酸性磷酸酶染色

化驗及醫學檢查

心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

suān xìng lín suān méi rǎn sè

2 英文參考

Acid Phosphatase Stain

3 概述

大部分血細胞內均存在酸性磷酸酶活性,胞質內的酸性磷酸酶在酸性條件下,經水解,再與硝酸鉛硫酸作用,可生成棕黃色或棕黃色的硫酸鉛沉澱。

4 別名

抗酒石酸酸性磷酸酶

5 化驗取材

血液

6 原理

在酸性條件下,磷酸萘酚AS-BⅠ被細胞酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)水解產生萘酚AS-BⅠ,再與重氮鹽偶聯,形成不溶性有色沉澱。

7 試劑

(1)甲醇-丙酮緩衝液

枸櫞酸    0.63g

蒸餾水    30ml

甲醇      10ml

丙酮      60ml

用濃氫氧化鈉溶液調整pH至5.4,用前過濾,4~10℃可保存1個月。

(2)基質儲備液:磷酸萘酚AS-BⅠ100mg,N,N-二甲基甲酰胺10ml,混合後置棕色瓶4~10℃可保存2~3個月。

(3)0.1mol/L乙酸緩衝液:甲液:乙酸鈉(3H2O)13.6g,溶於蒸餾水1000ml。乙液:冰乙酸6.0ml溶於l000ml蒸餾水中。用乙液滴定甲液至Ph 5.2,放4~10℃可保存3個月。

(4)0.05mol/L乙酸酒石酸緩衝液:L-酒石酸3.75g,0.1mol/L乙酸緩衝液490ml,用濃氫氧化鈉溶液調整pH至5.2,再加蒸餾水至500ml,4-10℃可保存3個月。

(5)作用液:0.05mol/L乙酸-酒石酸緩衝液50ml,基質儲備液1.0ml,堅牢紫醬GBC 25mg,溶解過濾,立即染色,一次用完。

8 操作方法

新鮮骨髓片或血片,用冷甲醇-丙酮緩衝液固定30s,蒸餾水漂洗5~6次,晾乾。放入作液37℃保溫45~60min,水洗。用蘇木素染液或甲基綠染液復染細胞核1~6min,水洗,晾後鏡檢陽性對照(即酸性磷酸酶染色):染色過程同上,用0.1mol/L乙酸緩衝液代替乙酸-石酸緩衝液

9 正常值

陽性粒細胞、T淋細胞漿細胞、巨核細胞血小板、幼紅細胞和單核-巨噬系統細胞

磷酸萘酚AS-BI染色法: 陽性胞漿中有鮮紅色或深紅色顆粒,反應強度分爲6級:0~5+(染色顆粒多寡和染色深淺爲分級標準)

10 化驗結果臨牀意義

酸性磷酸酶染色能幫助鑑別戈謝細胞(呈陽性反應)及尼曼-皮克細胞(呈陰性反應);紅血病及紅白血病時幼紅細胞呈核旁單側陽性反應多發性骨髓瘤細胞、急性單核細胞性白血病惡性組織細胞增生症細胞、多毛細胞白血病T淋巴細胞白血病等均呈強陽反應

(1)陽性: 毛細胞白血病

(2)弱陽性淋巴細胞白血病

(3)陰性: 粒系細胞白血病單核細胞白血病、巨核細胞白血病

11 附註

酸性磷酸酶染色,必要時加做L-酒石酸抑制試驗,即爲酸性磷酸酶染色被酒石酸抑制;反之則不被酒石酸抑制,產生不溶性紅色沉澱,定位於胞質內。這對鑑別診斷多毛細胞白血病有重要意義(L-酒石酸抑制試驗仍呈陽性),而多發性骨髓瘤細胞,急性單核細胞性白血病細胞惡性組織細胞增生症細胞均可被L-酒石酸所抑制陽性反應明顯減弱。

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