2 註解
Trizol Reagent處理法
3 原理
分離純淨、完整的RNA分子對於分子克隆的實驗是很重要的，而且是進行基因表達分析的基礎。在總RNA中，75-85%爲rRNA（主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA），其餘的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、snRNA及snoRNA等組成。
爲了獲得高質量的RNA，必須要控制RNA酶的活性，也就是要避免RNA酶的污染。RNA酶很穩定，而且反應不需要輔助因子，因而在RNA的製備過程中只要存在少量的RNA酶就會導致實驗的失敗。爲避免RNA酶的污染，實驗中所用到的全部溶液、玻璃器皿、塑料製品等都需要特別處理。
RNA酶的抑制劑主要有異硫氰酸胍、焦碳酸二乙酯（DEPC，使用濃度爲0.05%-0.1%）、釩氧核糖核苷複合物（10mmol/L）、蛋白質抑制劑RNasin。實驗中採用DEPC對所用到的溶液、玻璃器皿和塑料製品等進行處理。
4 儀器與試劑
儀器
燒杯（1000，500，100，50mL若干）；量筒（1000，500，250，50，20mL若干）；玻璃棒、藥勺、試劑瓶、三角瓶、吸頭（1000，200，20微升）、吸頭盒、離心管（1.5mL，0.2mL）、冷凍高速離心機、紫外分光光度計等。
試劑
5 實驗步驟
準備工作：用DEPC（1ml/L）水溶液處理槍頭、離心管等24hr，然後高溫滅菌2次，每次20min；研鉢、剪刀等其他用具在180℃下烘3hr。
1、組織勻漿，在液氮中將組織研碎後，加入500μl Trizol後再充分研磨，用槍頭將粉末轉移到離心管中，加入500μl Trizol後用注射器抽打均勻，室溫下放置5min；
2、加200μl氯仿，劇烈振盪15sec，顛倒幾次，室溫下放置15min；
3、4℃下12,000rpm離心15min；
4、轉移上清液至一新的離心管（DEPC處理）中，加500μl異丙醇，振盪混勻，室溫下放置5～10min；
5、4℃下12,000rpm離心8min；
6、棄上清液，加1ml 75%乙醇，漩渦混勻（或加無水乙醇以加快揮發）；
7、4℃下7,500rpm離心5min；
8、棄乙醇，空氣風乾3～5min，用DEPC處理過的水（先在55～60℃水浴10～15min）溶解,根據沉澱的量，一般加入30～50μl；
9、RNA質量的檢測，取1μlRNA樣品稀釋100倍後測定RNA濃度及OD260/280；
10、RNA保存於-80℃冰箱。