3 概述
糖化血清蛋白爲血清葡萄糖與白蛋白及其他血清蛋白分子N末端的氨基上發生非酶促糖化反應,形成高分子酮胺結構。因爲血漿蛋白尤以白蛋白半衰期短(19天),因此可反映糖尿病治療的較近期效果,瞭解糖尿病控制1~2周的血糖水平。據報道糖化血清蛋白與GHb相關性良好。
5 糖化血清蛋白
5.1 分類
5.2 原理
糖化血清蛋白能在鹼性環境中與硝基四氮唑藍(NBT)發生還原反應,生成甲物以1-脫氧-1-嗎啉果糖(DMF)爲標準參照物,進行比色測定。
5.3 試劑
(1)0.1mol/L碳酸鹽緩衝液(pH10.8):無水碳酸鈉9.54g,碳酸氫鈉0.84g,溶於蒸餾水並稀釋至1000ml。
(2)0.11mol/L NBT試劑:稱取氯化硝基四氮唑藍100mg,用上述緩衝液溶解並稀釋至1000ml,置冰箱保存,至少可穩定3個月。
(3)4mmol/L DMF標準液:稱取DMF99.6mg,溶於40g/L牛血清白蛋白溶液100ml中。
5.4 操作方法
測定管加待檢血清(血漿)0.1ml,空白管加蒸餾水0.1ml,各加37℃預溫的NBT試劑4m1,混勻,置37℃準確水浴15min取出,流水冷卻(低於25℃)。冷卻後15min內於分光光度計波長550nm,10mm光徑比色杯以空白調零,讀取測定管吸光度。從標準曲線查得結果。以果糖胺mmol/L報告。
附註:
(1)DMF可以自己合成,方法是稱取無水D-葡萄糖90g,嗎啡啉58g,加蒸餾水1L,溶解後在60~70℃水浴上攪拌,開始爲黃色糊狀物,後顏色逐漸加深。20min後,移去水浴,緩慢地加入丙二酸18g,整個加入過程需在10min以上。再置水浴並使溫度上升至80℃,不斷攪拌,顏色由黃綠色轉變爲琥珀色。10min後,加無水乙醇70ml,維持75℃30min,再加入丙酮70ml。此時可見到結晶析出,此即爲DMF。放4℃冰箱過夜。收集結晶,並用無水乙醇重結晶3次,使產物脫色純化,乾燥備用。熔點146~147℃,分子式C10H19O6N,分子量249D。
(2)pH值、反應溫度、反應時間對本試驗影響較大,必須嚴格控制。
(3)血清蛋白經非酶促糖化反應可形成酮胺結構。DMF在適當的pH值及溫度條件下,經過結構重排也可以由氧環式結構形成1-脫氧-1-氨基-2-酮基的酮胺結構。因此用它作爲標準參照物是合理的。
(4)用定值凍幹糖化血清蛋白作標準,測定結果更穩定。因爲用不同標準物時所測得結果不完全一致,最好建立實驗室的參考值。
5.5 正常值
1.9±0.25mmol/L。
5.6 臨牀意義
(1)由於血清蛋白半衰期較短,本試驗可有效反映患者過去1~2周內血糖的水平。
(2)本試驗不受臨時血糖濃度波動影響,故爲臨牀糖尿病人的診斷和較長時間血糖控制水平的研究,提供了一個很好的指標。同一患者前後連續檢測結果的比較更有價值。