3 概述
IL-6是一26KD的多肽，生物效應極爲廣泛，主要包括：①調節B細胞的生長和分化。②增強CTL、NK細胞的殺傷效應。③刺激造血幹細胞的增生分化。④促進肝細胞合成急性相蛋白等，人體各個系統都有IL-6分泌細胞，因此，IL-6在維持機體生理平衡中具有十分重要的地位。已有大量實驗資料表明，體內IL-6的異常與多種疾病有關。
4 血清白細胞介素6的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 取材
4.4 血清白細胞介素6的測定原理
（1）IL-6的生物活性檢測 MH60 BSF2細胞株依賴IL-6而生長，通過檢測待檢樣品對該細胞增殖的支持程度即可直接反應IL-6的活性。
（2）IL-6免疫學檢測 ELISA（雙抗體夾心法）是目前檢測IL-6最常用的免疫學方法。該法有較好的特異性和敏感性。國外已有數家公司提供商品化的試劑盒檢測IL-6。這裏介紹Matsuda等（1988）建立的ELISA檢測法。
4.5 試劑
（1）IL-6的生物活性檢測
①MH60 BSF2細胞株的擴增：將細胞培養於含定量r/IL-6完全1640培養基中傳代擴增。
③MTT 5mg/ml PBS溶解，濾過除菌，避光保存。
⑤30g/L，SDS。
⑥酶標測定儀。
①抗人IL-6單克隆抗體（aBSF2-166）。
③鹼性磷酸酶標記的羊抗兔IgG。
④0.1mol/L碳酸鈉緩衝液pH9.6（包被液）和0.05mol/L碳酸鈉緩衝液pH9.8（底物液）。
4.6 操作方法
（1）IL-6的生物活性檢測
①取處於對數生長期的MH60細胞，用Hank液洗3次，然後重懸於完全1640（含10%NBS）中再培養6h，以去除細胞表面結合的IL-6。
②於96孔板中倍比稀釋待檢樣品及rIL-6標準品，每份樣品做三個平行孔。
③重懸並離心沉澱MH60細胞，棄上清，再用不完全1640調細胞濃度爲2×105/ml，加入含待檢則品的96孔板中，每孔100μ1（含104細胞）。
④將細胞培養於37℃5%CO2條件下共48h。
⑤在細胞培養達44h後，各孔加下MTT（5mg/m1）20μl，繼續培養4h。
⑥取出96孔板，離心，1000r/min，10r/min輕輕甩去上清，並用紙巾吸取邊緣殘留的上清。
⑦每孔加入100μl酸化異丙醇，室溫下放置20min，期間輕輕振盪96孔板，以使異丙醇溶解充分。
⑧每孔加入20μl，30g/L SDS以消除異丙醇引起的蛋白沉澱對A測定的影響。
⑨用酶標測定儀分別測定各孔在570nm和630nm處的A值，並且以A570-A630作爲最終數值。
⑩將最終值以標準品（rIL-6）的最大值爲分母，進行百分數換算，然後再找出百分數相對應的概率單位。據此描繪出標準品和待測標本各稀釋度的概率單位曲線。以5個概率單位爲起點劃一平行於X軸的線，該線與各曲線交點所對應的稀釋度分別與標準品的稀釋度進行比較則可求出各自活性單位。
①抗人IL-6單克隆抗體（aBSF2-166），用包被緩衝液稀釋成0.1μg/ml，加入96孔酶標板，100μ1/孔，4℃過夜。
②棄去包被抗體，每孔加100μl 10g/L BSA-PBS，室溫下封閉2h。
③洗板3次，加入待測樣品和不同濃度的人IL-6，4℃過夜。
④洗板3次，加入兔抗人IL-6多抗（0.1μg/ml）室溫下作用2h。
⑤洗板3次，加入1∶2500稀釋的磷酸酶標記的羊抗兔IgG，室溫放置2h。
⑥洗板，各孔加入對硝基苯磷酸酯（1mg/ml），100μl/孔，室溫反應5～10min，3mol/L NaOH終止反應。
⑦用酶聯免檢測儀在405nm波長測A值。
⑧以標準人IL-6的濃度爲橫座標，以A值爲縱座標，繪製標準曲線。並求待測樣品中IL-6的含量。
4.7 正常值
（1）ELISA（酶聯免疫吸附試驗）：0.373～0.463ng/L；
（2）四甲基偶氮唑藍比色法：＜5U/ml。
4.8 化驗結果臨牀意義
4.9 附註
IL-6的生物活性檢測：MH60 BSF2細胞株體外傳代，細胞易變異而失去依賴性，所以需要每2～3月亞克隆一次，篩出依賴性強的細胞株。