3 概述
T淋巴細胞表面有多種抗原，其中簇分化（CD）抗原分類甚多，這些抗原除了標記細胞的種類和分化階段外，同時也有一定的功能，或作爲受體、黏附分子、信號傳遞成分等，可通過這些表面特徵性抗原鑑別亞羣。目前開展較多的是用抗分化抗原的單克隆抗體，如抗CD8單克隆抗體，對外周血單個核細胞進行檢測，根據出現陽性率，判定亞羣分佈。T淋巴細胞亞羣是觀察機體細胞免疫水平的重要方法，對惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏症、血液系統疾病的診斷、治療及預後判斷有重要價值。T細胞亞羣之間有相互制約和相互輔助的作用，任何一方的增多或減少皆影響另一亞羣的形成失調。
4 T8淋巴細胞亞羣的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 T8淋巴細胞亞羣的測定原理
人T細胞表面有多種表面抗原標記，分別代表不同的細胞亞羣，CD3抗原幾乎存在於所有成熟T細胞上，CD4抗原存在於Ti/Th細胞上，CD8抗原存在Ts/Tc細胞上。利用雜交瘤技術得到小鼠抗人T細胞CD8分子的單克隆抗體，將這些單克隆抗體標記上熒光素（如FITC），直接與人淋巴細胞反應，或將這些單克隆抗體（第一抗體）先與細胞表面相應分子特異性結合，再用熒光素標記的兔或羊抗鼠抗體（第二抗體）和結合在T細胞膜表面的鼠單克隆抗體結合，在熒光顯微鏡下觀察或用流式細胞計分析，即可檢測出相應膜分子陽性的細胞。
4.4 試劑
（1）聚蔗糖-泛影葡胺分層液（d＝1.077±0.001）。
（2）FITC標記羊或兔抗鼠IgG（FITC-IgG F/P爲1～3）。
（4）FITC標記單克隆抗體：FITC-CD3、FITC-CD4、FITC-CD8。
（5）FITC標記小鼠IgG（FITC-mIgG）。
（6）Hank液（含5%NBS及0.1%NaN3）。
（7）5ml塑料管、熒光顯微鏡。
4.5 操作方法
①取肝素抗凝外周血，用淋巴細胞分層液獲得單個核細胞，Hank液配成（1～2）×106細胞/ml。
②取1ml細胞懸液加入5ml塑料管中，離心2000r/min，2min，棄上清。
③加FITC-CD820μl，對照管加mIgG-FITC，4℃反應30min。
④Hank液洗2次，2000r/min，2min。
②取1ml細胞懸液於5ml塑料管中，離心2000r/min，2min，棄上清。
③加抗CD8單克隆抗體100μl，對照管加抗體稀釋液或正常小鼠IgG，4℃反應30min。
④Hank液洗2次，離心2000r/min，2min，棄上清。
⑤加50μl FITC-IgG，4℃反應30min。
⑥Hank液洗2次，2000r/min，2min。
4.6 正常值
20%～30%。
4.7 化驗結果臨牀意義
（1）降低：急性移植物抗宿主病（GVH）、系統性紅斑狼瘡（SLE）、溶血性貧血、高免疫球蛋白E綜合徵（高IgE綜合徵）、類風溼性關節炎。
（2）升高：無丙種球蛋白血癥、病毒感染、慢性移植物抗宿主病（GVH）、結核病、真菌和原蟲感染。
4.8 附註
同B細胞檢測。另外，由於間接免疫熒光技術所用的羊或兔抗鼠熒光抗體與部分白細胞表面發生非特異結合，以及Fc受體的非特異細胞反應和多克隆熒光抗體的結合放大效應，從而造成非特異陽性熒光細胞增多。而對FITC直標單克隆抗體來說，抗體成分、性質和結構上完全均一，只要不使蛋白質-FITC複合物上帶上過多的電荷，就不會產生非特異吸附。目前國外基本上是用直接免疫熒光法，流式細胞計來分析T細胞亞羣的，由於該儀器價格昂貴，國內尚未普及應用。因而對一般臨牀實驗室來說，用免疫熒光顯微鏡也能開展這項工作。