7 原理
在3α-羥類固醇脫氫酶（3α-HSD）作用下，各種膽汁酸C3上α位的羥基（3α-OH）脫氫形成羧基（3α-O），同時氧化型NAD＋還原成NADH。隨後，NADH的上氫由黃遞酶催化轉移給硝基四氮唑藍（NTB），用磷酸終止反應，生成物的產量與總膽汁酸成正比，在540nm波長比色。與同樣處理的標準品比較，計算其含量。反應式如下：
8 試劑
有成套商品試劑盒供應，主要包括以下成分：
（1）0.2mol/L Tris-HCl緩衝液（pH7.5）：稱取Tris 24.3g，用約500ml蒸餾水溶解。加入1mol/L鹽酸161.2ml，混勻，以蒸餾水稀釋至1L，加入非離子表面活性劑Noigen ET-180 10mg。
（2）測定試劑：取48ml上述緩衝液，加入66.3mg（100μmol）NAD＋、20mg NTB，溶解，臨用前加入50U黃遞酶及0.5U 3α-HSD，貯棕色瓶中，置4℃保存。
（3）空白試劑：同測定試劑，但不含3α-HSD，貯棕色瓶中，置4℃保存。
（4）丙酮酸鈉（200mmol/L）：稱取丙酮酸鈉1.1g，以蒸餾水溶解並稀釋至50ml，貯棕色瓶中，置4℃保存。
（5）1.33mol/L磷酸：取85%磷酸（d＝1.685）45.5ml，加入約400ml蒸餾水中稀釋至500ml。
（6）混合血清：取無溶血、無黃疸、肝功能試驗正常的血清混合。
（7）標準液（50μmol/L甘氨膽酸鈉）：稱取甘氨膽酸鈉（MW＝487.6）2.44mg，溶入100ml混合血清中，分裝後冰凍保存。
10 正常值
禁食，成人血清1～7μmol/L（3.5±1.75）。
11 臨牀意義
（1）急性肝炎：急性肝炎時血清TBA顯著增高，可達正常人水平的10～100倍，甚至更高。楊昌國等報道，60名健康對照者空腹TBA（F-TBA）含量爲4.9±2.4μmol/L，中餐後2h血清TBA（P-TBA）含量爲8.2±2.9μmol/L；34例急性肝炎急性期F-TBA爲124.1±74.0μmol/L，P-TBA爲152.2±73.0μmol/L，分別是正常上限的13倍和11倍，異常率爲100%。急性肝炎初愈患者血清TBA由最初的高值幾乎與AST在同一時間降至正常水平，若持續不降或反而升高者則有發展爲慢性的可能。有人對21例急性肝炎患者的隨訪研究發現，凡TBA恢復至10μmol/L以下者，一年後未發現有慢性轉歸病例，但TBA升高而AST降至正常者5例中有4例轉爲慢性肝炎。
（2）慢性肝炎：國外研究認爲，在慢性肝炎患者中，若TBA水平超過20μmol/L，可考慮慢性活動性肝炎。國內楊昌國等報道，慢性遷延性肝炎p-TBA和F-TBA分別是23.6±12.5μmol/L和7.7±4.6μmol/L，而慢性活動性肝炎分別是111.3±45.1μmol/L和78.7±38.9μmol/L，慢性活動性肝炎的F-TBA和P-TBA均顯著高於慢性遷延性肝炎。故血清TBA測定對慢性肝炎的鑑別以及監測慢性活動性肝炎的預後和治療效果有重要意義。
（3）肝硬化：肝硬化時，肝臟對膽汁酸的代謝能力減低，血清TBA在肝硬化的不同階段均增高，增高幅度一般高於慢性活動性肝炎，即使在肝硬化的晚期亦如此。當肝病活動降至最低時，膽紅素、轉氨酶及鹼性磷酸酶等指標轉爲正常，但血清TBA仍維持在較高水平上。
（4）乙醇性肝病：乙醇性肝病血清TBA可增高。當乙醇性肝病（包括肝硬化）發生嚴重的肝損傷時，血清TBA明顯增高，而輕、中度損傷增高不明顯。也有人報道，血清TBA測定對乙醇性肝病肝細胞損傷診斷的可信度和靈敏度遠遠優於各種酶學檢查和半乳糖耐量試驗等指標，甚至建議將血清TBA再加上β-氨基己糖苷酶作爲乙醇性肝病的診斷指標。Sumino等報道，乙醇性肝病病人食入蛋黃後60min，血清TBA明顯升高，並認爲餐後60min-TBA測定對乙醇性肝病診斷更有意義。
（5）中毒性肝病：血清TBA測定對中毒性肝病的診斷優於常規肝功能試驗。有報道表明，在23例接觸苯乙烯的工人中，11人血清TBA增高，而其他指標僅有3例異常。對臨牀服用某些治療藥物而致肝中毒引起的急性肝損傷也有診斷意義。
（6）膽汁淤積：血清TBA測定對膽汁淤積的診斷有較高靈敏度和特異性。肝外膽管阻塞及肝內膽汁淤積包括急性肝炎、初期膽管性肝硬化、新生兒膽汁淤積、妊娠性膽汁淤積等均可引起TBA增高。在膽管阻塞的初期，膽汁分泌減少，使血清中的TBA顯著增高，且在阻塞的不同階段幾乎保持不變；而血清膽紅素水平則隨着不同階段而變化。膽汁淤積患者肝組織中的膽汁酸含量明顯高於正常人，CA增高8倍，CDCA增高4倍，DCA僅增加1.5%。肝外阻塞經過引流緩解後，血清TBA水平迅速下降，而其他指標則緩慢恢復正常。
在所有肝病中，餐後血清TBA水平及異常率均比空腹時高，故對肝病的診斷餐後TBA測定比空腹時測定更靈敏。有人報道，餐後測定TBA對各種肝病的診斷靈敏度和特異性高達100%，而同時測定空腹血清TBA有40%的患者在正常範圍。急性肝炎是否轉爲慢性，連續監測餐後TBA水平可以觀察慢性過程。慢性活動性肝炎是否發生肝纖維化改變，餐後連續監測也可以瞭解纖維化過程，不做肝活檢即可獲得肝損傷的程度。
12 附註
（1）血清中LD在其底物存在下（血清中含有一定量的乳酸）也可還原NAD＋爲NADH，產生高空白值。本法中加入丙酮酸鈉，抑制LD活性，可有效地降低空白吸光度。
3α-HSD 5U/L
黃遞酶 500U/L
NAD＋ 1mmol/L
NTB 0.2g/L
pH 7.50
（3）反應混合物的吸光度受蛋白質影響，故甘氨膽酸鈉標準液配製於混合血清中。混合血清中原有膽汁酸及其他可能參與反應的物質需設P管消去。
（4）3α-HSD製品中含有二硫蘇糖醇（di-thiothreitol，DTT），酶製劑用量過多時可影響NTB的還原。
（5）本法線性達250μmol/L。如血清膽汁酸超過此值應作適當稀釋。
（6）Noigen ET-180是一種非離子表面活性劑，化學名爲聚氧乙烯油醚（polyoxy-ethyleneolylether），爲日本京都Dai-ichi Ko-gyo Seiyaku公司產，加入反應混合物中可防止沉澱，不影響3α-HSD及黃遞酶活性，不影響本測定系統的敏感性。
（7）血清中的TBA含量較低，標本中含大量的干擾物質，其中最主要的是乳酸脫氫酶（LDH）。LDH能影響NAD＋的還原反應，由LDH生成的NADH往往比由3α-HSD催化TBA參與的反應生成的NADH量要大的多。由於各類肝炎均可引起血清LDH升高，因此測定中必須消除LDH的影響，方法有：血清67℃加溫30min、加草酸作爲LDH的封閉劑、鹼或酸處理、或用丙酮酸鈉抑制LDH活性等，其中以丙酮酸鈉法最好。其它還原性物質的干擾通過設立雙試劑，樣品先和不加3α-HSD的體系孵育，使樣品中的干擾物質反應，然後加入3α-HSD，使TBA反應，可排除干擾。