2010年版藥典三部附錄XIII

1 拼音

2010nián bǎn yào diǎn sān bù fù lù XIII

《中華人民共和國藥典》（2010年版）三部附錄XIII

2 附錄XIII A 無特定病原體雞胚質量檢測要求

無特定病原體（SPF）雞係指在嚴格控制飼養條件下，符合所規定的微生物學檢測要求的雞。無特定病原體雞胚是指SPF雞生產的受精卵，在符合生物製品生產的條件下，經孵化後所生成的雞胚。通過對SPF雞蛋和SPF雞羣病原微生物的檢測，使SPF雞胚質量得以控制。

2.1 檢測項目與方法

SPF雞胚病原微生物檢測項目和檢測方法見下表。

SPF雞胚病原微生物檢測項目和檢測方法

2.2 【附註】

●必須檢測項目，要求陰性；

○必要時檢測項目，要求陰性；

SPA，血清平板凝集試驗；

IA，病原菌分類；

AGP，瓊脂擴散試驗；

HI，血凝抑制試驗；

ELISA，酶聯免疫吸附試驗；

EST，胚敏感試驗；

SN，血清中和試驗；

TA，試管凝集試驗；

IFA．間接免疫熒光試驗。

2.3 檢測要求

（1）取樣  禽淋巴白血病病毒和禽腦脊髓炎病毒的檢測均應取新鮮雞蛋。其他病原微生物檢測一律檢測血清，每份供試品血清量應不少於1ml。必須按無菌操作程序取樣，防止污染。

（2）取樣數量  淋巴白血病病毒檢測，每個雞羣取雞蛋200枚（少於200只的雞羣從全羣中取樣），每隻雞取蛋1枚。禽腦脊髓炎病毒檢測，每個雞羣取雞蛋不少於50枚（少於50只雞的雞羣應從全羣中取樣），每隻雞取蛋1枚。其他病原微生物感染檢測，應採取隨機方式取樣，抽取每個雞羣的5%，少於200只雞的雞羣應按10%～15%抽樣。

（3）供試品的保存與運輸  取樣後應儘快將供試品送往檢測實驗室檢驗。不能及時運送的供試品，血清須在-15℃以下保存，雞蛋應在4～10℃保存。保存時間應不超過1周。供試品應有明顯的編號標誌，並附送檢單，寫明雞羣名稱、雞羣數量、供試品名稱及數量。供試品在運送過程中應避免溫度上升，防止破損。

2.4 結果判定

檢測結果如有1項不符合SPF雞胚微生物學檢測指標，則此批送檢的雞胚判爲不合格。

3 附錄XIII B 實驗動物微生物學檢測要求

本標準（引自GB 14922.2—2001）適用於豚鼠、地鼠、兔、犬、猴和清潔級及以上小鼠、大鼠。

3.1 1．實驗動物微生物學等級分類

（1）普通級動物Conventional （CV） Animal  不攜帶所規定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病的病原。

（2）清潔動物Clean.（CL） Animal  除普通動物應排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原。

（3）無特定病原體動物Specific Pathogen Free （SPF）Animal  除清潔動物應排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原。

（4）無菌動物Germ Free （GF） Animal  無可檢出的一切生命體。

3.2 2．檢測要求

（1）外觀指標  動物應外觀健康、無異常。

（2）病原菌指標  病原菌指標見表1、表2和表3。

（3）病毒指標  病毒指標見表4、表5和表6。

表1 小鼠、大鼠病原菌檢測項目

表2  豚鼠、地鼠、兔病原菌檢測項目

表3  犬、猴病原菌檢測項目

表4  小鼠、大鼠病毒檢測項目

表5  豚鼠、地鼠、兔病毒檢測項目

表6  犬、猴病毒檢測項目

4 附錄XIII C 實驗動物寄生蟲學檢測要求

本標準（引自GB 14922.1—2001）適用於地鼠、豚鼠、兔、犬、猴和清潔級及以上小鼠、大鼠。

4.1 1．實驗動物寄生蟲學等級

（1）普通級動物Conventional （CV） Animal不攜帶所規定的人獸共患寄生蟲。

（2）清潔動物Clean （CL） Animal  除普通動物應排除的寄生蟲外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的寄生蟲。

（3）無特定病原體動物Specific Pathogen Free （SPF）Animal除普通動物、清沽動物應排除的寄生蟲外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的寄生蟲。

（4）無菌動物Germ Free（GF）Animal  無可檢出的一切生命體。

4.2 2．檢測要求

（1）外觀指標  動物應外觀健康，無異常。

（2）寄生蟲學指標  寄生蟲學指標見表1、表2和表3。

表1 小鼠和大鼠寄生蟲學檢測指標

表2 豚鼠、地鼠和兔寄生蟲學檢測指標

表3 犬和猴寄生蟲學檢測指標

5 附錄XIII D 新生牛血清檢測要求

本品系從出生14小時內未進食的新生牛採血分離血清，經除菌過濾後製成。牛血清生產過程中不得任意添加其他物質成分。新生牛血清用於生產前應逐批進行以下檢查，並應符合規定。

5.1 蛋白質含量

應爲3.5%～5.0%（2010年版藥典三部附錄Ⅵ B 第一法）。

5.2 血紅蛋白

用氰化高鐵法或其他適宜的方法測定。應不高於0.02%。

5.3 大腸桿菌噬菌體

採用噬斑法和增殖法檢測。不得有噬菌體污染。

5.4 滲透壓摩爾濃度

應爲250～400mOsmol/kg（2010年版藥典三部附錄V H）。

5.5 無菌檢查

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ A），應符合規定。

5.6 支原體檢查

依法檢查（2010年版藥典三部附錄Ⅻ B），應符合規定。細菌內毒素檢查  應不高於10EU/ml（2010年版藥典三部附錄Ⅻ E 凝膠限度試驗）。

5.7 病毒檢查

5.7.1 1.細胞培養法

（1）非血吸附病毒檢查  將新生牛血清供試品分別接種到人源（如人二倍體細胞）、猴源（如Vero細胞）以及牛腎傳代細胞3種細胞，採用的牛腎傳代細胞系應證明無牛病毒的污染。每種細胞至少接種6瓶，每瓶細胞懸液接種量應不少於培養液總量的25%。置36℃±1℃培養21天。接種的每種細胞都應同時設立牛血清陰性對照和病毒陽性對照（陰性對照用牛血清應證明無牛病毒污染）。培養過程中可根據細胞生長情況更換細胞培養液，每次更換培養液前應觀察有無細胞病變出現。培養到期後，陰性對照應無任何細胞病變出現，陽性對照應出現典型的細胞病變，試驗成立。供試品檢查不出現任何細胞病變爲陰性，符合要求。

（2） 血吸附病毒檢查  將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附病毒檢查。用0.2%～0.5%雞和豚鼠紅細胞混合懸液覆蓋於細胞表面，置2～8℃30分鐘，然後置90～25℃作用30分鐘，分別進行鏡檢，觀察紅細胞吸附情況，供試品檢查結果均應爲陰性。試驗同時應設立血吸附陽性對照。

5.7.2 2．免疫熒光抗體檢查法

採用直接或間接免疫熒光抗體檢查法，至少應對牛腹瀉病毒、牛腺病毒、牛細小病毒、呼腸孤病毒、狂犬病病毒以及牛副流感病毒進行檢查，結果均應爲陰性。

支持細胞增殖檢查  用Sp2/O-Ag14或適宜的非貼壁傳代細胞進行。

（1）細胞生長曲線的測定  取供試品按10%濃度配製細胞培養液，按每1ml含10⁴個細胞的細胞濃度接種細胞，每天計數活細胞，連續觀察1周，並繪製生長曲線，細胞的最大增殖濃度應不低於每1ml含10⁶個細胞。

（2）細胞倍增時間的測定  按Sp2/O-Ag14細胞生長曲線計算細胞的倍增時間。取細胞峯值前一天的細胞計數（Y）、接種細胞數（X）及生長時間（T）計算。

細胞的倍增時間應不超過20小時。

（3）克隆率的測定  按有限稀釋法將細胞稀釋，並按每孔1個細胞的濃度接種於96孔細胞培養板，每板至少接種48孔，於37℃、5%二氧化碳條件下培養1周後計算克隆率，應不低於70%。

式中A爲細胞生長陽性孔數；

B爲接種細胞的總孔數。