5 血清補體C3裂解產物的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 取材
5.4 血清補體C3裂解產物的測定原理
將含有抗補體抗體的瓊脂鋪在玻璃板上,然後打孔,加抗原(補體)。在合適的溫度、溼度環境中,經過一定時間擴散,抗原與混勻在瓊脂中的抗體在比例合適處可形成清晰的沉澱環。沉澱環直徑大小與抗原的濃度在一定範圍內成正比。用標準抗原製成標準曲線,可查出被測抗原的含量。
5.5 試劑
(1)0.1mol/L pH8.6巴比妥緩衝生理鹽水:巴比妥3.68g,巴比妥鈉,20.6g,加蒸餾水至1000ml。臨用時與生理鹽水等量混合,調pH8.6,按1/2000加入NaN3防腐。
(2)15.0g/L瓊脂:稱取優質瓊脂粉15g,加入蒸餾水500ml水浴煮沸,使瓊脂溶解。然後再加入預先溫熱的0.1mol/L pH8.6巴比妥緩衝生理鹽水500ml,混勻後分裝小瓶,4℃冰箱保存備用。
5.6 操作方法
(1)稀釋抗C3血清及製備含抗C3血清的瓊脂板先按要求的稀釋度計算出稀釋液的用量,其中的半量採用緩衝液。抗C3血清用緩衝液稀釋後放56℃水浴預溫。然後再加等量的、已預溫的15.0g/L瓊脂,使抗血清的最終稀釋度達到要求。按單向免疫擴散法常規澆製含抗C3血清的瓊脂板,冷卻凝固後打孔(孔徑3mm),孔距1.5cm以上。
(2)標準曲線繪製:將冷凍乾燥的C3參考血清,按規定加入準確量的蒸餾水,充分混勻後,再用0.1g/L硫柳汞生理鹽水稀釋至500μg/ml,然後按表1作一系列稀釋。
一般用1∶25,1∶50,1∶75,1∶100四個稀釋度抗C3血清制板後,用微量注射器在孔中分別加入上述不同濃度的C3參考血清(每孔中加10μl),經37℃ 48h保溫後,測得沉澱環直徑。以沉澱環直徑爲縱座標,相應的C3含量的對數爲橫座標,初步繪製標準曲線。一般以沉澱環直徑在4~8mm所繪製的標準曲線較佳。
(3)正式試驗:先將受檢血清用0.1g/L硫柳汞生理鹽水稀釋5倍,按序加入瓊脂板相應孔中(每塊板應同時作5個以上不同濃度的C3參考血清作對照)將瓊脂板放溼盒內,置37℃ 48h後測量結果。所得C3參考血清沉澱環直徑與原先繪製的標準曲線上相應值相比,最低濃度C3參考血清的沉澱環不應比原先大0.1mm,最高濃度不大於0.3mm,其他3個濃度不大於0.2mm,否則應重新測定。
5.7 正常值
5.8 化驗結果臨牀意義
補體動態變化在臨牀上越來越受到重視。
不論血清C3水平是否正常,C3SP增多表示有補體活化;C3含量降低而C3S不增多,則表示合成減少;C3含量正常而C3SP增多則示合成和分解增加同時存在。
抗原-抗體複合物引起的胃炎病人血清總補體和C3均明顯下降。大多數全身性紅斑狼瘡患者血清補體的降低和病情惡化有關。活動性全身性紅斑狼瘡患者血清中C2、C4、C2和C3降低,病情緩解時血清補體水平恢復正常。傳染病及組織損傷和急性炎症時,C2、C3、C4均增加,總補體活性正常或升高。但晚期則降低。腫瘤患者補體量升高,特別是肝癌,C3升高最爲明顯,具有診斷意義。也有報道胰腺癌晚期與隱性淋巴細胞白血病患者C3降低。肝臟疾病患者C3多爲降低,腎移植病人C3的水平不穩定,C3在排異反應開始時升高,然後下降到正常以下。
5.9 附註
(2)稀釋血清、抗血清所使用的吸量管必須固定。稀釋參考血清和患者血清皆用統一校正過的吸管,否則要用同一根吸管。其他器材也最好統一。
(3)所用瓊脂濃度一定要嚴格控制,分裝後防止乾燥,不要反覆溶解。溶解時不要煮沸時間過長,以防水份蒸發。56℃溫度要嚴格,太熱會破壞血清,太冷易凝固。混合要迅速、充分。
(5)受檢者血清須新鮮。如條件不許可,可將血清冰凍保存或稀釋後保存,數天之內影響不大,時間久後易使C3值增高。