3 概述
NPY又稱神經肽酪氨酸，由36個氨基酸殘基組成的多肽，在腦組織中基底節（尾狀核和豆狀核殼部）含量最高，其次爲邊緣系統、杏仁核、海馬、膈核、下丘腦和感覺運動皮質的運動區，而在延髓的孤束、迷走神經背核等處含量少。其生理功能是參與去甲腎上腺的作用，和促性腺激素分泌有關，能刺激動物採食與增加採食量，具有較強韻縮血管作用，可增強血管對其他血管收縮物質的反應，同時可抑制血管對血管舒張物質的反應。
4 腦脊液神經肽的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 腦脊液神經肽的測定原理
本法是標記抗原（Ag·）和非標記抗原（Ag）對特異性抗體（Ab）的競爭抑制反應，其反應爲Ag·＋Ag＋Ab （Ag·Ab）＋（AgAb）。當Ag·和Ab的量保持恆定，Ag與Ag·之和大於Ab上的有效結合點的數目，在該條件下，Ag與Ag·間存在着函數關係，亦即隨着Ag濃度增加，Ag-Ab生成量多，而Ag·-Ab的數量則減少，遊離的Ag·就增多。因爲Ag·對Ab的結合，可因Ag競爭結合而遭抑制。反之，當Ag量少時，Ag-Ab生成量就少，Ag·-Ab量增多，而遊離的Ag·減少（圖1）。將結合的抗原抗體複合物（B）與遊離抗原（F）分離，分別測定B和F的放射活性，計算出B/F或B/B＋F值，可製出B/F或B/B＋p對Ag量的關係曲線圖。測定時，需用一系列已知濃度的Ag和一定量Ag·及相應抗體Ab混合，然後測出各標準濃度Ag參加下的Ag·-Ab放射結合率（B/B＋F）或（B/F），繪出競爭抑制標準曲線（圖2）。試驗時，在同樣條件下，根據被測Ag的放射性結合率，從標準曲線上查知相應Ag含量。
4.5 試劑
（1）抗原的純化：試驗需用高純度的抗原。通常，蛋白質抗原的純度應達到電泳分析純，電泳後僅顯示單一區帶，並具有足夠或完整的免疫原性。一般先經聚丙烯酰胺電泳鑑定，再用等電聚焦SDS聚丙烯酰胺雙相電泳鑑定爲單一區帶，然後用於免疫動物和核素標記。
純抗原因其溶液中缺乏其他蛋白質作穩定劑，或因貯存在純離子濃度的緩衝液中，故易形成聚合物，因此在純化抗原時需加注意。若採用聚合物抗原的標記，用於RIA中將會顯著增加非特異性結合，降低測定的靈敏度。
（2）抗原的標記方法：標記用的核素有γ射線和β射線兩大類。前者常用131I、125I、51Cr,後者多用3H、32P和14C。選擇放射性核素首先要考慮比放射性，比放射性愈高，參與反應的抗原化學量就愈小，測定方法的靈敏度相對就愈高。核放射性和半衰期要適宜，便於使用和防護。標記後的抗原要保持其免疫原性。標記技術要簡便、經濟。
標記方法有直接標記和間接標記兩大類，以最常用的125I爲例分述如下。
①直接標記：將125I直接結合於蛋白質側鏈殘基的酪氨酸上，步驟單一，操作簡便，標記物的比放射性較高，但此法僅能用於標記含酪氨酸的化合物，如所含的酪氨酸殘基爲蛋白質的特異性和生物活性所必需，則該活性易因標記而失活。
最常用的直接標記法爲氯胺T標記法（簡稱h-T）：氯胺T是對甲基苯磺基酰胺的N氯衍生物的鈉鹽，在水溶液中分解形成次氯酸成爲一種氧化劑。在偏鹼溶液中（pH值7.5）能使帶負電荷的125I離子（Na-125I）氧化成帶正電荷的125I離子，藉以取代蛋白質酪氨酸苯環的氫，形成二碘酪氨酸。
125I標記率的高低與抗原（蛋白質或多肽）分子中酪氨酸的含量及其在分子中的暴露程度有關。
標記方法的原則是將純化抗原和125I加入小試管底部，繼將配製的氯胺T快速衝入，混勻振盪1～2min後加入偏重亞硫酸鈉終止反應。再加碘化鉀溶液稀釋，然後在葡聚糖G50柱上分離，分別用井型閃爍計數器測定放射性強度（脈衝數/min、cpm），前部爲標記抗原峯，後部爲遊離125I峯。在標記抗原峯試管中加等量1%白蛋白作爲穩定劑即爲標記抗原液。
②間接標記：是先將125I標記在載體上，純化後再與蛋白質或肽抗原結合，用N琥珀酰亞胺-3-[4-羥5-（125I）碘苯]丙酸鹽（NSHPP）作爲間接標記試劑，該試劑的N琥珀酰亞胺基與多肽遊離氨基縮合爲結合物，使125I標記的苯基與蛋白質的氨基結合。
本法先以氯胺T使125I接上NSHPP，由於在水溶液中它迅速水解爲3-（4-羥苯基）丙酸，故在碘化反應中要儘快減少這種水解作用。這種碘標記物必須從水箱抽提到有機溶液中去，再除去有機溶劑後，使125I-NSHPP與蛋白質結合，製成125I-NSHPP-蛋白質標記物。
本法可標記缺乏酪氨酸殘基的多肽，其最大優點是不損傷蛋白質的活性，能保存標記物高度的酶活性或免疫活性，適合於對不穩定的蛋白質標記，缺點是操作複雜，標記率低。
（3）標記抗原的鑑定：爲保證放射免疫測定的質量，製備的標記物必需作如下鑑定：
遊離放射性碘的含量 用三氯乙酸將所有蛋白質沉澱，分別測定沉澱物和上清液的cpm值。一般要求遊離碘佔總放射性碘的5%以下。標記抗原貯存過久時，可出現標記物的解離，一旦超過5%則應廢棄。
免疫活性 用小量標記抗原加過量抗體，反應後分離B和F，分別測定其放射性，算出百分結合率，此值應在80%以上，值越大，表示損傷抗原越少。
放射強度 它是指單位重量抗原的放射強度，比放射性越高，測定越敏感。標記抗原的比放射性以125I的標記率或利用率表示。
（4）抗體的製備和鑑定 RIA中所用的抗體應具有高親和力和高特異性，製備高價單相抗血清，最好以標記用的純化抗原免疫動物，製備半抗原的抗血清，需先將半抗原與載體結合，使成免疫原，常用的載體爲牛血清白蛋白。
抗血清同樣也要加以嚴格鑑定，包括其靈敏度、親和力和特異性。在固定量標記抗原與不同濃度的抗血清作用的條件下，測定B/F值，製得一條B/F值對不同稀釋度抗血清的曲線圖（圖3），該曲線的直線部分上段的斜率是抗體最大親和力的定性標誌，也是靈敏度的標誌。斜率越大，RIA靈敏度越高，在許多RIA反應系統中，呈最大靈敏度的抗體濃度爲B/F＝1。
當採用固定量的抗體（Q0）與不同濃度的抗原作用時，以B/F對B作圖，所得曲線的斜率就是親和常數（Ka）的負數（圖4）。
在RIA反應系統中，測定結構相似的不同物質時，可以鑑定抗體的特異性。
4.6 操作方法
使用放射免疫操作法。
4.7 正常值
1083.7±245.8pg/ml