3 凍幹基因工程α2a干擾素製造及檢定規程
[1]本品系用帶有人α2a型干擾素基因重組質粒的大腸桿菌，經發酵培養及單克隆抗體親和層析後精製而成。用於治療某些病毒性疾病及部分腫瘤疾病。
3.1 菌種
1.1菌種來源
基因工程α2a干擾素工程菌由帶有人α2a干擾素基因的重組質粒轉化大腸桿菌而來。投產的工程菌需經衛生部批准。
1.2菌種特性
從原始菌種庫傳出，經擴大後凍幹保存，或由上一代製造用菌種庫傳出，擴大後凍幹保存作爲製造用菌種庫，但每次只限傳三代。每批製造用菌種庫均進行下列檢定，合格後方可投產。
1.3.1劃種LB瓊脂平板
1.3.2塗片革蘭氏染色
1.3.3對抗生素的抗性
應與原始菌株相符。
1.3.4電鏡檢查
應爲典型大腸桿菌形態，並證明無支原體、病毒樣顆粒及其他微生物污染。
1.3.6干擾素的表達量
在搖牀培養，應符合原始菌種的表達量。
1.3.8表達的干擾素型別
1.4生產菌種
1.4.1生產菌種的製備及檢定
取製造用菌種庫凍幹菌種開啓後劃種LB平板2～3塊，培養後挑取平板中5～10個菌落，分別培養後保存，然後每個菌落分別進行干擾素表達量測定，至少重複一次，選出其中干擾素表達量最高的一份，供生產製備種子液用，其表達量應符合原始菌種的表達量。
1.5種子液
從生產菌種選出的菌種供做發酵用的稱“種子液”。種子液的製備：將1.4.1項檢定合格的生產菌種，根據實際需要做擴充傳代，作爲罐培養的種子液。
3.2 發酵培養
應爲適於發酵培養的培養基，根據菌種的抗生素抗性，培養若中允許加入少量抗生素，但應儘量避免含有β椖邗０防囁股亍?/P>
2.3發酵培養參數
根據工程菌和發酵工藝要求設置和變換各項培養參數。
3.3 收集菌體
用離心法或其他適宜方法收集菌體，菌體可在?/FONT>20℃下保存1年。
3.4 菌體裂解
3.5 製備粗製干擾素
3.6 純化
粗製干擾素經單克隆抗體親和層析等純化步驟後即精製成“干擾素半成品原液”。
3.7 加白蛋白
取干擾素半成品原液檢定合格後，立即另入適量人白蛋白保護劑，即爲“加人白蛋白半成品”，保存於?/FONT>30℃。
3.8 稀釋、除菌過濾
將“加人白蛋白半成品”用無熱原生理鹽水稀釋至所需濃度，補加人白蛋白，使最終含量1%～2%。然後用0.22μm孔徑濾膜除菌，除菌後抽樣進行干擾素效價測定，熱原質試驗和無菌試驗，合格後進行分裝凍幹。
3.9 分裝、凍幹
9.1 每支安瓿分裝1ml，內含α2a干擾素100或300萬IU。
9.2 凍幹過程製品溫度不得超過33℃。
9.3 凍幹後成品置10℃以下乾燥處保存，成品檢定合格後進行包裝。
3.10 半成品檢定
每批半成品抽樣進行10.1～10.8項檢定。啓開新菌種生產的前3批或生產條件有較大改變時進行10.9～10.12項檢定。
10.1 效價測定
用細胞病變抑制法，Wish細胞/VSV爲基本檢測系統，用國家參考品校準爲IU。
10.2 蛋白含量
用Lowry法測定。
10.3 比活性
應≥108Iumg蛋白。
10.4 純度
10.4.1 電泳純度
用非還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低於5μg，經掃描儀掃描純度應在95%以上，聚合體不得超過10%。
10.4.2 高效液相色譜純度
10.5 分子量
用還原型SDS?/FONT>PAGE法，加樣量不低於5μg，α2a干擾素分子量應爲19KD±10%。
10.6 殘餘外源性DNA含量
用同位素或生物素標記探針法測定，每劑量中殘餘外源性DNA應低於100pg。
10.7 殘餘鼠IgG含量
用酶標或其他敏感方法測定，每劑量（20μg）的鼠IgG含量應在100ng以下。
10.8 殘餘工程菌蛋白含量
用酶標或其他敏感方法測定，殘餘工程菌蛋白不得超過總蛋白的0.02%。
10.9 殘留抗生素活性
10.10 肽圖測定
應符合α2a型干擾素圖形，批與批之間圖形應一致。
10.11 等電聚集
測定等電點，α2a型干擾素等電點應5.7～6.7範圍內。
10.12 紫外光譜掃描
檢查半成品的吸收光譜，批與批之間應一致，α2a干擾素的最大吸收光譜應爲280±3nm。
3.11 除菌半成品檢定
11.1 效價測定
同10.1項。
11.2 無菌試驗
按《生物製品無菌試驗規程》進行。
11.3 熱原質試驗
按《生物製品熱原質試驗規程》進行，注射劑量按家兔體重注射20萬IU/kg，判定標準按該規程4.1項要求進行。
3.12 成品檢定
12.1 外觀
應爲白色或微黃色疏鬆體，另入1ml滅菌注射用水溶解後，不得含有肉眼可見的不溶物。
12.2 pH值
pH值應爲6.5～7.5。
12.3 效價測定
同10.1項。其效價應爲標示量的80%～150%。
12.4 水分含量
應≤3%（g/g）。
12.5 鑑別試驗
用中和試驗法，其抗病毒活性能被抗α2a型干擾素血清所中和或用免疫印染法。
12.6 HBsAg檢測
12.7 無菌試驗
同11.2項，每批抽樣不少於10支。
12.8 熱原質試驗
同11.3項。
安全試驗
12.9.1 豚鼠試驗
用體重300～400g豚鼠2只，每隻腹側皮下注射干擾素1ml，觀察7天，局部無紅腫、壞死、體重增加者爲合格。
12.9.2 小白鼠試驗
用體重18～20g小白鼠5只，每隻腹腔注射干擾素0.5ml，觀察7天，動物全部存活，每隻體重增加判爲合格。
3.13 保存與效期
4 凍幹基因工程α2a干擾素使用說明書
本品系用帶有人α2a型干擾素基因重組質粒的大腸肝菌，經發酵培養及單克隆抗體親和層析後精製而成。本品爲白色疏鬆，每支含α2a型干擾素100萬或300萬IU，具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和調節機體免疫功能等生物學活性。用於治療某些病毒性疾病，如兩型肝炎、慢性活動性乙型肝炎、帶狀皰疹和尖銳溼疣等。對於毛細胞白血病、慢性髓細胞性白血病、多發性骨髓瘤、T細胞淋巴瘤、表面膀胱癌和腎癌等均有良好療效。
4.1 用法
每支用滅菌注射用水1ml溶解，通常根據病種確定給藥方法、劑量、間隔和療程。常採用皮下或肌內注射，尖銳溼疣亦可採用病損基底部注射。成人常用劑量每天1～3×106IU，腫瘤患者可適當加大劑量。連日或隔日注射，療程遵醫囑。
4.2 注意事項
1.使用本品後少數病人可發熱或伴有寒戰、頭痛、乏力、肌痛、關節痛等流感樣症狀，常出現在用藥的第一週，可在注射後48小時內消失。如遇有嚴重不良反應，須修改治療方案或停止用藥。
2.過敏者不可使用，嚴重心臟病患者、腎功能不良者、中樞神經系統功能紊亂者不宜使用。孕婦及小兒慎用。
3.一旦發一過敏反應，應立即停止用藥，並給予適當的治療。
4.本品溶解後爲無色透明液體，如遇有混濁、沉澱現象，則不宜使用。
5.用注射用水溶解時應沿瓶壁注入，以免產生氣泡，溶解後須於當日用完，不得放置保存，以免生物活性下降或污染。
4.3 保存
5 參考資料
- ^ [1] ．"《中國生物製品規程》"．