5 載脂蛋白B醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 原理
載脂蛋白B的原理是抗原抗體按一定比例反應時,在溶液內生成細小顆粒的抗原抗體複合物均勻分散在溶液介質內。當光線通過這一渾濁液時,渾濁液內的顆粒能吸收光線,光線被吸收的量與渾濁顆粒的量呈正比,血清ApoA1或ApoB與相應的抗體結合,在一定條件下形成不溶性免疫複合物,使溶液渾濁,即濁度與吸光度成正比。
5.5 試劑
(2)10g/L瓊脂糖(標準電內滲)用巴比妥緩衝液配製,加熱溶化,混合後,分裝10ml/管,冷後4℃貯存。
(3)0.15mol/L NaCl溶液。
(4)兔(或羊)抗人apoA Ⅰ抗血清(效價不低於1∶16)及apoB抗血清(效價不低於1∶32)。
(6)染色液:考馬斯亮藍R-250 0.25g溶於甲醇45ml中,加入冰醋酸10ml及水45ml,混合,溶後備用。
5.6 操作方法
(1)澆板:每板用10g/L瓊脂糖10ml,沸水浴中融化,混勻,冷至50~55℃時加入apoA Ⅰ抗血清50μl,apoB抗血清8μl(用量視抗血清效價而定),迅速混勻後倒在預置在水平臺上的玻璃板上,冷後放在4℃,20min後打孔,孔在板的陰極端,孔徑3mm,孔間距至少5mm,孔容量5μl。把板放入電泳槽,用
濾紙搭橋。
(2)稀釋抗原:用0.15mol/L NaCl液將校準血清稀釋成1∶100,1∶150,1∶200,1∶300,及1∶400(作校準曲線之用),血清標本按1∶200稀釋,放4℃冰箱不得超過3天。
(3)加樣:在低電流狀態(10mA/板)將稀釋好的定值血清及標本分別吸取5μl(準確),加入瓊脂糖凝膠加樣孔內。每板都要做一系列標準。
(4)通電:穩流24mA/板,端電壓6~8V/cm,以流水冷卻使瓊脂糖保持15℃,電泳3~4h。
(5)脫雜蛋白及制幹膠膜:電泳後的瓊脂糖板浸泡在0.15mol/L NaCl中30min,將膠膜託置於聚酯薄膜上,用多層濾紙在輕輕加壓下吸乾膠內水分,然後將濾紙、膠膜與聚酯膜三者一起自然乾燥,或用熱吹風器吹乾,幹後膠膜會自然與濾紙及聚酯膜分開。
(6)染色:將瓊脂糖膠膜平鋪浸泡於染色液內20~30min。
(7)脫色:用脫色液浸泡已染色的膠膜至火箭峯清晰,背景基本無色。可在水中用兩片玻璃紙將膠膜夾住,晾乾後可長期保存。也可以用流水浸泡脫色至背景乾淨。
5.7 正常值
ApoA1:1.00~1.50g/L;ApoB:0.50~1.10g/L。
5.8 化驗結果臨牀意義
ApoA1水平與高脂血症、冠心病呈負相關。ApoB水平與高脂血症及動脈硬化性疾病呈正相關。
5.9 附註
(2)爲了準確測定ApoA1、ApoB,必須做標準曲線。
(3)免疫透射比濁應以多點定標。按曲線迴歸運算。
5.10 相關疾病
血漿脂蛋白