4 血清鐵蛋白醫學檢查
4.1 分類
4.2 取材
4.3 原理
吸附於聚苯乙烯上的鐵蛋白抗體與樣品中的鐵蛋白結合,形成鐵蛋白-抗鐵蛋白抗體複合物,再與酶標記鐵蛋白抗體結合形成鐵蛋白抗體-鐵蛋白-酶標鐵蛋白抗體複合物,其複合物中的辣根過氧化物酶作用於鄰苯二胺-H2O2底物產生有色物質,與標準鐵蛋白比較求得血清中鐵蛋白含量。
4.4 試劑
(1)9g/L NaCl溶液。
(2)洗滌液0.05mol/L PB(pH7.2),內含0.05% Tween20。
(4)系列鐵蛋白標準液:鐵蛋白標準品(可購買)用稀釋液配成5,15,25,35,45ng/ml。
(5)抗鐵蛋白血清,用鐵蛋白標準物免疫動物製成,有商品供應。
(6)酶標記抗體:辣根過氧化物酶(HRP)與抗鐵蛋白抗體的結合物,有商品供應。
(7)底物溶液取0.1mol/L Na2HPO4 5.14ml,加0.05mol/L檸檬酸4.86ml和鄰苯二胺(OPD)4mg混勻溶解,臨用前加3%H2O2 0.05ml。
4.5 操作方法
(1)測定、標準、空白各孔均加100μl抗鐵蛋白血清,放置4℃過夜,各孔用洗滌液洗3次,每次放室溫3min。
(2)標準和測定孔內分別加100μl系列鐵蛋白標準液和樣品(用稀釋液稀釋10倍),置37℃50min,各孔用9g/L NaCl洗3次,洗法同上。
(3)各孔均加100μl酶標記抗體,置37℃50min,再用9g/L NaCl洗3次。
(4)每孔加100μl底物溶液,置37℃30min顯色。
(5)最後每孔加50μl 2mol/L H2SO4,以終止反應,492nm比色,讀取各孔吸光度。
附註:
(1)洗滌過程中避免用力過猛,以防將吸附於聚苯乙烯上的結合物沖洗掉。
(2)可改用聚乙烯試管法,此時試劑的用量要適當加大,最後用分光光度計比色。
4.6 正常值
男性124±66ng/ml,女性68±33ng/ml。
4.7 臨牀意義
血清鐵蛋白是體內含鐵量最豐富的一種蛋白質。肝、脾、紅骨髓及腸黏膜是鐵儲備的主要場所,約佔全身的66%,測定血清鐵蛋白是判斷體內鐵貯量的重要指標。對診斷缺鐵性貧血,鐵負荷過度,營養狀況調查都有重要意義,同時鐵蛋白作爲一種腫瘤標誌物,對臨牀某些惡性腫瘤的診斷也具有一定參考價值。
4.8 附註
(1)洗滌過程中避免用力過猛,以防將吸附於聚苯乙烯上的結合物沖洗掉。
(2)可改用聚乙烯試管法,此時試劑的用量要適當加大,最後用分光光度計比色。