3 概述
C3腎炎因子(C3Nef)是旁路途徑C3轉化酶(C3b,Bb)的一種IgG類自身抗體,C3Nef與C3b、Bb按1∶1∶1比例結合,可以使此酶穩定,免遭C3b-INA和B1H的滅活,從而導致C3和其他補體成分經旁路途徑活化。檢測C3Nef時,一般將正常人血清與待測血清在EGTA存在下共育,如正常人血清中天然C3消耗或轉化爲C3裂解產物(C3SP),即說明待測血清中有C3Nef存在。
5 C3致腎炎因子的醫學檢查
5.1 檢查名稱
C3 致腎炎因子
5.2 分類
5.3 C3致腎炎因子的測定原理
(1)交叉免疫電泳測定法:將待測血漿加至正常人血漿中,如前者含C3Nef,可使後者中的C3發生裂解。電泳使C3SP與天然C3分開後作交叉電泳可見2個沉澱峯。與對照(應只一個沉澱峯)比較即可判定有無C3Nef。
(2)溶血法:含C3Nef的血清、正常人血清和綿羊紅細胞(SRBC)在含EGTA的緩衝液中共育時,在SRBC上可形成與細胞結合的穩定的C3b、Bb·C3Nef,後者可使隨後加入的大鼠血清中的補體成分活化,導致SRBC溶解。溶血程度與C3Nef量呈正相關。
5.4 試劑
①0.05mol/L EGTA+0.1mol/L MgCl2:EG-TA(乙二醇雙乙胺醚-N,N-四乙酸)1.9g,MgCl2·6H2O 2.03g,加蒸餾水80ml,60℃加熱並加4mol/L NaOH使溶,校pH爲7.45,補加蒸餾水至100ml。
②0.2mol/L EDTA:EDTA-Na2·2H2O 7.4g,配法同EGTA。
③7.5mmol/L EDTA:EDTA-Na2·2H2O 2.79g溶於蒸餾水1000ml中。
(2)溶血法:
①EGTA-VBS:巴比妥0.26g,巴比妥納0.17g,NaCl 3.50g、MgCl2·6H2O 0.40g,EG-TA3.04g加蒸餾水至500ml,調pH至7.4。
②EDTA-VBS:巴比妥2.88g、巴比妥納1.88g、EDTA-Na23.79g,明膠1.00g,NaCl 0.85加蒸餾水至1000ml,調pH至7.4。
③2.5%SRBC懸液:SRBC用生理鹽水洗2次,EGTA-VBS洗1次。用前以EGTA-VBS配成2.5%懸液。
④待測血清與正常對照血清:採血後儘快分離,立即檢測或-30℃保存,1周內檢測。
5.5 操作方法
①將各管置37℃水浴45min,自管3與管4各取出25μl加至管2,混勻。
②澆注含0.35g/L EDTA-Na2的10.0g/L瓊脂糖凝膠3ml於7cm×7cm玻璃板之一邊(寬2cm,可用框架澆注),凝固後於距陰極側1cm、4cm處各打孔一個,分別注入管1、2內容物各10μl。10V/cm電泳1h。取下凝膠板,在空餘的5cm板面上澆注含抗C3血清的10.0g/L瓊脂糖凝膠8ml,使與原先的膠面融合。凝固後與第一次電泳方向垂直,作第二次電泳,3V/cm電泳6~8h。觀察沉澱峯。
(2)溶血法:
①取2.5%SRBC懸液120μl,加待測血清和正常對照血清各40μl,30℃水浴10min後用EDTA-VBS洗5次。
②沉積細胞加入用EDTA-VBS作1∶10稀釋的大鼠血清0.2ml,37℃水浴60min。
③補加EDTA-VBS 1ml後2000r/min離心10min,取上清於412nm測吸光度。
5.6 正常值
以>0.128爲C3Nef陽性。
5.7 化驗結果臨牀意義
膜增殖性腎小球腎炎、部分脂肪營養不良(PL)、急性腎小球腎炎、SLE、腦膜炎等可呈陽性。
5.8 附註
管1、管2均爲單峯時判爲陰性。管1爲雙峯,管2爲單峯爲C3Nef陽性。如管2也爲雙峯,則可能是試驗過程中C3自然裂解造成的假陽性,也可能是待測血清中已存在有C3裂解產物之故。