2 英文參考
Measurement of serum low density lipoprotein cholesterol
ICS 11.100 C 50
中華人民共和國衛生行業標準 WS/T 463—2015《血清低密度脂蛋白膽固醇檢測》（Measurement of serum low density lipoprotein cholesterol）由中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會於2015年06月23日發佈，自2015年12月31日起實施。
根據《關於廢止《血清載脂蛋白A1及載脂蛋白B免疫透射比濁測定法》（WS/T 121-1999）等17項標準的通告》（國衛通〔2022〕4號），WS/T 463—2015 血清低密度脂蛋白膽固醇檢測自2022年3月18日起廢止。
5 2 術語和定義
下列術語和定義適用於本文件。
2.1
分析系統 analytical system
適合對某檢驗項目在規定濃度範圍內給出分析結果的一組按規定條件使用的儀器和裝置，包括試劑和物品。
注1：對於臨牀生物化學檢驗，分析系統主要由按規定條件使用的儀器、試劑和校準物組成。
注2：其他標準（如GB/T 22576—2008）中的類似概念爲“檢驗程序”，但檢驗程序包括更廣泛內容，對於本文件，分析系統相當於檢驗程序的分析部分。
注3：改寫ISO/IEC導則99：2007，定義3.2。
2.2
驗證 verification
提供客觀證據，考慮任何測定不確定度，說明給定事物滿足規定要求。
[ISO/IEC導則99：2007，定義2.44]
注1：本標準主要是指分析系統的驗證，即某分析系統在本實驗室的性能是否與規定性能指標或廠商提供的性能指標一致。
注2：有關概念是“確認”（validation），即“規定要求”滿足指定用途的驗證，本標準的驗證包含確認的含義。
2.3
低密度脂蛋白膽固醇 Low density lipoprotein cholesterol; LDL-C
應用經典的分離和定義脂蛋白的超速離心法，按密度從低到高將脂蛋白分爲乳糜微粒（CM）、極低密度脂蛋白（VLDL）、中間密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）等。血清LDL是指密度1.019 kg/L～1.063 kg/L的脂蛋白，以LDL中的膽固醇（LDL-C）物質的量濃度（mmol/L）表示。血清LDL-C濃度的傳統單位是mg/dL，mg/dL換算爲mmol/L的換算係數爲0.0259（1 mmol/L=1 mg/dL×0.0259）。
6 3 LDL-C的生物學特性和臨牀意義
我國人羣血清LDL-C第5百分位數和95百分位數分別約1.5 mmol/L和4.3 mmol/L。LDL-C個體內生物學變異約8%，個體間生物學變異約26%。
LDL-C主要用於動脈粥樣硬化性心血管病危險分析。LDL-C升高是心血管病危險因素。國內外成人血脂異常防治指南都以降LDL-C作爲心血管病患者降脂治療的第一目標。劃分LDL-C採用固定切點，LDL-C<3.37 mmol/L爲合適水平，LDL-C 3.37 mmol/L～4.12 mmol/L爲邊緣升高，LDL-C≥4.14 mmol/L爲升高。
7 4 分析原理
7.1 4.1 概述
LDL-C分析原理有多種，包括超速離心法、電泳法、色譜法，勻相法（直接法）、沉澱法、間接法（Friedewald公式計算法）等。LDL-C常規檢驗目前主要採用勻相法和間接法。
注1：我國LDL-C常規檢驗日前推薦採用勻相法。
7.2 4.2 勻相法
勻相法又稱直接法，有多種方法，常見的有選擇性遮蔽法、清除法等。選擇性遮蔽法採用硫酸α-環糊精和鎂離子等遮蔽CM和VLDL，用聚氧乙烯聚氧丙烯多聚醚遮蔽HDL，膽固醇酶試劑只作用於LDL-C產生顯色物質。清除法先用一種表面活性劑使膽固醇酶試劑只作用於CM、VLDL、HDL的膽固醇，但不顯色，隨後用另一種表面活性劑使膽固醇酶試劑作用於LDL-C產生顯色物質而被檢測。
7.3 4.3 間接法
間接法又稱爲Friedewald公式計算法，Friedewald公式以VLDL組成恆定[VLDL的膽固醇（VLDL-C）除以甘油三酯（TG）=0.2]的假設爲前提，計算公式爲：LDL-C=總膽固醇（TC）-高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）-TG/5（TG/5爲按mg/dL計，以mmol/L計則爲TG/2.2）。應用Friedewald公式計算法的條件是：
b） TG濃度在4.52 mmol/L以下；
c） 無Ⅲ型高脂血症。
Friedewald公式計算法在TG低於250 mg/dl。（2.82 mmol/L）的情況下有一定的可靠性，但TG高於250 mg/dl。（2.82 mmol/L）時可靠性下降，TG高於400 mg/dl。（4.52mmol/L）時失去可靠性。此外由於CM含TG的比例較VLDL高，所以CM的存在也會造成LDL-C的測定偏差。此法最大的優點是低成本、簡便，但不能用於TG>400 mg/dL（4.52 mmol/L）或某些異常脂蛋白血症的標本。顯然，用此公式計算LDL-C的可靠性受TC、TG、HDL-C三項指標測定質量的影響。
9 5.3 樣品處理與存放應滿足以下要求：
c） 血液樣品在採血後1 h～2 h內離心，分離血清，含促凝劑採血管可在更短時間內離心（參照採血管介紹）；
e） 血清在室溫下的存放時間不大於4h，若需貯存4 h～48 h，應存於4℃環境，若需更長時間貯存，應置於-70℃以下環境；血清不可反覆凍融。
10 6 分析系統
10.1 6.1 分析系統選擇
6.1.1 根據實驗室實際情況選擇適宜類型分析系統，主要包括儀器、試劑和校準物，若採用半自動儀器，還包括適宜的移液設備和溫育設備等。
注1：儀器主要分白動和半自動儀器，日前多數實驗室採用自動生化分析儀，小型實驗室可能採用半自動分析儀。
注2：可見下列類型分析系統：
——封閉系統，儀器、試劑和校準物來自同一廠商，供配套使用，見於部分使用白動分析儀的情況；
——開放系統，試劑和校準物來自同一廠商，供配套使用，儀器另選，見於部分使用自動分析儀的情況和使用 半自動分析儀的情況；
——組合系統，儀器、試劑和校準物來自不同廠商或機構，由實驗室自己組合，見於部分使用自動和半自動分 析儀的情況。
6.1.2 宜儘量選用封閉系統或開放系統，必要時，可使用組合系統。
注：使用組合系統的理由，可能是有證據表明配套校準物缺乏可靠性，也可能是其他合理原因。
6.1.3 宜儘量選用分析結果可溯源至公認參考系統（參見附錄A）的分析系統。
注1：美國疾病控制預防中心（CDC）膽固醇參考方法實驗室網絡（CRMLN）運行LDL-C分析系統溯源認證計劃，該 計劃用多份（>40）患者血清將常規方法直接與參考測定程序或指定比對方法對比。CDC在其網站保持有效 期內的通過認證的分析系統列表。
注2：還可以有其他溯源方式，GB/T 21415—2008對臨牀檢驗量值溯源原理及要求做出說明。
10.2 6.2 分析系統使用
封閉系統和開放系統，應按廠商說明使用；使用組合系統，或對分析系統做其他改變（如各種分析參數、條件或方式等），需有充足理由，並需對分析系統性能進行充分驗證（見6.4）。
10.3 6.3 分析系統性能指標
a） 所測的分析物與LDL-C定義（見2.3）一致，一般情況下不受其他血清成分的明顯干擾（特異性）；
d） 測定範圍1.2 mmol/L～9.0 mmol/L。
10.4 6.4 分析系統性能驗證
任何新選用的分析系統，在用於患者樣品檢驗前，應進行性能驗證。可採用的驗證程序參見附錄B。
a） 採用封閉系統或開放系統，廠商未給出6.3所列之性能指標；
11 7 質量控制和保證
7.1 應根據工作經驗、行業交流、科學文獻等選用性能可靠的分析系統（主要是試劑和校準物品牌）。應儘量保持使用同種分析系統，不宜隨意、經常更換分析系統。
7.2 應進行內部質量控制。質控品應適宜用於脂蛋白分析，足夠均勻、穩定，濃度在醫學決定水平附近，至少兩個水平；應儘量長期保持使用同種質控品，不宜經常更換質控品；每批檢驗至少分析一次質控品。
注：有些商品生化質控品由於來源、組成、性質等原因，可能不適宜用作LDL-C質控品。白制、足量、 -70℃以下溫度保存的新鮮冰凍血清是LDL-C的良好質控品。
12 8 結果報告
應以我國法定計量單位mmol/L報告LDL-C測定結果，需要時，另外給出傳統單位mg/dL結果。以mmol/L爲單位的結果保留小數點後2位有效數字。檢驗報告應註明醫學決定水平，需要時，另外註明參考區間。LDL-C升高的判斷，需考慮分析變異、個體內生物學變異及檢驗次數等因素。
13 附錄A（資料性附錄）LDL-C參考體系
13.1 A.1 參考方法
LDL-C尚無國際公認的參考方法。國際影響較大的LDL-C參考方法是美國疾病控制與預防中心（CDC）的超速離心／肝素錳沉澱/AK膽固醇測定法（β-定量法）。此法用5 mL血清在1.006 kg/L的密度下超速離心[離心條件：40000 r/min（離心力105000g），4℃，18.5 h]，切割中部離心管，去除血清中密度小於1.006 kg/L的組分（頂部組分，主要爲極低密度脂蛋白VLDL和乳糜微粒CM），將底部組分（主要爲HDL和LDL，簡稱LHDL）完全轉移到5 mL容量瓶中，定容。準確吸取2 mL底部組分到試管中，用80μL肝素（5000 U/mL）和100μL氯化錳（1.0 mol/L）選擇性沉澱LHDL中的LDL，離心分離上清中的HDL。用CDC的膽固醇參考方法AK法測定LHDL和HDL中的膽固醇（LHDL-C和HDL-C），白LHDL-C中減去HDL-C得LDL-C。
13.2 A.2 參考物質
LDL-C沒有國際公認的參考物質。美國國家標準與技術研究所（NIST）的參考物質1951b有LDL-C的參考定值，定值方法爲美國CDC的β-定量法。我國有國家質量監督檢驗檢疫總局批准的3種冰凍人血清LDL-C國家一級標準物質（GBW 09178，GBW 09179，GBW 09180）。
13.3 A.3 參考系統的應用方式及應用範圍
參考系統的應用方式包括應用參考物質或應用參考測定程序。LDL-C參考系統主要應用於以下方面：
a） 分析系統的溯源和質量評價；
b） 試劑的製備及質量評價；
d） 新常規方法的發展及評價；
e） 室間質評計劃中的靶值確定；
14 附錄B（資料性附錄）LDL-C分析系統性能驗證
14.1 B.1 特異性、精密度和測量範圍評價
14.1.1 B.1.1 概述
採用分割樣品對比評價特異性、精密度和測量範圍，收集合適樣品，用待驗證分析系統和另一分析方法（對比方法）同時分析樣品，比較分析結果。
14.1.2 B.1.2 樣品
收集至少10份病人血清樣品，濃度在測量範圍內基本均勻分佈，每份血清分裝3份，形成3套樣品，密封-70℃保存。
14.1.3 B.1.3 對比方法
首選參考方法或指定比對方法，不可行時，可選用另種常規方法，最好是不同原理的方法，且有證據證明是性能可靠的方法，如經CRMLN認證的方法。
14.1.4 B.1.4 實驗過程
上述3套樣品，分3次獨立實驗，用待驗證方法和對比方法分析LDL-C。
14.1.5 B.1.5 計算
B.1.5.1 計算每份病人樣品待驗證方法3次分析結果的變異係數（CV），計算所有病人血清結果的平均CV。
B.1.5.2 計算每份病人樣品兩種方法3次分析結果的平均值，計算每份病人血清待驗證方法結果的偏倚和絕對偏倚，計算所有病人血清結果的平均偏倚和平均絕對偏倚。
14.1.6 B.1.6 性能判斷
若平均CV小於4%，平均偏倚在±4%內，則分析系統精密度、特異性和測量範圍符合要求。
14.2 B.2 正確度評價
B.2.1 若B.1實驗中的對比方法爲參考方法或指定比對方法，B.1.6結果同時說明正確度符合要求。
B.2.2 若B.1實驗中的對比方法是常規方法，用待驗證方法分析有證參考物質或其他符合要求的參考物質至少3次，計算分析結果平均值與參考物質定值的差值（偏倚），若在±4%內，正確度符合要求。
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