4 血清乳糖醫學檢查
4.1 英文名
Lactose
4.2 別名
Lac
4.3 分類
4.4 化驗取材
4.5 化驗方法
糖類測定
4.6 原理
在已糖激酶催化下,葡萄糖和ATP發生磷酸化反應,生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)催化下脫氫,生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP),同時使NADP+還原成NADPH。反應式如下:
根據反應方程式,NADPH的生成速率與乳糖濃度呈正比,在波長340nm監測吸光度升高速率,計算血清中乳糖濃度。
4.7 試劑
(1)酶混合試劑的成分與濃度:
緩衝液(pH7.5) 50mmol/L
MgSO4 2mmol/L
ATP 2.0mmol/L
NADP+ 2.0mmol/L
HK ≥1500U/L
G6PD 2500U/L
根據試劑盒介紹復溶後,混合配製成酶試劑,置棕色瓶中放冰箱保存,約可穩定7天。
(2)5mmol/L乳糖標準應用液:見GOD法。
4.8 操作方法
(1)速率法測定(以半自動分析儀爲例):
①主要參數:
係數 8.2
孵育時間 30s
監測時間 60s
波長 340nm
吸樣量 0.5ml
溫度 37℃
②加樣:37℃預溫酶混合試劑1000μl,加血清20μl,立即吸入自動分析儀,監測吸光度升高速率(△A/min)。
③計算:
(2)終點法測定:取16mm×100mm試管,按表1編號與操作。
以上各管充分混勻,在37℃水浴,準確放置10min,分光光度計波長340nm、比色杯光徑10mm,用蒸餾水調零,分別讀取各管吸光度(Au、Ac、As、Ab)。
4.9 正常值
酶法:<14.6μmol/L。