3 概述
17-酮類固醇(17-ketosteroide,17-KS)指皮質激素及性激素中在17碳位上有酮基者,包括雄酮、表雄酮、去氫異雄酮、1l-氧雄酮、11-羥雄酮等,大部分以結合形式存在。17-酮類固醇主要是腎上腺及睾丸雄激素的代謝產物,男性2/3來自腎上腺,1/3來自睾丸,女性則主要來自腎上腺。尿17-酮類固醇(17-KS)可反應腎上腺皮質激素、糖皮質激素及性腺分泌的總的情況,對於評價腎上腺分泌雄激素的功能具有較大的價值。
5 尿17-酮類固醇的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 尿17-酮類固醇的測定原理
17-酮類固醇在強酸條件下加熱水解,使之遊離,用有機溶劑提取,在鹼性環境中與間二硝基苯作用,生成紅色化合物。
5.5 試劑
(1)濃鹽酸(AR)。
(4)乙酸乙酯(AR)。
(5)雄性酮標準液(100mg/L):精確稱取雄性酮10mg,置乾燥100ml容量瓶中,用經純化的去醛乙醇溶解並稀釋至刻度。分裝於潔淨的中號試管中,每管0.1ml(含10μg)37℃溫箱中烘乾,置暗處保存,每次測定時取出一管使用。
(6)去醛乙醇液的製備:取無水乙醇1000ml,加鹽酸間苯二胺4g,充分混勻後,靜置暗處一週,每天振搖2次,到期進行蒸餾,並棄去開始蒸出與最後剩餘部分各約50ml,收集所得的乙醇,置棕色瓶中保存。
(7)750ml/L去醛乙醇液:取無水去醛乙醇75ml,加蒸餾水至1000ml。
(8)20g/L間二硝基苯乙醇溶液:取無色的間二硝基苯0.2g。溶於去醛無水乙醇中,使總量爲10ml。盛於棕色瓶內。冰箱保存備用。若間二硝基苯質量較差需做以下提純處理:
①取間二硝基苯20g,於95%乙醇75ml中,加熱至40℃左右使其溶解。
③5min後,加入蒸餾水2500ml,混和。
⑤依此法用無水乙醇120ml及180ml重結晶二次。置於乾燥器內待用。
(9)乙醚(AR)。
5.6 操作方法
(1)在盛尿容器內加濃鹽酸5ml作防腐劑。收集24h尿液,混勻,並量取總量。
(2)取尿樣5ml,放入20mm×150mm試管中,加濃鹽酸15ml;在沸水浴中煮沸20min,取出,置冷水中冷卻。
(3)冷卻尿樣移入30ml小分液漏斗,加乙醚10ml,振搖2min,放置待分層後棄去下層尿液。
(4)向小漏斗中加入1mol/L氫氧化鈉5ml,輕搖1min,洗乙醚,放置澄清,棄去下層水相。
(5)再用蒸餾水2.5ml,輕搖洗乙醚1min,放置澄清,棄去下層水相。
(6)將乙醚移入15ml試管中,於40~45℃水浴中蒸乾,此管即爲測定管。
(7)按表1進行操作,設測定管、標準管(內含雄性酮標準0.01mg)、空白管。
將各管混勻,同時在1000r/min離心2min,取上層溶液移入10mm光徑比色杯中。520nm波長,以空白調零,讀取各管的吸光度。
5.7 正常值
男:8~12mg/24h尿;女:6~9mg/24h尿。
5.8 化驗結果臨牀意義
(1)庫興氏綜合徵、睾丸瘤(尤其是間質細胞瘤)、性早熟、多囊卵巢、肢端肥大症等疾病尿17-KS明顯增高。使用雄激素、皮質激素以及ACTH等藥物也可使尿17-KS增高。
(2)腎上腺皮質功能減退症、腺垂體功能減退症、睾丸功能減退症、肝硬化以及糖尿病、肺結核、高度營養不良等慢性消耗性疾病,尿17-KS都可出現降低。
5.9 附註
(1)所用無水乙醇必須進行去醛處理,否則空白管讀數太高,影響結果的準確性。
(2)水分可影響間-二硝基苯與17-酮類固醇的縮合作用,故乙醚蒸發後,管內不應殘留水分。
(3)本法顯色不夠穩定,比色應在10min內完成,大批標本時宜分批顯色。
(4)如室溫過低,比色液可顯混濁,應在此前加飽和鹽水0.1ml,使混濁消失後再進行比色。
(5)如尿液不能及時測定,應置冰箱存放,以免17-酮類固醇破壞而使結果減低。