3 概述
血細胞分析儀是醫院臨牀檢驗應用非常廣泛的儀器之一,主要用於檢測血液樣本，能對血液中的有形成分進行定性、定量分析，並提供相關信息的儀器。隨着近幾年計算機技術的日新月異的發展，血細胞分析的技術也從三分羣轉向五分羣，從二維空間進而轉向三維空間，而且我們也注意到現代血細胞分析儀的五分類技術許多采用了和當今非常先進的流式細胞儀相同的技術，如散射光檢測技術、鞘流技術、激光技術等等。本文重點就五分羣血細胞分析儀器的檢測方法及其應用加以闡述。
4 電阻抗、高頻電導及激光散射聯合檢測法
這是Coutler公司1987年推出的新技術，血球懸浮在電解液中，用一定的電流通過傳感器的內外兩個電極，由於血細胞電阻抗很大，當血細胞通過兩個電極時，電極間阻抗瞬間增大，形成幅度與血細胞體積成正比的電脈衝，根據脈衝的大小可測出細胞的體積。在測量紅細胞時，利用一個脈衝甄別器，將幅度較小的血小板脈衝去掉，保留紅細胞和白細胞脈衝，因血液中白胞的數量不及紅細胞的1/500，故其總數據近似認爲是對紅細胞計數。在測量白細胞時，利用溶血素，使紅細胞溶解，再對剩下的白細胞計數。在對血小板計數時，調低脈衝甄別器的閾值，計出總數，再減去紅細胞的計數（其中已包括白細胞的計數），即爲血小板計數。由於不同類型但體積相同的細胞產生的脈衝幅度相同，故僅靠體積是不能完全區分，利用高頻電導法和激光散射分析白細胞內部結構可以彌補這一缺陷。雖然細胞壁不能使低頻電流通過，但能通過高頻電流，細胞核的大小和密度不同，它們對高頻電流的阻抗也不同，因此可以用來區分白細胞。激光散射技術主要用來檢查細胞膜表面特徵和內部結構。激光散射對細胞顆粒的結構和密度的區分能力強，粗顆粒產生的光散射比細顆粒強，藉此可將粒細胞區分開來，美國COULTER公司的STKS、MAXM系列血細胞分析儀五分類就是利用電阻法、高頻電導及激光散射聯合檢測法。
5 光散射和細胞化學染色聯合檢測法
它利用激光散射和過氧化物酶染色技術進行細胞分類。嗜酸性粒細胞有很強的過氧化氫酶活性，中性粒細胞漿內含有較爲豐富的過氧化氫酶，單核細胞次之，原始細胞則極少，而淋巴細胞和嗜鹼性細胞則缺管此酶。使用微量血液經與含有清洗劑和甲醛的高滲液體進行適當稀釋並孵育幾十秒鐘，此時細胞被清洗劑所破壞，白細胞漿內酶固定，此後繼續再進行第二次反應，加入過氧化氫和四氫一萘酚加熱，此時待測細胞中過氧化氫酶分解過氧化氫產生氧，後者使四氯一萘酚顯色並沉澱定位於含酶的顆粒中，此類細胞經激光束，由於光散射及細胞大小不同而被分類。顯然暑鹼性細胞、淋巴細胞、原始細胞由於不含此酶，不能被檢測，因此一些儀器專門設置了嗜鹼性細胞檢測系統，它的測量通道採用時間差的方法，與RBC/PLT的測量系統共用一個通道。由於試劑的作用，血液中除嗜鹼性細胞外，其它細胞均被溶解。嗜鹼性細胞隨同其它細胞裸核量產生細胞分佈圖。完整的嗜鹼性細胞呈高狹角散射，定位於圖上半部，裸粒位於下半部，不同裸粒因結構不同，在X軸分佈不同。單個核位於左方，分葉越多越靠右方。計算機分析分葉核與單個核角散射峯比例，其比值即爲分析儀所報告的結果。TECHNICON H系列分析儀採用的就是這種技術。
6 電阻抗和射頻電導聯合檢測法
這種方法是分別採用四個檢測系統來檢測不同類型的細胞①淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞檢測系統：在細胞懸浮淮中加入溶血劑使紅細胞溶解，而使白細胞保持完整，細胞漿及核形態近似於生理狀態，當這些細胞通過檢測系統時，對白細胞進行電阻抗法（測量細胞體積）和射頻電導法（檢測細胞核和顆粒密度）的聯合檢測，結果將細胞分成淋巴細胞、單核細和中性粒細胞三個羣體。②嗜酸性細胞和嗜鹼性細胞兩種檢測系統：在細胞懸浮淮中加入特殊的溶血劑，除嗜酸性細胞和嗜鹼性細胞外，其他細胞均被溶解或萎縮，再對保持完整的嗜酸性細胞或嗜鹼性細胞進行計數。③幼稚細胞檢測系統：在細胞懸浮淮中加入硫化氨基酸，由於佔位不同，結合在幼稚細胞的氨基酸比成熟細胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當加入溶血劑時，成熟細胞被溶解，只保留着可能存在的幼稚細胞用來計數。
7 多角度激光偏振光散射檢測法
採用這種技術的儀器使用鞘流淮將標本血稀釋，稀釋後白細胞的內部結構近似於自然狀態，只有嗜鹼性細胞由於其吸溼的特性而使細胞結構有輕微改變。紅細胞內的血紅蛋白在高滲透壓的作用下，從細胞中分離出來。而鞘流的水份則進入紅細胞內，使細胞膜結構仍然完整，它與鞘流的折光係數相同，不影響白細胞的檢測。儀器同時從四個角度來檢測通過激光束的細胞所產生的散射光，0°前角散射光用來測定細胞的體積，10°狹角散射光用來測定細胞結構，90°垂直散射光對細胞內部顆粒及細胞質進行測量，90°消偏振光散射將嗜酸性細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來。ABBOTT公司的CD-3000，CD-3500血細胞分析儀採用了此技術。
利用上述方法進行五分羣的儀器，最終結果均呈現在高分辨率的白細胞分佈圖上。運用計算機圖象技術，以各種彩色象素代表一定的細胞濃度，使細胞亞羣和異常情況易於識別，可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細胞亞羣。通過某種操作，使三維軸旋轉，就可展示不同方位的細胞分佈情況。