血清白細胞介素3

1 拼音

xuè qīng bái xì bāo jiè sù 3

2 英文參考

Serum interleukin-3

Serum IL-3

3 概述

白細胞介素3（IL-3），爲多克隆刺激因子，調節造血功能，由絲裂原或抗原刺激激活的T細胞及一些細胞株產生，其主要功能爲調節多能幹細胞的生長及分化，使之產生各系骨髓細胞。

4 血清白細胞介素3的醫學檢查

4.1 檢查名稱

血清白細胞介素3

4.2 分類

免疫學檢查 > 細胞免疫測定

4.3 取材

血液

4.4 血清白細胞介素3的測定原理

以IL-3特異的單克隆抗體包被酶標板，而後予以封閉，由試劑盒提供（96孔可移動酶標孔）。每孔加入樣品，如果其中含有IL-3則可與已包被於板上的抗體結合。洗去樣品中未結合的蛋白後，每孔加入酶標IL-3多克隆抗體，則可與最初孵育中所結合的IL-3相作用。而後洗去未結合的酶標抗體，每孔加入底物液，顯色。顏色深淺與第一步所結合的IL-3的量成正比。

測定樣品的同時，可同時作不同濃度標準IL-3的系列孔，而後作IL-3濃度對光密度值的標準曲線，由樣品孔的光密度值在標準曲線上可找到未知樣品中相應的IL-3濃度。

4.5 試劑

（1）IL-3酶標：板包被有鼠抗人IL-3單克隆抗體，並已封閉的96孔聚苯乙烯酶標板（12條，8孔/條）。

（2）辣根過氧化物酶（HRP）標記的IL-3多克隆抗體。

（3）IL-3標準品  經透析的重組IL-3（10ng），保存於蛋白保存緩衝液中。

（4）檢測稀釋液RD1 6ml蛋白保存緩衝液，用於樣品爲血清或血漿的檢測。

（5）校正稀釋液RD5 21ml蛋白保存緩衝液。

（6）校正稀釋液RD6 21m1動物血清保存緩衝液。用於樣品爲血清或血漿檢測。

（7）洗液：25倍濃度的母液21ml。

（8）顯色劑A：12.5ml穩定的過氧化化氫。

（9）顯色劑B：12.5ml穩定的色原（四甲基聯苯胺鹽）。

（10）終止液：2mol/L的硫酸6ml。

11.酶標板蓋。

4.6 操作方法

（1）樣品的採集：

①組織培養上清離心，去除顆粒性物質，貯存於－20℃。避免反覆凍融。

②血清：用血清分離管（SST），離心獲得。分裝血清，貯存於－20℃。避免反覆凍融。

③血漿：收集血漿，以EDTA作爲抗凝劑。離心去除顆粒，貯存於－20℃。避免反覆凍融。

（2）試劑的準備：

①洗液：將母液稀釋25倍，得500ml應用洗液。貯存於2～8℃，可保存30天。注意稀釋前須將母液中的沉澱溶解。

②底物液：顯色劑A和B等量混合，15min內應用。應用時，每孔加入200μl該混合液。

③標準IL-3：標準IL-3的稀釋程度及跨度的選擇十分重要，需要能夠反映待測樣品中IL-3的含量。如果可能，最好用與待測樣品相同的稀釋度；如果不能，則需用稀釋液。校正稀釋液RD5可用於許多方面，包括大部分組織培養液中IL-3的測定。校正釋液RD6可用於待測血清或血漿樣品。

具體方法：將標準IL-3中加入5ml校正稀釋液RD5（用於組織培養液）、校正稀釋液RD6（血清或血漿樣品）或用能反映待測樣品中IL-3含量的稀釋度。這樣則配成2000pg/ml的母液。以該母液倍比稀釋（如下述），使此法IL-3的檢測範圍爲10pg～2000pg/ml。

建議標準：IL-3所用的稀釋度爲2000pg/ml，1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml以及0pg/ml。

方法：

A.將上述各稀釋度分別標記於6個試管或小瓶，每管加入2ml稀釋液。

B.在1000pg/ml管中加入2ml標準IL-3，混勻。

C.從1000pg/ml管中取2ml加入500pg/ml的管中，混勻。

D.連續重複該過程，完成倍比稀釋。

E.以未稀釋的標準IL-3作爲標準曲線的最高濃度（2000pg/ml）。以合適的稀釋度作爲零濃度（0pg/ml）。

凍於－20℃，可保存30天。避免反覆凍融。

（3）步驟：

①對於血清或血漿樣品，在加入樣品及標準之前，每一個樣品及標準需加入50μl檢測稀釋液RD1。注：非血清或血漿樣品不需要加此試劑。

②每孔加入200μl的標準或樣品，室溫孵育2h。

③吸乾，每孔加入400μl洗液，洗4次。殘餘液以乾淨的吸水紙吸乾。

④每孔加入HRP標記的IL-3多克隆抗體200μl，室溫孵育2h。

⑤重複③洗板。

⑥每孔加入底物液200μl，室溫孵育20min。

⑦每孔加入終止液50μl，混勻。

⑧30min內在分光光度儀上測定每孔的吸光度A450nm。如果不需要波長校正，設於540nm或570nm。如果需要波長較正，則需用540nm或570nm）的A值減去450nm處的A值。

（4）結果計算：平行孔取平均值，並將樣品的A值減去零標準A值。

以各標準IL-3濃度對其相應的A值作圖。將數據在Log/Log座標紙上線性化並回歸分析。

4.7 正常值

生物學活性測定，ELISA（酶聯免疫吸附試驗）：10～2000pg/ml  （分子質量30～40kU）。

4.8 化驗結果臨牀意義

（1）刺激肥大細胞系增殖。

（2）刺激從分離的造血祖細胞形成中性粒細胞、巨噬細胞、巨核細胞、嗜鹼性細胞、嗜酸性細胞、Mast細胞。

（3）促進人T細胞特定亞羣的生長。

（4）增強嗜酸性細胞、嗜鹼性細胞、單核細胞的活性。

（5）協同幹細胞因子誘導人CD34^＋細胞形成嗜鹼性細胞和肥大細胞。

4.9 附註

（1）此方法可直接測定人IL-3（存在於組織培養上清、血清、血漿及其它體液中）。

（2）敏感性：血清樣品中，可檢測IL-3的最小值爲8.9pg/ml。非血清樣品中，可檢測IL-3的最小值爲7.4pg/ml。95%正常人血清中IL-3的含量在檢測範圍內（10～2000pg/ml）。

（3）特異性：此方法可檢測天然或在大腸桿菌中重組的人IL-3。與16種不同的細胞因子或生長因子（hrIL-6、hrTNF、hrGM-CSF、hTGF、pTGF、pPDGF、bFGF）無交叉反應，不能檢測鼠IL-3。

（4）標準曲線上IL-3稀釋度的選擇應與待測樣品一致。

如果所測樣品值高於標準IL-3的最高值，則需要稀釋樣品並重新測定。