3 B淋巴細胞表面標誌的醫學檢查
3.1 檢查名稱
3.2 分類
3.3 化驗取材
3.4 B淋巴細胞表面標誌的測定原理
人類B細胞表面帶SmIg，每一個B細胞表面帶有不同類的Ig，即IgM、IgD、IgG、IgA、或IgE。如用熒光法標記的抗人IgM、IgD、IgG、IgA及IgE抗體，分別同標記的熒光抗體染色，則熒光抗體與B細胞表面相應的SmIg結合，在熒光顯微鏡下觀察，凡與熒光標記抗體結合的細胞則細胞膜呈現熒光，爲SmIg陽性細胞，即B細胞，同時用普通光源照明，計數該視野的淋巴細胞總數，根據發熒光和不發熒光細胞的計數，可求得帶各類SmIg細胞的百分數。把這些數相加爲血液中B細胞的百分數。
3.5 試劑
（1）異硫氰熒光素（FITC）標記的兔抗人IgG，兔抗人IgM抗體，F/P在分子比值爲1～2。
（2）Hank液（含1.0g/L。NaN3），調pH至7.4。
（4）50%PBS緩衝甘油。
3.6 操作方法
（1）取肝素抗凝血2ml，加等量Hank液混勻，重層於分層液上，2000r/min，離心20min。取出淋巴細胞層，加Hank液，洗3次，1200r/min，離心10min，調整淋巴細胞濃度爲1×107/ml，取0.1ml分裝兩管。
（2）將淋巴細胞懸液再用Hank液洗1次，棄去上清，用濾紙吸去管內壁剩餘液體，分別加兔抗人IgG及抗人IgM熒光抗體2滴（約0.08ml），輕搖後，放37℃溫箱30min。
（3）從溫箱取出用Hank液洗兩次，1000r/min離心10min，小心吸去全部上清，將管底沉澱的細胞加入50% PBS緩衝甘油1滴，混勻後取1滴加入載玻片上，覆以蓋玻片，置熒光顯微鏡下觀察。
3.7 正常值
IgM均值11.2±6.0%；IgG均值7.5±3.3%。
3.8 化驗結果臨牀意義
B細胞數量的降低與體液免疫缺陷有關，B細胞數升高則與B細胞惡性增生等有關。
3.9 附註
（1）熒光抗體試劑中存在凝聚IgG的影響，凝聚IgG可以和B細胞表面Fc受體結合出現假陽性，因此，爲避免出現凝聚IgG須注意：
①不能使用F/P克分子比值過高的熒光抗體，一般以1～3爲宜。
②含低濃度蛋白的熒光抗體低溫保存不穩定，一般不應低於2mg/ml。
③低溫保存的熒光抗體不可反覆凍融，使用前150000r/min離心30min，除去凝聚物。
（2）活的淋巴細胞作免疫熒光染色時，在全部試劑中（標記抗體、Hank液等）均需加NaN3，以限制細胞膜的流動性。否則會出現帽狀熒光和吞噬現象，熒光細胞實際數下降。
（3）用抗IgG熒光抗體染色時，可由於標本中含有抗原一抗體（IgG型）免疫複合物與B細胞表面Fc受體結合，表現爲熒光陽性。爲此，有人建議用熒光標記抗F（ab）2抗體染色，以排除Fc受體被着染。
（4）如果當天不能觀察標本，則將細胞懸於熒光抗體保存液中，4℃存放，次日計數。
近年來由於抗B細胞表面特異分子（CD19、CD20等）單克隆抗體的問世，因而人們開始傾向於應用熒光素標記的抗CD19或CD20的單克隆抗體直接與外周血淋巴細胞反應；或用抗CD19和CD20的單克隆抗體（第一抗體）先與淋巴細胞反應，再與熒光素標記的兔或羊抗鼠IgG（第二抗體）結合，熒光顯微鏡下計數或流式細胞術來計數外周血B淋巴細胞。