WS/T 634—2018 腸道原蟲檢測 碘液染色塗片法

糞便檢查 化驗及醫學檢查 衛生標準 人體寄生蟲 腸道原蟲檢測 中華人民共和國衛生行業標準

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1 拼音

W S / T 6 3 4 — 2 0 1 8 cháng dào yuán chóng jiǎn cè diǎn yè rǎn sè tú piàn fǎ

2 英文參考

Detection of intestinal protozoa—Iodine staining smear method

3 基本信息

ICS 11.020

C 61

中華人民共和國衛生行業標準WS/T 634—2018《腸道原蟲檢測 碘液染色塗片法》(Detection of intestinal protozoa—Iodine staining smear method)由中華人民共和國國家衛生健康委員會於2018年09月26日《關於發佈〈土源性線蟲病傳播控制阻斷〉等6項推薦性衛生行業標準的通告》(國衛通〔2018〕21號)發佈,自2019年04月01日起實施。

4 發佈通知

關於發佈《土源性線蟲病傳播控制阻斷》等6項推薦性衛生行業標準的通告

國衛通〔2018〕21號

現發佈《土源性線蟲病傳播控制阻斷》等6項推薦性衛生行業標準,編號和名稱如下:

WS/T 629—2018 土源性線蟲病傳播控制阻斷

WS/T 630—2018 日本血吸蟲抗體檢測 間接紅細胞凝集試驗

WS/T 631—2018 日本血吸蟲毛蚴檢測 尼龍絹袋集卵孵化

WS/T 632—2018 巴貝蟲檢測 血塗片鏡檢法

WS/T 633—2018 巴貝蟲檢測 蟲種核酸鑑定

WS/T 634—2018 腸道原蟲檢測 碘液染色塗片法

上述標準自2019年4月1日起施行。

特此通告。

國家衛生健康委員會

2018年9月26日

5 前言

本標準按照GB/T 1.1—2009給出的規則起草。

本標準由國家衛生標準委員會寄生蟲病標準專業委員會提出。

本標準起草單位:河南省疾病預防控制中心、上海市疾病預防控制中心、鄭州大學寄生蟲病研究所、中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所。

本標準主要起草人:許汴利、張紅衛、張小萍、劉穎、周瑞敏、楊成運、王中全、鄭彬、崔晶。

6 標準正文

腸道原蟲檢測碘液染色塗片法

6.1 1 範圍

本標準規定檢測腸道原蟲的碘液染色塗片法。

本標準適用於各級疾病預防控制機構和醫療機構對腸道原蟲檢測

6.2 2 規範性引用文件

下列文件對於本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用於本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用於本文件。

WS 287 細菌性和阿米巴性痢疾診斷標準

WS/T 487 隱孢子蟲病的診斷

6.3 3 術語和定義

WS 287及WS/T 487界定的以及下列術語和定義適用於本文件。

3.1

腸道原蟲 intestinal protozoa

寄生人體腸道的單細胞真核生物,常見的腸道原蟲有阿米巴、鞭毛蟲孢子蟲纖毛蟲人芽囊原蟲等。

3.2

包囊 cyst

原蟲活動、不攝取營養的階段。

3.3

碘液 iodine solution

碘和碘化鉀的水溶液,用於檢查原蟲的包囊。

6.4 4 儀器設備

4.1 生物顯微鏡(物鏡 10×、40×、100×,目鏡 10×)。

4.2 電子天平(稱量範圍 0 g~100 g,精度 0.1 g)。

4.3 測微尺(目鏡測微尺 0.1 mm、物鏡測微尺 0.01 mm)。

6.5 5 試劑材料

6.5.1 5.1 試劑

碘液(配製方法參見附錄A)。

6.5.2 5.2 材料

5.2.1 糞便採樣盒(潔淨、廣口、有蓋)。

5.2.2 載玻片。

5.2.3 蓋玻片(18 mm×18 mm)。

5.2.4 竹籤。

5.2.5 鑷子(醫用無齒鑷,12.5 cm,彎頭)。

5.2.6 量筒(100 mL)。

5.2.7 容量瓶(100 mL)。

5.2.8 棕色試劑瓶(100 mL,有蓋,磨砂口)。

6.6 6 檢測步驟

6.6.1 6.1 樣本準備

將5 g~10 g新鮮糞便置於糞便採樣盒內,在糞便採樣盒上標識編號、患者姓名、採集日期,樣本應在24 h內進行檢測,如未能及時檢測,應在4℃條件下冷藏保存,時間不超過72 h。

6.6.2 6.2 樣本檢測

於載玻片近中央處,滴1滴配製好的碘液。用竹籤挑取綠豆大小糞便,放於碘液中攪勻,塗成直徑1 cm左右、較爲均勻的糞膜,厚度以透過糞膜略能辨認其下面報紙的字跡爲宜。覆以蓋玻片,置顯微鏡檢查(參見附錄B)。

6.6.3 6.3 鏡下觀察

使用物鏡40×進行觀察,按照自左到右、從上到下的順序查找腸道原蟲包囊或卵囊(參見附錄B和附錄C)。

6.6.4 6.4 結果判定

觀察全部塗片發現包囊或卵囊陽性,未發現包囊或卵囊判定爲陰性。以包囊或卵囊大小形狀、核的數目、核周染色質形狀分佈核仁形狀和位置、有無纖絲及纖絲排列形狀糖原塊和擬染色體形態特徵判定蟲種(參見附錄D和附錄E)。

7 附錄A(資料性附錄)碘液的配製

7.1 A.1 配方

碘化鉀 4.0 g,化學純。

碘 2.0 g,化學純。

蒸餾水 100 mL。

7.2 A.2 配製方法

碘化鉀4.0 g溶解於30 mL蒸餾水中,然後加碘2.0 g,溶解後加蒸餾水定容至100 mL,充分混勻,貯於有瓶塞的棕色試劑瓶中備用。

8 附錄B(資料性附錄)腸道原蟲檢測

8.1 B.1 糞便檢查

於載玻片近中央處,滴1滴配製好的碘液,用竹籤挑取綠豆大小新鮮糞便,放於碘液中攪勻,塗成直徑1 cm左右、較爲均勻的糞膜,糞膜厚度以透過糞膜略能辨認其下面報紙的字跡爲宜。覆以蓋玻片,置顯微鏡檢查。先用物鏡10×找到視野,再用物鏡40×進行觀察,必要時可用物鏡100×觀察包囊或卵囊鏡下結構特徵,用測微尺測量包囊或卵囊大小。按照自左到右、從上到下的順序查找腸道原蟲包囊或卵囊。觀察全部塗片發現包囊或卵囊陽性,未發現原蟲包囊或卵囊判定結果爲陰性。以包囊或卵囊大小形狀、核的數目、核周染色質形狀分佈核仁形狀和位置、有無纖絲及纖絲排列形狀糖原塊和擬染色體形態特徵判定蟲種。

爲避免造成漏檢,應隔天採集糞便,連續3次以上。對於一些慢性患者,糞檢應持續1周~3周,多次檢查,以確保無漏診病人。常見腸道原蟲的包囊或卵囊多見於慢性腹瀉患者及成形糞便,而滋養體多見於稀便或帶有膿血的糞便,滋養體檢測常用生理鹽水直接塗片法。

盛糞便的容器要乾淨,並防止污染乾燥,糞便不可混雜尿液等,在糞便採樣盒上標識編號、患者姓名、採集日期,24 h內進行檢測

檢測過程中工作人員應做好安全防護,避免糞便污染環境。用具每次使用後要清洗乾淨並徹底消毒,廢棄物應按醫療廢物處置要求處置。

圖.png

圖B.1 塗片製備及看片順序模式圖

8.2 B.2 邁氏脣鞭毛蟲

邁氏脣鞭毛蟲包囊呈梨形或檸檬狀,長度爲6.5 μm~10.0 μm,壁薄,有1個細胞核細胞器包括胞口纖維(cytostomal fibrils)、動基體和軸絲(axonemes)等。對邁氏脣鞭毛蟲,應採集新鮮糞便做碘液染色,在物鏡40×和物鏡100×下觀察,以提高查找包囊的機會。

8.3 B.3 貝氏等孢球蟲

貝氏等孢球蟲卵囊微小,顏色淺,且蟲體在體外容易裂解,很容易漏檢。採用2.5%重鉻酸鉀保存的糞便標本,可殺滅全部細菌,有利於檢出卵囊,並可以長久保存標本

8.4 B.4 隱孢子蟲

隱孢子蟲卵囊呈圓形或橢圓形,因蟲種而異大小不一,在4 μm~6 μm範圍內。囊壁光滑、無色,囊內含有4個子孢子子孢子月牙狀,大小爲1.5 μm×0.8 μm,核1個,位於蟲體後部。卵囊內含殘餘體1個,由成堆顆粒狀物和一空泡組成。隱孢子蟲卵囊在碘液塗片檢測中漏檢率較高,常用抗酸染色法進行檢測

急性隱孢子蟲病人,其腹瀉糞便中含有較多卵囊,一般碘液染色塗片法即可。如檢查與病人或家畜接觸過的人羣、複查治療後的病人時,採用濃集法可提高檢出率,判斷困難時需使用金胺-酚染色、改良抗酸染色等特殊染色進行鑑別。

8.5 B.5 結腸小袋纖毛蟲

結腸小袋纖毛蟲包囊呈圓形或卵圓形,直徑爲40 μm~60 μm,呈淡黃色或淺綠色。囊壁厚而透明,染色後可見胞核。新形成的包囊可清晰見到滋養體在囊內活動結腸小袋纖毛蟲包囊的排出常呈間歇性,故需反複檢查。

9 附錄C(資料性附錄)常見腸道原蟲包囊或卵囊形態模式圖

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圖 C.1 常見腸道原蟲包囊或卵囊形態模式圖注:此圖僅體現常見腸道原蟲包囊或卵囊形態結構

10 附錄D(資料性附錄)常見腸道原蟲及其包囊或卵囊形態特徵

10.1 D.1 阿米巴

寄生人體腸內的阿米巴主要有結腸內阿米巴溶組織內阿米巴、波列基內阿米巴、哈門氏內阿米巴布氏嗜碘阿米巴微小內蜒阿米巴迪斯帕內阿米巴等。溶組織內阿米巴包囊和腸內其他阿米巴包囊的區別見表D.1。溶組織內阿米巴迪斯帕內阿米巴形態上難以區別,1997年WHO專門委員會建議,顯微鏡下檢獲含四核的包囊應鑑定溶組織內阿米巴迪斯帕內阿米巴,可進一步採用同工酶、ELISA和PCR分析等方法進行鑑別。

表D.1 人體腸內阿米巴包囊鑑別特徵(碘液染色)

蟲種形態特徵
直徑/μm形狀細胞核細胞質
結腸內阿米巴10~35圓形

1~8 個,偶見 8 個以上,核膜厚,核仁大多偏位

棕色未成熟包囊,可見棕色糖原泡;擬染色體兩端尖細不整、碎片狀,折光性強,呈白色
溶組織內阿米巴10~20圓形1~4 個,偶有 8 個,可見核仁核膜核仁小多居中,核膜較薄棕色未成熟包囊,可見棕色糖原泡,中央着色深,邊緣着色較淺而且模糊;有時可見未着色的棒狀擬染色體,兩端鈍圓
波列基內阿米巴10~15圓形1 個,隱約可見,核仁稍大,多偏位約半數有 1~2 個包涵體;擬染色體數目多,形狀多樣不規則
哈門氏內阿米巴5~10橢圓形1~4 個,可見核仁核膜核仁所佔比例較大,核膜稍厚棕色未成熟包囊,可見棕色糖原泡;擬染色體呈細桿狀,兩端似米粒形,數目最多時爲4~6個,不着色,呈折光性空白
布氏嗜碘阿米巴5~20不規則,卵圓形1 個,偶有 2 個,核隱約可見1 個深棕色、大而圓、邊緣清楚的糖原
微小內蜒阿米巴5~10橢圓或圓形1~4 個,核仁清晰成熟包囊中可見棕色糖原

10.2 D.2 纖毛蟲

結腸小袋纖毛蟲包囊呈圓形或卵圓形,直徑爲40 μm~60 μm;囊壁厚而透明,染色後可見胞核。新形成的包囊可清晰見到囊內的滋養體,體表的纖毛明顯可見,後逐漸消失。人體內極少形成包囊,故少見。

10.3 D.3 鞭毛蟲

寄生人體腸內的鞭毛蟲主要有藍氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia Stile,又稱十二指腸賈第蟲)、邁氏脣鞭毛蟲、腸旋滴蟲、人腸滴蟲和中華內滴蟲等。藍氏賈第鞭毛蟲包囊和腸內其他鞭毛蟲包囊的區別見表D.2。

表D.2 藍氏賈第鞭毛蟲和腸內其他鞭毛蟲包囊的區別

蟲種形態特徵
形狀囊壁大小/μm胞口螺旋溝軸柱鞭毛
藍氏賈第鞭毛蟲橢圓形

囊壁較厚,細胞質的收縮使之和囊壁之間出現明顯間隙

(8~12) ×(7~10)2 個或 4 個2胞質中可見中體、鞭毛、軸絲結構
邁氏脣鞭毛蟲梨形或檸檬較薄,但前端頗厚, 染色可見前端有一個乳突狀透明泡6.5~101 個有(染色可見有纖維支撐的胞口)胞口內含短鞭毛和兩側纖維
腸旋滴蟲梨形厚,雙層(4~9) ×(3~4)1個,常位於包囊中央有(染色顯示)囊內可見自核邊緣向包囊窄端延伸的兩根纖絲
腸滴蟲卵形或圓形雙層(6~8) ×(3~4)1~4 個,多數 2個或 4 個,對稱分佈在兩端囊壁清楚,鞭毛和纖絲通常看不到
中華內滴蟲梨形雙層6×31個有(染色顯示)胞質中可見中體、鞭毛、軸絲結構

10.4 D.4 人芽囊原蟲

人芽囊原蟲呈圓形或卵圓形,大小2 μm~200 μm,平均4 μm~15 μm,蟲體有明顯的壁,原蟲胞漿被染成黃色或淺褐色,胞核染成深褐色,周邊有3~7個顆粒,顆粒的大小形狀有變化,並可見到核仁染色體糖原塊等。人芽囊原蟲有5種類型。

10.4.1 D.4.1 空泡型(亦稱中央泡型)

蟲體呈圓形或卵圓形,直徑2 μm~200 μm,平均4 μm~15 μm;中央有一透亮的大空泡,周圍細胞質形成一月牙狀薄帶,在其內有核2~4個不等,核膜內集聚塊狀的異染色質

10.4.2 D.4.2 阿米巴型(又稱爲變形型)

蟲體大小爲2.6 μm ~7.8 μm,形態多變,可見僞足突起;胞質內含許多小顆粒狀物質,無細胞膜

10.4.3 D.4.3 顆粒型

蟲體稍大於空泡型,細胞質中充滿顆粒狀物質。

10.4.4 D.4.4 包囊型

圓形或卵圓形,直徑3 μm~8 μm;囊壁厚,胞質中有1~4個核,含多個空泡和糖原及脂質沉着。

10.4.5 D.4.5 復分裂型

不多見,其體積最大,具有增殖現象。復分裂過程:首先是細胞核不斷分裂成多個核,核與核之間只有少量的細胞質連接,其餘的空間爲空泡結構。當細胞膜內陷,分裂成多個大小不等的蟲體。

10.4.6 D.4.6 其它

除上述5種類型外,還有無空泡型和多空泡型:無空泡型缺乏中央空泡,細胞較小,直徑5μm,無表膜。多空泡型蟲體直徑爲5 μm~8 μm,體內含多個內容物、大小不等的小泡,蟲體表面具有厚的表膜。當體外培養時,無空泡型和多空泡型蟲體消失,轉變成空泡型和顆粒型蟲體。

10.5 D.5 孢子蟲

寄生人體腸內的孢子蟲主要有隱孢子蟲貝氏等孢球蟲、環孢子蟲、人腸肉孢子蟲

10.5.1 D.5.1 隱孢子蟲卵囊

呈圓形或橢圓形,大小在4 μm~6 μm範圍內,囊壁光滑、無色、囊內含有4個子孢子子孢子月牙狀,大小爲1.5 μm×0.8 μm,核1個,位於蟲體後部。卵囊內含殘留體1個,由成堆顆粒狀物和一空泡組成。

10.5.2 D.5.2 貝氏等孢球蟲卵囊

呈圓形或長橢圓形,大小爲(20~33)μm×(10~19)μm。未成熟卵囊內含1個大而圓的細胞成熟卵囊含有2個橢圓形孢子嚢,每個孢子嚢含有4個半月形子孢子和1個殘留體。

10.5.3 D.5.3 環孢子蟲卵囊

爲不折光、玻璃樣的球體,直徑8 μm ~10 μm。新鮮卵囊含有1個直徑6μm ~7μm的淡綠色桑椹胚。其內部含有3~9個直徑爲2 μm ~3 μm、外周包有一層膜的折光顆粒,呈中空的簇狀排列。成熟卵囊含有2個孢子囊孢子囊呈卵圓形,大小爲4 μm×6 μm,每個孢子囊內含有2個子孢子。環孢子蟲卵囊大小是與隱孢子蟲鑑別的重要依據。

10.5.4 D.5.4 人腸肉孢子蟲卵囊

爲球形或短橢圓形,大小爲(15~19)μm×(15~20)μm,囊壁較薄,內有2個橢圓形薄壁透明的孢子囊,每個孢子囊內含有4個新月形的子孢子和殘體。因囊壁薄而脆弱常在腸內自行破裂,進入糞便的孢子囊呈橢圓形,無色透明,大小爲(15~19)μm×(8~10)μm。

11 附錄E(資料性附錄)糞便中與包囊形態相似的常見雜質

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圖 E.1 糞便中與包囊形態相似的常見雜質

12 參考文獻

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