1 概述
華(Wassermann)氏補體結合試驗是一種臨牀化驗檢查項目、又叫華氏反應、化驗標本爲靜脈血、參考值爲陰性、陽性可見於梅毒患者、其他疾病如迴歸熱、瘧疾、紅斑狼瘡、瘤型麻風等也可呈陽性、某些梅毒患者也可始終呈陰性反應。
梅毒螺旋體屬密螺旋體屬蒼白密螺旋體種梅毒亞種,是梅毒的病原體。密螺旋體屬中的其他種包括品他密螺旋體(亦稱斑點病密螺旋體)、奮森密螺旋體等十幾種。蒼白密螺旋體的另外兩個亞種是雅司亞種和地方亞種;雅司亞種是雅司病(一種皮膚病)的病原體,地方亞種又叫非性病性梅毒螺旋體。齒垢密螺旋體和奮森密螺旋體是人口腔中的正常菌羣,在免疫力低下或極度營養不良的個體,奮森密螺旋體可與厭氧菌共同引起壞疽性口腔炎或咽峽炎。屈曲密螺旋體在形態上不易與梅毒螺旋體區別,故在暗視野顯微鏡檢查時應予以注意。品他密螺旋體亦是一種皮膚病(品他病)的病原體。
5 華氏補體結合試驗的原理
試驗分兩個階段進行,先使試驗系統中被檢血清、已知抗體和定量補體作用一段時間,再加入指示系統(綿羊紅細胞與溶血素)若被檢血清中無已知抗原相對應的抗體,就不形成抗原抗體複合物,補體仍全部遊離,則被指示系統的抗原-抗體複合物固定,使紅細胞發生完全溶血,試驗結果爲陰性。反之,若被檢血清中有已知抗原相對應的抗體,形成大量抗原抗體複合物,當補體全部被固定時,無遊離補體存在,則紅細胞完全不溶,試驗結果爲陽性。
7 操作方法
溶血素單位:即能完全溶解紅細胞的溶血素最高稀釋度,按表1假定結果,1∶2400稀釋度(0.1ml)的溶血素爲1個單位。如實驗時應用2個單位,即1∶l200稀釋度(0.1ml)的溶血素溶液。
(2)補體滴定:將補體稀釋成1∶30。按表2成分、次序、劑量加入各管中作滴定,整個試驗過程中補體應放在冰水盒中,防止活性下降。
補體單位:即能發生完全溶血現象的最小補體量。按表2假定結果,1∶30補體0.12ml內含1個單位,則0.24ml含有2個單位。爲使0.2ml中含有2個單位,可按下法計算稀釋:
①將64支試管排方陣,即8行與8排。
②先作二倍稀釋已滅活(56℃30min)的免疫血清,於第一排1~8各管中加1∶2稀釋血清0.1ml,將1∶4稀釋血清加至第二排1~8管中,如此二倍遞增稀釋血清加到第七排。第八排不加血清,以0.1ml鹽水代替,作爲抗原對照。
③同上法稀釋抗原,第一行1~8各管中加1∶2稀釋抗原0.1ml;第二行中1~8各管中加1∶4。稀釋抗原0.1ml,如此,二倍稀釋抗原加到第七行,第八行不加抗原,以0.1ml鹽水代替,作爲血清對照。
④在各對照管中補充鹽水0.1ml。
⑤然後,再於每管中加入2U補體0.2ml,放置4℃冰箱16~18h,次日置37℃水浴箱中30min,各管中加入1.25%綿羊紅細胞及溶血素(2U)各0.lml,再放置37℃水浴箱中30min。
⑥觀察結果:如“4+”表示補體完全被檢驗系統所固定,呈現全不溶血;“-”表示補體完全未被檢驗系統固定,呈現完全溶血;在二者之間不同程度
者則以“3+”、“2+”、“+”、“±”表示之。
抗原單位:即能與最高稀釋倍數的血清呈“3+”反應的抗原最高稀釋倍數即爲1個抗原單位。如表3所示,1∶8。試驗時用2個單位,即1∶4。
(4)正式試驗:
①排列試管12支,前8支管加入不同稀釋度血清,檢查抗體的有無及效價,後4支管作爲對照,另取4支管作補體對照。
②按表4內容加入各種材料。
8 正常值
陰性。