3 概述
甲狀腺素結合球蛋白（thyroxine-binding globulin，TBG）是有四個亞基構成的酸性糖蛋白，由肝臟合成，分子量爲60kD。TBG是甲狀腺激素在血液循環中的主要載體蛋白，對甲狀腺激素的貯存、運輸、代謝以及維持甲狀腺激素的濃度和遊離甲狀腺激素的動態穩定，均具有重要的作用。
4 甲狀腺素結合球蛋白的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 甲狀腺素結合球蛋白的測定原理
血清中的甲狀腺素結合球蛋白（TBG）和Eu3＋標記TBG共同競爭性的與限量特異抗體結合。以第二抗體IgG包被活化微量滴定條作爲固相分離劑。樣品中的TBG越高，則特異性抗體和Eu3＋標記TBG結合就越少。反之，血清TBG降低，則特異性抗體結合Eu3＋標記TBG的量就增多。故樣品孔的熒光強度和待測物濃度呈反比。
4.4 試劑
（1）TBG的提取和純化：取適量T4溶於少量0.1mol/L KOH液中，即刻滴加到活化瓊脂糖珠4B懸液中（2mg T4/ml珠）。放4℃過夜，次晨加20倍體積0.1mol/L NaHCO3液抽濾，除去剩餘T4。
將正常血清100ml加至燒杯中，加入25ml T4-瓊脂糖珠4B混合，室溫攪拌反應過夜，靜置待4B珠下沉，傾去上清液。用400ml 0.1mol/L NaHCO3洗滌。然後裝1.5×30cm柱，用NaHCO3液平衡柱牀至流出液至280nmA值最低時，改用2mmol/L KOH液淋洗。紫外檢測，將蛋白峯合併，濃縮。對60mmol/L pH8.6 Tris-NaCl透析48h。將提取物液和適量125I-T4混合加至預先經60mmol/L pH8.6-Tris-NaCl平衡DEAE-Sephadex A-50柱中。用相同緩衝液加NaCl梯度淋洗。收集NaCl濃度爲0.2mol/L流出液。用γ計數。合併紫外280nm蛋白峯。經SDS-聚丙烯酰胺圓盤電泳爲單一區帶。濃縮乾燥。即得純化TBG，供免疫動物，標準品和Eu3＋標記用。
（2）固相第二抗體製備：將羊抗小鼠血清IgG抗體，經鹽析和DEAE-纖維素柱層析提取IgG。用50mmol/L pH9.6碳酸鹽緩衝液配製成50μg/ml，包被預先用戊二醛處理的微量滴定條。傾出IgG液於清潔瓶中。將條洗滌2次，每孔加10%戊二醛液200μl，室溫下放1h，傾出戊二醛液，將滴定條放37℃乾燥，重新用原IgG液包被1次，以提高包被固相抗體IgG的量。向每孔加20g/L BSA液200μl，室溫放置4～6h，洗滌兩次，裝入塑料內，密封，放4℃冰箱保存。
（3）TBG的Eu3＋標記：取純化TBG 2mg溶於0.5ml 0.25mol/L NaHCO3液中，加入Eu3＋-[對-異硫氰酸苯基]-DTTA螫合劑350μg，用0.25mol/LNaOH液調至pH8.5～9.0，放4℃冰箱反應過夜。次晨將反應液經Sephadex G-50柱分離，紫外280nm檢測，收集蛋白峯。測工作液稀釋度和標記比活性。加入保護蛋白和防腐劑，分裝，放－20℃保存。
（4）試驗緩衝液：50mmol/L pH7.6PBS，每1000ml中加白明膠1g，NaN3 0.5g，DTPA8mg，Tween20 0.2g。
（5）抗TBG單克隆抗體：用試驗緩衝液按預先所測得的工作液滴度稀釋。
（6）標準TBG液：取純化TBG經高純度標準品（Pharmacia公司提供）標定。用試驗緩衝液配製成2，5，10，20，40，80mg/L。放－20℃保存或冷凍乾燥臨用前溶解。
4.5 操作方法
（1）將固相第二抗體微量滴定條用洗滌液洗2～3次。S0孔加緩衝液25μl，S1～6孔加入相對應不同濃度標準TBG 25μl，樣品孔加待測血清25μl，均作雙孔。
（2）向每孔加稀釋Eu3＋-TBG液75μl，稀釋抗TBG單克隆抗體100μl。室溫下置微量滴定板振盪器上反應3h。
（3）傾去反應液，用自動微量滴定板沖洗器（LKB Wallac產品）洗10次。向每孔加增強液200μl。置振盪器上15min。靜置15min後在時間分辨熒光計上測量。按預先制的程序，以S0孔的CPS爲B0，各S管的CPS爲B0所劃出的標準曲線是B/B0爲縱座標，標準TBG濃度爲橫座標（對數）。並直接打印出待測血清中TBG的濃度。
4.6 正常值
男：17±3.3μg/L；女：17.6±3.9μg/L。
4.7 化驗結果臨牀意義
（1）甲亢患者血清TBG水平明顯降低，病情緩解後，TBG可逐漸上升至正常水平。
（2）甲減時，TBG降解速率減慢，血中TBG濃度可明顯升高，可隨病情的緩解而逐漸下降。
（3）先天性高TBG血癥和遺傳性TBG缺乏症可出現TBG升高或降低。
（4）嚴重的肝臟疾病，由於TBG合成和釋放增多而出現血中TBG增高。肢端肥大症、嚴重的糖尿病或營養不良等疾病血中TBG多降低。
（5）雌激素、糖皮質激素等多種藥物均可影響血清TBG的水平，出現TBG升高或降低。
4.8 附註
TBG與T4親和作用較T3強。