1 概述
抗SS-A(Ro)識別的表位位於細胞內與小核糖核酸hY1、hY3、hY4、hY5形成複合物的兩種蛋白質(60×103和52×103)上。這種核糖核酸蛋白顆粒的功能目前還未知,患者血清內的自身抗體可能針對其中一種,或者更常見的是同時針對兩種蛋白複合物。從分子生物學觀點看,兩種蛋白及它們基因高度保守,有特徵性重複,兩者間並無密切聯繫。因此,同時出現抗兩種蛋白的抗體並非由於交叉反應。
3 抗SS-A(Ro)抗體的醫學檢查
3.1 檢查名稱
抗SS-A(Ro)抗體
3.2 分類
3.3 抗SS-A(Ro)抗體的測定原理
用間接免疫熒光法檢測時,抗SS-A/Ro、抗SS-B/La陽性結果表現爲核的細斑點型免疫熒光,但抗SS-A/Ro引起的熒光亮度較弱。其操作與原理均與抗核抗體檢測相同。雙向免疫擴散法仍爲抗SS-A/Ro、抗SS-B/La的常用檢測方法,但敏感性不高。目前常用免疫印跡法,其原理可參看抗Sm抗體測定。最近也有人用基因重組的52kD和60kD蛋白質建立ELISA法測定抗SSA/Ro抗體,用重組48kD蛋白質建立ELISA法測抗SS-A/La抗體,其敏感性較之免疫擴散法約高千倍,但因特異性問題(重組抗原中常含有細菌產物)未廣泛應用。一種敏感性和特異性都很高的方法是放射免疫沉澱法,此法是用放射性36S-蛋氨酸或32P-正磷酸鹽標記組織培養細胞,標記上36S的代表所有蛋白質,標記上32P的代表磷酸化蛋白,此外,細胞內RNAs也標記上32P。將待測血清與標記上放射性核素的組織細胞提取物混合,抗體與標記抗原反應,形成免疫複合物,用葡萄球菌A蛋白使免疫複合物沉澱,溶解後行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳、放射自顯影,與自身抗體結合的放射性標記核抗原形成的條帶即可顯現出來,參照標準品形成的條帶進行分析,即可做出診斷。此法目前還只限於實驗室研究。
3.4 試劑
血清 1ml。
3.5 操作方法
(1)沉澱法:與抗Sm、抗RNP或抗SS-B等類似的檢測方法不同,小牛、兔、胸腺提取物由於沒有足夠濃度的Ro抗原,不能用於免疫雙擴散和反相免疫電泳,而主要從人脾組織或人培養細胞(WI-L2)獲得。沉澱帶與參考血清相同,覈實爲SS-A特異性。
(2)免疫印跡法:抗原採用細胞培養物如HeLa、MolT-4。當與參考血清有兩條相同典型帶(60×103和52×102)時,可確證爲抗SSA(Ro)陽性。
(3)ELISA:可用親和純化或重組52×103和60×103蛋白,或相對純化的hY-RNP顆粒作抗原。
3.6 正常值
正常人爲陰性。
3.7 化驗結果臨牀意義
(1)乾燥綜合徵,SLE:根據方法靈敏度的不同,原發性乾燥綜合徵患者體內抗SS-A(Ro)陽性率可達到70%~100%,而在SLE中爲24%~60%。抗SS-A陽性的SLE患者常有乾燥綜合徵或光敏感性疾病,尤以抗體爲高滴度時。在這些病例中抗SS-B(La)通常也爲陽性,並且有證據表明常常可據此與原發性乾燥綜合徵相區別,雖然這還不是很明確。抗SS-A和抗SS-B陽性的原發性乾燥綜合徵患者通常表現出更多的腺體外症狀,如脈管炎、淋巴結病。
SLE變異型患者,如亞急性皮膚性狼瘡(70%~90%)、伴補體C2或C4缺陷的SLE(50%~90%),其抗SS-A(Ro)陽性率在總體上常常比典型的SLE患者高,在這些病例中,抗SS-B(La)通常是檢測不到的。1%的SLE患者,即使在活動期也不能查及ANA,但60%的這類病例可查及抗SS-A(Ro)。
(2)新生兒狼瘡,先天性心臟病:抗SS-A(Ro)和抗SS-B(La)可作爲孕婦的產前監視指標。孕婦或帶有先天性心臟病或狼瘡的新生兒,抗SS-A(Ro)陽性率達到100%,抗SS-B(La)也通常可查及,這些抗體認爲是經胎盤獲得自身免疫的典型實例。5%~10%抗SS-A陽性母親可生產出具有這些症狀的患兒,如抗SS-A(Ro)滴度較低,抗SS-B(La)陰性,或抗SS-A在免疫印跡法中未測及,這種風險會下降。在懷孕和生產時,大多數母親不符合SLE或原發性乾燥綜合徵診斷標準,很多人甚至完全無症狀,一定時間後,大多數婦女可進展爲有中等症狀的SLE、原發性乾燥綜合徵或結締組織病。
(3)HLA-DR3與抗SS-A(Ro)形成的關係:抗SS-A(Ro)形成的遺傳背景與HLA-DR3有關。抗SS-A(Ro)陽性的SLE、亞急性皮膚性狼瘡、原發性乾燥綜合徵、先天性心臟病或新生兒狼瘡患者DR3陽性較多,在後兩種病例中,患兒母親幾乎都是DR3攜帶者,但患兒並非必定是攜帶者。
(4)抗SS-A(Ro)的臨牀特異性:這些疾病的臨牀特異性相對較低。即使應用靈敏度相對較低的免疫擴散法,健康婦女抗SS-A的陽性率也達0.44%,如果用靈敏度高的檢測法,這個百分比還要提高。遺憾的是,抗SS-A檢測不能區分原發性或繼發性乾燥綜合徵。
3.8 附註
抗SS-A(Ro)經常能在ANA陰性的SLE患者中查及,許多基質特別是常規甲醇固定的Hep-2細胞,在IFT反應中,抗SS-A不以ANA的形式表現。這是因爲其滴度低,部分抗原位於胞質或者在固定的過程中抗原被洗掉。如臨牀懷疑爲SLE,而ANA陰性,應檢測抗SS-A(Ro)以及抗磷脂抗抗體。
雖然已知抗SS-A(Ro)有兩種不同的靶抗原(Ro52、Ro60),但大多數檢測方法,如免疫擴散、反相免疫電泳、以純化抗原建立的ELISA法,不能區分它們。免疫印跡法和以Ro52、Ro60兩種重組抗原建立的ELISA法,可以分別檢出兩種抗SS-A(Ro)。根據免疫印跡法統計的資料報道,Ro52抗體與乾燥綜合徵有更強的聯繫,而Ro60抗體與SLE相關性更密切。但由於30%的Ro陽性血清免疫印跡法爲陰性,所以該結論有侷限性,特別是由於Ro60抗原表位是部分構象性的,在免疫印跡法中被破壞。如採用足夠靈敏的方法,絕大多數Ro陽性血清可以檢測到兩種抗體。