、IgA、IgM血清（例如其抗血清效價爲1∶50，即各管分別加入0.3ml抗人IgG、IgA、IgM血清），使其最終稀釋倍數符合瓶籤所標單擴散效價，混勻後，分別倒入模板內（要迅速，防止瓊脂凝固）。冷卻後，取去上層玻璃及模板，即得平整均勻的抗體瓊脂板。
②打孔：取打孔器在抗體瓊脂板上相距15mm（孔中心至孔中心）打孔，用針頭挑去孔內的瓊脂，孔邊要求圓而規整，無缺損，無毛刺。有現貨供應，可供選用。
③參考血清的稀釋。
A.取14支試管並編號2-15。
B.第2管加入生理鹽水0.1ml，從第3管起至第15管中加生理鹽水0.2ml。
C.取凍幹參考血清1支（標明0.5ml），先加蒸餾水0.5ml溶解後再加生理鹽水0.25ml，混勻後1∶1.5倍稀釋基礎液作第1管。
D.從第1管中先取0.3ml加入第2管，再取0.2ml加入第3管。
E.用0.2ml吸管從第2管內吸出0.2ml加入第4管，混勻後再吸出0.2ml加入第6管……，以此類推跳管稀釋至14管。另用0.2ml吸管從第3管內吸出0.2ml加入第5管，混勻後再吸0.2ml加入第7管……，以此類推跳管稀釋至15管。如此稀釋後各管中參考血清稀釋倍數分別爲1.5、2、3、4、6、8、12、16、24、32、48、64、96、128、192。
從第1、3、5、7、9管取樣作IgM標準曲線。從第4、6、8、10、12管取樣作IgA標準曲線。從第7、9、11、13、15管取樣作IgG標準曲線。
F.以8310參考血清爲例，經如上稀釋3種Ig各5管的含量與被檢標本的稀釋倍數見表1。
有的參考血清是以U/ml（即國際單位/ml）來表示，它與g/L的換算關係如下：
IgG：1U/ml＝0.0804g/L；IgA：1U/ml＝0.0142g/L；IgM：1U/ml＝0.00847g/L；IgD：1U/ml＝1.41mg/L。
④待檢血清的稀釋：取3支試管，分別標明IgG、IgA、IgM，然後依次加入生理鹽水0.49ml、0.45ml、0.4ml。用微量注射器取待檢血清10μl加於IgG試管中，取50μl加於IgA試管內，取100μl加於IgM試管內，混勻。待檢IgG、IgA、IgM的稀釋度則分別爲1∶50、1∶10、1∶5。
⑤加樣：取IgG、IgA、IgM不同濃度的參考血清分別在IgG、IgA、IgM抗體瓊脂板上各加3孔，每孔10μl。稀釋的待檢血清在三塊抗體瓊脂板上每個標本各加2孔，每孔10μl。
⑥將加好樣的抗體瓊脂板先放在水平的桌面上30min左右，再移至有蓋溼盒內，置37℃水箱內，IgG、IgA孵育24h，IgM孵育48h，觀察結果。如沉澱環不明顯，可用生理鹽水浸泡1h，中間換2次生理鹽水，再用5ml/L過氧乙乙乙酸浸泡10min。
⑦讀取結果：可用放大器，菌落計數器或用精度0.1mm遊標卡尺，準確地測量沉澱環直徑，分別量出參考血清各濃度和被檢血清之平均直徑。
⑧繪製標準曲線：在半對數紙上以參考血清含量爲橫座標，各濃度平均沉澱環（直徑一孔徑）2爲縱座標繪製曲線。若幾個點不在一條直線上，相差較大，應查找原因後重新測定。若幾個點基本在一條線上，可經統計迴歸方程計算後畫成一條標準曲線。
⑨以待檢血清的沉澱平均直徑（直徑-孔徑）2在標準曲線中查出其濃度，再乘以稀釋倍數，即爲IgM、IgA、IgG結果，以g/L報告之。
①透射比濁法：
A.抗血清濃度選擇：與參考品進行方陣滴定，最適稀釋度的原則爲：保持抗體過量，線性範圍較寬，與相應Ig反應後產生濁度較高。
B.標準曲線：將Ig參考品用稀釋液稀釋成不同濃度：IgG 5.0、9.0、13.0、17.0、21.0g/L；IgA 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0g/L；IgM 0.5、1.2、1.9、2.6、3.3g/L。每個稀釋度設3支復管，每管25μl。加入最適稀釋度抗血清，每管2.5ml。37℃水浴1h（IgG）或2h（IgA、IgM）後，用濁度計或比色計在495nm測吸光度。以Ig濃度爲橫座標，其吸光度爲縱座標繪製標準曲線。
C.標本檢測：檢測步驟與製備標準曲線相同。測IgG時，待檢血清1∶40稀釋；測IgA、IgM時1∶5稀釋。每批試驗同時制標準曲線，並設標本對照（標本加稀釋液）和抗血清對照。
②終點散射比濁法：用專用比濁管加入緩衝液0.6ml、1∶36（測IgG、IgA、IgM、C3、C4等）或1∶216（測IgG）稀釋樣品50μl，再加入抗血清50μl，混勻後37℃水浴30min。用激光免疫比濁儀，按預測項目（如IgG或IgA）鍵，以空白管（不加抗血清）調零，按測定鍵，測定各管，即顯示所測項目含量。
4.7 正常值
臍帶： 40～240mg/L （4～24mg/dl）
新生兒： 50～300mg/L （5～30mg/dl）
0.5～6個月：150～1090mg/L （15～109mg/dl）
6個月～2歲：430～2390mg/L （43～239mg/dl）
2～6歲： 500～1990mg/L （50～199mg/dl）
6～12歲： 500～2600mg/L （50～260mg/dl）
12～16歲： 450～2400mg/L （45～240mg/dl）
成人： 400～3450mg/L （40～345mg/dl）
注：正常值因標準品製備而變化。
4.8 化驗結果臨牀意義
（1）升高：巨球蛋白血癥、系統性紅斑狼瘡（SLE）、類風溼性關節炎、硬皮病、急、慢性病毒性肝炎、膽汁性肝硬化、隱匿性肝硬化、惡性腫瘤、傳染性單核細胞增多症、梅毒、黑熱病、錐蟲病、傷寒、弓形體病、乙型腦炎、單核細胞性白血病、霍奇金病等。臍帶血IgM升高：革蘭陰性桿菌感染、梅毒、風疹、鉅細胞病毒感染、單純皰疹、弓形體等宮內感染等。
（2）降低：原發性無丙種球蛋白血癥、非IgA和IgG型多發性骨髓瘤、霍奇金病、慢性淋巴細胞白血病、蛋白喪失性胃腸病等（表2）。
4.9 附註
IgM不通過胎盤如新生兒血清內IgM含量增高，提示有宮內感染，成人血清IgM升高，表示可能有急性感染。
4.10 相關疾病
敗血症、系統性紅斑狼瘡、紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、硬皮病、肝硬化、傳染性單核細胞增多症、梅毒、錐蟲病、傷寒、弓形體病、霍奇金病、風疹、單純皰疹、多發性骨髓瘤、慢性淋巴細胞白血病