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H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)
1.2.样本裂解及核酸吸附1.2.1在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液,加入200μl待处理样本,剧烈震荡2分钟,室温静置10分钟。1.3.2在核酸吸附柱中加入500μl洗液B,静置1分钟,6000g离心1分钟。如果该份样本的RNP检测Ct值≥33.0,可能为以下原因:3.1未采集到足够的正常人上皮细胞,应重新采样。
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解脲脲原体
第三步延伸:在合适缓冲液,即镁离子和4种脱氧核苷酸存在的条件下,DNA聚合酶能忠实地根据模板碱基序列合成互补链,从引物的3'端进行延伸,合成的方向为5'→3',从而合成与原来结构相同的基因片段2分子。加数滴液体石蜡防止蒸发。相关疾病:尿道炎、不孕症、非特异性尿道炎、早产、新生儿化脓性脑膜炎、化脓性脑膜炎
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大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
大肠杆菌DNA聚合酶(E.ColiDNApolymerase)主要有3种作用:①5’→3’的聚合作用。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段,只有在5’→3聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,失去了5’→3外切酶活性。如果供给32P标记的三磷酸核苷酸,则可使DNA带上同位素标记。
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盐末端蛋白病毒属
盐末端蛋白病毒属病毒的最大ORF可能编码蛋白引导的DNA依赖性DNA聚合酶,病毒复制由病毒编码的DNA聚合酶进行。His1噬菌体是从嗜盐古细菌Haloarculahispanica中分离到,因而根据其宿主命名为His。感染是裂解性的,但也能以携带形式存在。His1是从澳大利亚盐池样品中分离出来,其它亲源种类可能在其他嗜盐环境中发现。
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丙型病毒性肝炎
细胞介导的免疫性损伤可能是HCV致肝脏病变的主要原因:丙型肝炎肝组织病理学的重要特征之一是汇管区淋巴细胞集聚,有时可形成淋巴滤泡,对比研究认为较乙型肝炎明显,淋巴细胞浸润无疑与免疫反应有关。丙型病毒性肝炎的临床表现:潜伏期:本病潜伏期为2~HBsAg高滴度、HBeAg与DNA聚合酶阳性者,HBcAg多为阳性。
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肠道外传播性非甲非乙型病毒性肝炎
细胞介导的免疫性损伤可能是HCV致肝脏病变的主要原因:丙型肝炎肝组织病理学的重要特征之一是汇管区淋巴细胞集聚,有时可形成淋巴滤泡,对比研究认为较乙型肝炎明显,淋巴细胞浸润无疑与免疫反应有关。丙型病毒性肝炎的临床表现:潜伏期:本病潜伏期为2~HBsAg高滴度、HBeAg与DNA聚合酶阳性者,HBcAg多为阳性。
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免疫PCR
免疫PCR技术的概念:免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。2.特异抗体免疫PCR中的特异性是对应于待测抗原,与ELISA一样,抗体的特异性和亲和力将影响免疫PCR的特异性和敏感性。一般可选用质粒DNA或PCR产物等。
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抗病毒药物病毒学研究申报资料要求的指导原则
也可以通过RT-PCR检测HCV复制子细胞中HCVRNA的拷贝数,或定量检测病毒抗原水平。表型检测方法的选择取决于其灵敏度,即检测耐药株较对照株的敏感性变化(耐药性的倍数)的能力。对治疗失败或发生了病毒反弹的患者中分离到的病毒株进行基因型检测可以发现导致病毒对所研究药物敏感性降低的基因突变。
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抗病毒药
抗病毒药物必须具有高度选择性地作用于细胞内病毒的代谢过程,并对宿主细胞无明显损害。在国外,伐昔洛韦的适应证为免疫功能正常成人的带状疱疹、生殖器疱疹和单纯疱疹,而缬更昔洛韦和更昔洛韦的适应证为免疫功能损伤(包括艾滋患者)巨细胞视网膜炎的治疗,以及心、肾、肾-胰联合移植患者巨细胞视网膜炎的预防。
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病毒性肝炎
慢性肝炎抗病毒治疗:以下摘自《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版)治疗的总体目标:慢性乙型肝炎治疗的总体目标是:最大限度地长期抑制HBV,减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化,延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生,从而改善生活质量和延长存活时间。停药随访48周时HBeAg血清学转换率可达43%。
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复制叉式复制
复制叉式复制大肠杆菌等原核生物的环状染色体DNA复制时,首先在DNA的复制起点上解螺旋。此时,先由DNA引物酶合成与后随链亲链的碱基互补的、长约10个核苷酸的RNA引物,在DNA聚合酶作用下沿着后随链模板合成DNA,一直延伸到前一个DNA片段5’端上RNA引物为止。最后由DNA连接酶把冈崎片段连接成一条连续的DNA单链。
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工具酶
工具酶是基因重组技术不可缺少的工具。限制性内切酶有Ⅰ型和Ⅱ型限制性DNA内切酶之分,Ⅱ型能严格识别核酸序列,并在识别区内特定的核苷酸处切开DNA双链。DNA连接酶可连接平端,也连接粘端。逆转录酶(以RNA为模板合成DNA,除RNA病毒中发现外,发现大肠埃希菌DNA聚合酶Ⅰ和TaqDNA聚合酶都有逆转录活性)。
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复制
染色体上的复制点是一段由100~有的解链酶与引发酶结合在一起(如大肠杆菌T4噬菌体)。DNA复制有高度的忠实性。经研究,发现DNA聚合酶的3′→5′外切核酸酶活性可以校对新生DNA链的碱基序列并改正其聚合酶活性所造成与模板相应核苷酸的“错配”。如半夏、天南星、白附子、川乌、草乌、何首乌、紫河车、香附。