5 解脲脲原體的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 解脲脲原體的測定原理
聚合酶反應是在體外進行的由3個基本步驟組成的循環反應。第一步變性：將所有擴增的基因片段加熱，使雙鏈之間的氫鍵斷裂，分解成兩條單核苷酸鏈；第二步退火：當溫度下降時，化學合成的寡聚核苷酸引物即與所要擴增基因兩側的DNA相合；第三步延伸：在合適緩衝液，即鎂離子和4種脫氧核苷酸存在的條件下，DNA聚合酶能忠實地根據模板鹼基序列合成互補鏈，從引物的3＇端進行延伸，合成的方向爲5＇→3＇，從而合成與原來結構相同的基因片段2分子。3個步聚組成成1個循環，每循環1次DNA分子數按指數倍增。
5.4 試劑
基因組DNA爲0.1μg；緩衝液含50mmol/L氯化鉀，10mmol/L Tris-HCl（pH8.4），1.5mmol/L氯化鎂，100μg明膠；每一引物爲0.25μmol/L；dATP，dCTP，dTTP各爲200μmol/L；DNA聚合酶爲2.5U，終體積爲100μl。加數滴液體石蠟防止蒸發。
5.5 操作方法
反應週期：①變性：90℃ 30～60s；②引物和模板的退火溫度：40～60℃ 30～60s；③延伸：72℃ 1～2min。經反覆循環30～40次，最後1次72℃引物延伸7min後終止。除去液體石蠟後，產物可供分析。經瓊脂糖凝膠電泳後，用溴乙錠染色，經紫外燈照射可見預料擴增長度的熒光條帶。產物也可與放射標記或非放射標記的寡聚核苷酸探針行Southern印跡雜交或點漬印跡雜交。如用PCR自動儀則更爲方便，將反應試劑、DNA模板及Tap-DNA聚合酶加入試管後，放進已調好程序，即所需變性→退火→延伸各自的溫度和時間及循環次數的自動儀中進行反應，即可獲得滿意的擴增產物。
5.6 正常值
陰性。
5.7 化驗結果臨牀意義
陽性：UU感染、非淋球菌尿道炎、不孕症、絨毛膜羊膜炎、子宮內膜炎、非特異性尿道炎（宮頸炎）、早產、流產、新生兒化膿性腦膜炎（新生兒腦膜炎）、尿路結石。
5.8 附註
由於PCR方法極爲靈敏，因此稍有遺留PCR產物就可造成污染。避免污染的措施：①PCR反應前操作的地方和器材與反應後的應分開；②所用的試劑應分成若干份保存；③加樣時，樣品應最後加，並立即將管口蓋妥；④吸管、試管儘量做到一次性使用。