3 概述
γ-谷氨酰轉移酶(GGT)臨牀上常稱爲γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT),廣泛存在於腎、前列腺、胰、肝、盲腸和腦等組織中,在腎臟、胰腺和肝髒中含量之比約爲100∶8∶4。血清GGT測定主要用於肝膽疾病的診斷,其測定方法主要爲比色法和連續監測法。
4 血清γ-谷氨酰轉肽酶醫學檢查
4.1 分類
4.2 取材
4.3 原理
4.3.1 (1)比色法
GGT催化L-γ谷氨酰-α-萘胺,使γ-谷氨酰基轉移到雙甘肽分子上,同時釋放出α-萘胺,後者與重氮試劑呈紅色反應。
4.3.2 (2)連續監測法
GGT可使L-γ谷氨酰-3-羧基對硝基苯胺中的谷氨酰基轉移到受體雙甘肽分子上,同時釋放出黃色的2-硝基-5-氨基苯甲酸,在405nm處其吸光度的增高速率與GGT活性成正比。
4.4 試劑
4.4.1 (1)比色法
①緩衝液(pH 8.0,25℃):稱取Tris 9.1g,雙甘肽3.96g,溶於400ml蒸餾水中,再加蒸餾水至500ml,加氯仿1ml,置冰箱保存。
②底物緩衝液(pH 7.8~7.9):稱取L-γ-谷氨酰-α-萘胺(無結晶水,MW272.3)217mg,置小燒杯中,加1mol/L HCl約4ml,待完全溶解後,再加上述Tris雙甘肽緩衝液90ml,於25℃用1mol/L HCl調節至pH8.0±0.1,然後加水至100ml,置冰箱保存。
③2g/L對氨基苯磺酸醋酸溶液(含醋酸20%),置冰箱保存。
⑤顯色劑:取4液4ml,加3液100ml混勻,當天配製。
4.4.2 (2)連續監測法
試劑成分和反應液中的參考濃度:Tris-HCl緩衝液110mmol/L;L-谷氨酰-3-羧基對硝基苯胺6mmol/L;雙甘肽110mmol/L;pH8.1(25℃)。
4.5 操作方法
4.5.1 比色法
取試管6支,按表1操作。
以上各管混勻,10min後用530nm波長,1cm比色杯,用空白管調零,讀各標準管吸光度,以吸光度爲縱座標,相應單位爲橫座標,繪製標準曲線。
附註:
(1)緩衝液種類不同,酶反應的最適pH亦不同,以Tris緩衝液最爲適宜。
(2)底物緩衝液中游離的α-萘胺不穩定,且對酶有抑制作用。故配製時應注意溫度的影響,如試劑空白管吸光度>0.08,則應將L-γ-谷氨酰-α-萘胺重結晶,以除去遊離α-萘胺。
(4)標本易採用血清,並可用EDTA-Na2(1mg/ml)抗凝血漿,其他抗凝劑可影響結果。
(5)GGT較穩定,室溫放置2天,4℃ 1周酶活力無變化,但65℃ 1min全部失活。
4.5.2 連續監測法
各實驗室可根據本室的分析儀型號及操作介紹而定,主要參數:波長405nm,吸樣量500μl,溫度37℃,樣本與試劑體積比爲1∶10。
4.6 正常值
(1)比色法:成年男性:3~17U/L,女性2~13U/L。
(2)連續監測法:男11~50U/L,女7~32U/L。
4.7 臨牀意義
(1)阻塞性黃疸:肝內外阻塞性黃疸患者血清GGT均顯著升高,其幅度與阻塞程度呈正相關,阻塞越重,升高越顯著。
(2)病毒性肝炎和肝硬化:急性肝炎、慢性活動性肝炎和進行性肝硬化GGT亦可升高,但不及阻塞性黃疸明顯。急性肝炎恢復期,若GGT仍高於正常,提示肝炎仍未痊癒。慢性肝炎、肝硬化若其值持續升高,示病情不穩定或有惡化趨勢;逐漸下降,提示肝內病變向非活動性移動。
(3)藥物性、酒精性肝病、脂肪肝等:GGT也升高,顯著性升高是酒精性肝病的重要特徵。
(4)肝癌:肝癌患者GGT活性顯著升高,尤其是惡性腫瘤肝轉移及肝癌手術復發時更明顯,陽性率可達90%。GGT升高幅度與癌組織大小及範圍有關,當腫瘤切除後,GGT可降至正常,復發時又升高,故動態觀察可監測療效、判斷預後。