2 註解
2.1 試劑
取磷酸氫二鈉71.64g,加水使溶解成1000ml,作爲甲液。另取磷酸二氫鈉27.60g,加水使溶解成1000ml,作爲乙液。取甲液81ml與乙液19ml,混勻,調節pH值至7.3。
取磷酸鹽緩衝液(0.2mol/L)500ml,加水稀釋成1000ml,調節pH值至7.3。
取磷酸鹽緩衝液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀釋成1000ml,調節pH值至7.3。
取琥珀酸與氫氧化鉀各4.72g,加水使溶解成100ml,調節pH值至7.3。
(5) 氰化鉀溶液 取氰化鉀0.65g,加水使溶解成100ml後,用稀硫酸調節pH值至7.3。
(6) 去細胞色素C的心懸浮液
取新鮮豬(牛)心2只,除去脂肪與結締組織,切成條,用絞肉機絞碎,置紗布兜中,用常水沖洗約2小時(經常攪動,擠出血色素),擠幹,用水洗數次,擠幹,置磷酸鹽緩衝液(0.1mol/L)中浸泡約1小時,擠幹,重複浸泡1次,用水洗數次,擠幹,置組織搗碎機內,加磷酸鹽緩衝液(0.02mol/L)適量恰使豬(牛)心浸沒,搗成勻漿,離心10分鐘(普通離心機),取上層混懸液,加冰塊少量,迅速用稀醋酸調節pH值至約5.5,立即離心15分鐘,取沉澱,加等體積的磷酸鹽緩衝液(0.1mol/L),用玻璃勻漿器磨勻後,貯存於冰箱中;臨用時取1.0ml,加磷酸鹽緩衝液(0.1mol/L)稀釋成10ml.
2.2 供試品溶液的製備
2.3 測定法
取磷酸鹽緩衝液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml(如系還原型製劑,應加入0.01mol/L鐵氰化鉀溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去細胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml,加水稀釋至10ml,搖勻,以同樣的試劑作空白,照分光光度法,在550nm的波長處附近,間隔0.5nm找出最大吸收波長,並測定吸收度,直至吸收度不再增大爲止,作爲酶還原吸收度;然後各加連二亞硫酸鈉約5mg,搖勻,放置約10分鐘,在上述同一波長處測定吸收度,直至吸收度不再增大爲止,作爲化學還原吸收度;按下式計算。
酶還原吸收度
細胞色素C活力=───────────×100%
化學還原吸收度