1 拼音
tóng zhǒng yì tǐ zhí rù xìng yī liáo qì xiè bìng dú miè huó gōng yì yàn zhèng jì shù shěn chá zhǐ dǎo yuán zé
《同種異體植入性醫療器械病毒滅活工藝驗證技術審查指導原則》由國家食品藥品監督管理局於2011年3月24日食藥監辦械函[2011]116號印發。
2 一、前言
同種異體植入性醫療器械是以同種來源組織爲原料經加工或組成的產品。
我國目前對同種異體植入性醫療器械產品組織供體的病毒篩選多采用檢測血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測血清中的病毒核酸。但是，儘管對供體進行了嚴格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風險，以及生產過程中帶入外源病毒的風險。因此，要求同種異體植入性醫療器械產品在生產過程中採用有效的病毒滅活工藝，並對病毒滅活工藝的有效性進行科學的驗證。
本指導原則是對同種異體植入性醫療器械生產過程中特定病毒滅活工藝的效果進行驗證的一般要求，申請人/生產企業應依據具體產品的特性對註冊申報資料的內容進行充實和細化，如採用的病毒滅活工藝及相關參數等，並依據具體產品的特性確定其中的具體內容是否適用。
本指導原則是對申請人/生產企業和審查人員的指導性文件，但不包括註冊審批所涉及的行政事項，亦不作爲法規強制執行，如果有能夠滿足相關法規要求的其他方法，也可以採用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規的前提下使用本指導原則。
本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨着法規和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷髮展，本指導原則相關內容也將進行適時的調整。
3 二、適用範圍
本指導原則適用於需要對生產過程中特定病毒滅活工藝的效果進行驗證的同種異體植入性醫療器械。
4 三、基本要求
4.1 （一）常用的病毒滅活方法
多種方法可用於同種異體植入性醫療器械的病毒滅活，此處僅對常用的病毒滅活方法進行簡要敘述。企業應根據產品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。無論採用何種工藝，均應綜合考慮以下問題，包括病毒滅活效果的驗證；病毒滅活工藝對產品的影響；病毒滅活工藝本身的公認性、可靠性、重現性、易放大性及經濟性。
4.1.1 1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）
巴氏消毒法是溼熱滅活法之一，是國內外公認的病毒滅活方法，已在人血白蛋白製品中成功應用了數十年，滅活條件已很完善。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫療器械在充分清洗血液及骨髓成分後，可運用該方法進行病毒滅活。採用該方法時應考慮溫度分佈的均一性和滅活時間。
4.1.2 2.乾熱滅活法
乾熱滅活法主要用於凍乾製品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已爲實驗室驗證和臨牀應用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。乾熱滅活法的優勢是可用於凍幹後的同種異體植入性醫療器械。採用該方法時應考慮溫度分佈的均一性、凍幹工藝和產品水分殘留量等。
4.1.3 3.γ射線輻照滅活法
γ射線輻照滅活法的主要優點包括滅活效率高、穿透力強、劑量易控制、無有害物質殘留、無明顯溫度升高等。該方法主要通過破壞核酸而滅活病毒。由於病毒在不同介質中對射線的抗性不同，該方法用於同種異體植入性醫療器械的病毒滅活時，應儘量去除產品中的宿主組織和細胞，例如同種異體骨應充分清洗血液及骨髓成分。應根據產品的特性確定輻照劑量。採用該方法時應考慮輻照劑量的分佈和滅活時間。
4.1.4 4.過氧乙酸-乙醇滅活法
過氧乙酸具有極強的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助於消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫療器械中。過氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質炎病毒（PV）、HIV、僞狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細小病毒（PPV）等多種病毒，其用於同種異體植入性醫療器械病毒滅活的效果已爲實驗室和臨牀試驗所證實。採用該方法時應嚴格控制人用安全過氧乙酸殘留量限制。
4.1.5 5.乙醇滅活法
乙醇是臨牀上最爲常用的表面消毒劑。該方法對多數有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用於同種異體骨的病毒滅活時，應充分清洗血液及骨髓成分；同時因乙醇具有強揮發性，應採用浸泡處理，注意防止高溫和明火。
4.2 （二）病毒滅活工藝的驗證
4.2.1 1.指示病毒的選擇
應選擇可能污染的病毒，或理化性質相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無包膜等方面應具有代表性，應包括一種對物理和/或化學處理有明顯抗性的病毒。應根據產品的特性及所採用的病毒滅活工藝，參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應包括HIV、HBV和HCV的指示病毒以及非包膜病毒。
表1 可經同種異體植入性醫療器械傳播疾病的相關病毒及
可選用的指示病毒（舉例）
4.2.2 2.染毒方法
由於同種異體植入性醫療器械是固體，經清洗處理後不含遊離蛋白及細胞成分，建議採用浸泡法染毒。病毒滅活零時的滴度應至少≥106/mL，可根據產品和病毒的特點，選擇合適的浸泡溫度、時間及其他條件。
4.2.3 3.方案設計
（1）試驗分組：應進行合理分組，注意設置全面的對照組，以確保結果的科學性。建議至少包括細胞空白對照組、病毒對照組、病毒滅活方法細胞毒性對照組、病毒滅活方法終止效果驗證組及試驗組。其中，病毒對照組的滴度是計算滅活量的基礎，應證實其病毒的零時滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果驗證組需採用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應與病毒對照組相當，以證實病毒滅活方法能夠在設定的時間終止作用。試驗組至少應有適宜的時間點（包括零時），以闡明病毒滅活的動力學，包括病毒滅活速率和滅活曲線。
（2）觀察指標：
應綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評價每次驗證結果。
②病毒滴度降低量：病毒滅活零時的滴度爲污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過與病毒滅活後測定的殘留病毒量的比較，計算出該方法實際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如病毒降低量＜4 logs時，應盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認爲是有效的病毒滅活方法。
③病毒滅活動力學：病毒滅活通常不是簡單的一級反應，往往起始反應速率快，其後變慢。如果病毒滅活速率隨時間明顯降低，表示該方法可能無效，或者殘留的指示病毒對該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。
（4）如果生產過程中包含了滅活原理不同的兩種或兩種以上的病毒滅活工藝，應該分別進行病毒滅活效果驗證。
4.2.4 4．舉例說明病毒滅活效果的判斷
（1）加入6 logs 病毒，剩餘4 logs 病毒，該病毒滅活工藝無效。
（2）加入6 logs 病毒，但由於產品本身的細胞毒作用使得檢測靈敏度限值爲4 logs ，僅能證明滅活2 logs 的病毒。此種情況需改變試驗設計重新進行驗證，或者應盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認爲是有效的病毒滅活方法。
（3）加入6 logs 病毒，但仍可測定2 logs 的剩餘病毒，且清除病毒的量可重複，並不受工藝的影響，應認爲是有效的滅活病毒的方法。
（4）加入6 logs病毒 ，之後未檢測出病毒。但是由於檢測靈敏度限值爲2 logs ，僅能認爲大約滅活了4 logs 病毒。事實上可能等於或大於4 logs ，因此應判定此方法清除的病毒量≥4 logs。
（5）病毒滅活動力學是非常重要的觀察指標。如巴氏消毒法，如果病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，說明此方法滅活病毒效果很好。如果病毒滅活速率緩慢，在滅活結束時才達到最低檢出限度值，不能認爲是一個有效的病毒滅活方法。這就是說，評價驗證結果不能僅考慮病毒降低量，同時也要考慮病毒滅活動力學。
4.2.5 5．其他需考慮的問題
（2）如果樣品必須做進一步處理，或不同時間取出的樣品要在同一時間進行測定，應考慮這些處理方法對病毒檢測結果的影響。
（3）模擬的生產工藝參數應儘可能與實際的生產工藝相一致，如pH、溫度、反應時間等。應分析生產工藝中各種參數的偏差對病毒滅活效果的影響。
4.3 （三）病毒滅活工藝的再驗證
生產過程發生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時；被滅活前產品的組成或pH值發生改變時，均需對病毒滅活工藝的效果進行再驗證。