細胞色素C活力測定法

心氣虛,則脈細;肺氣虛,則皮寒;肝氣虛,則氣少;腎氣虛,則泄利前後;脾氣虛,則飲食不入。
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1 拼音

xì bāo sè sù C huó lì cè dìng fǎ

2 註解

2.1 試劑

(1) 磷酸緩衝液(0.2mol/L)

磷酸氫二鈉71.64g,加水使溶解成1000ml,作爲甲液。另取磷酸二氫鈉27.60g,加水使溶解成1000ml,作爲乙液。取甲液81ml與乙液19ml,混勻,調節pH值至7.3。

(2) 磷酸緩衝液(0.1mol/L)

磷酸緩衝液(0.2mol/L)500ml,加水稀釋成1000ml,調節pH值至7.3。

(3) 磷酸緩衝液(0.02mol/L)

磷酸緩衝液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀釋成1000ml,調節pH值至7.3。

(4) 琥珀酸鹽溶液

琥珀酸與氫氧化鉀各4.72g,加水使溶解成100ml,調節pH值至7.3。

(5) 氰化鉀溶液氰化鉀0.65g,加水使溶解成100ml後,用稀硫酸調節pH值至7.3。

(6) 去細胞色素C的心懸浮液

取新鮮豬(牛)心2只,除去脂肪結締組織,切成條,用絞肉機絞碎,置紗布兜中,用常水沖洗約2小時(經常攪動,擠出血色素),擠幹,用水洗數次,擠幹,置磷酸緩衝液(0.1mol/L)中浸泡約1小時,擠幹,重複浸泡1次,用水洗數次,擠幹,置組織搗碎機內,加磷酸緩衝液(0.02mol/L)適量恰使豬(牛)心浸沒,搗成勻漿,離心10分鐘(普通離心機),取上層混懸液,加冰塊少量,迅速用稀醋酸調節pH值至約5.5,立即離心15分鐘,取沉澱,加等體積的磷酸緩衝液(0.1mol/L),用玻璃勻漿器磨勻後,貯存於冰箱中;臨用時取1.0ml,加磷酸緩衝液(0.1mol/L)稀釋成10ml.

2.2 供試品溶液的製備

取供試品,加水製成每1ml中含細胞色素C約3mg的溶液

2.3 測定法

磷酸緩衝液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml(如系還原型製劑,應加入0.01mol/L鐵氰化鉀溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去細胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml,加水稀釋至10ml,搖勻,以同樣的試劑作空白,照分光光度法,在550nm的波長處附近,間隔0.5nm找出最大吸收波長,並測定吸收度,直至吸收度不再增大爲止,作爲酶還原吸收度;然後各加連二亞硫酸鈉約5mg,搖勻,放置約10分鐘,在上述同一波長處測定吸收度,直至吸收度不再增大爲止,作爲化學還原吸收度;按下式計算。

酶還原吸收

細胞色素C活力=───────────×100%

化學還原吸收

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