1 概述
乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)是HBV核心抗原的成分,HBeAg是乙肝病毒複製的指標,其陽性提示乙肝病毒複製活躍,病毒載量高。當HBeAg轉爲陰性或同時伴有抗-HBe轉陽時,往往伴有病毒載量的下降和肝功能的好轉。但也有一些病人在出現HBeAg轉陰後仍然保持病毒的活躍複製,病毒的載量和肝髒的炎症活動度仍然很高,這類病人即稱爲HBeAg陰性慢性乙肝。
3 乙型肝炎e抗原的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 取材
3.4 乙型肝炎e抗原的測定原理
本試驗是在預包被抗-HBe的微孔板上進行的二階段反應。在第一階段,將酶標抗體加入試驗微孔中,並孵育一定時間。如標本中存在表面抗原便會與包被在微孔表面的抗體結合,同時與酶標抗體結合形成包被抗-HBe-HBeAg-酶標抗體固化複合物。假如標本中沒有HBeAg則無法形成這種複合物,未結合的血清或血漿蛋白將在洗滌過程中被洗去。在第二階段,加入TMP,如微孔中存在固化的複合物,則OPD被氧化形成有色的終產物,加入硫酸後這種反應將終止。
3.5 試劑
國內有商品化試劑盒供應,內含抗HBe包被反應板(條),抗HBe-HRP應用液,HBeAg試劑(中和試劑)以及陰、陽性對照血清,抗HBe陰、陽性對照血清,洗滌液,底物液及終止液等試劑。
3.6 操作方法
按試劑盒使用說明書進行操作。
(1)兩步法操作:
①加樣品:檢測HBeAg時,在包被反應板(條)各孔內加入樣品100μl,每次試驗有陰、陽性對照,37℃保溫2h,洗板4次。檢測抗HBe時,各孔加入中和試劑50μl及樣品50μl,每次試驗有陰、陽性對照,37℃保溫2h,洗板4次。
②加抗HBe-HRP:各孔加入抗HBe酶結合物100μl,37℃保溫2h,洗板4次。
③顯色:各孔加入底物液100μl,37℃保溫15min後加終止液1mol/L硫酸50μl。
④結果判讀:A.目測法:檢測HBeAg時,無色爲陰性,淡黃色至橘色爲陽性。檢測HBe時,橘紅色爲陰性,無色及淡黃色爲陽性。B.比色法:在酶標儀上,以試劑空白校零點,測各孔在492nm光密度值。
(2)一步法操作:
①加樣品:同時加中和試劑及抗HBe-HRP。A.檢測HBeAg:在包被反應板(條)各孔內加入樣品50μl及抗HBe-HRP 100μl,混勻後37℃保溫1h,洗板4次。B.檢測抗HBe:各孔內加入樣品50μl,中和試劑及抗HBe-HRP各50μl,混勻後37℃保溫1h,洗板4次。
②顯色和判讀結果:同兩步法。
3.7 正常值
正常爲陰性。
Cutoff值計算COV=陰性對照OD值×2.1。
注:陰性對照OD值低於O.05作0.05計算,高於0.05按實際OD值計算。
3.8 化驗結果臨牀意義
HBeAg陽性表明在肝細胞內複製活躍,血清具有高度傳染性。急性乙肝時HBeAg呈短暫陽性,一般不超過10周,如持續陽性提示轉爲慢性。
3.9 附註
(1)HBeAg陽性是乙型肝炎傳染性的標誌,檢測HBeAg有助於判斷HBsAg攜帶者傳染性強弱,母嬰傳播的危險率及急性乙型肝炎的預後等。HBeAg消失和抗HBe出現顯示乙型肝炎病情好轉,但不能做爲無傳染性的指標,也不一定是對機體有益的標誌(甲胎蛋白與抗HBe有相關性)。