3 概述
人類輪狀病毒(HRV)歸屬呼腸病毒科,爲RNA病毒類,是人類非細菌性腸炎的常見致病因子,主要經糞-口傳播,感染後血中很快出現IgM和IgG抗體,用ELISA法檢查糞便中病毒抗原是常用的診斷方法。
4 輪狀病毒抗體的醫學檢查
4.1 檢查名稱
4.2 分類
4.3 化驗取材
4.4 輪狀病毒抗體的測定原理
兔抗輪狀病毒抗體包被微孔,捕獲待測抗原。加豚鼠抗輪狀病毒抗體與抗原特異結合,然後加酶標抗豚鼠IgG,最後加底物顯色。
4.5 試劑
國內有成套試劑,內含兔抗輪狀病毒抗體、豚鼠抗輪狀病毒抗體、羊抗豚鼠IgG酶標記抗體等。
4.6 操作方法
(1)兔抗輪狀病毒抗體最適濃度包被單數孔作爲試驗孔,正常兔血清包被雙數孔爲對照孔,每孔100μl,4℃ 24h以上,洗3次,幹後4℃保存備用。
(2)待檢糞便用0.01mol/L PBS稀釋成20%懸液,3000r/min離心30min,取上清液,加等量稀釋液(含20.0g/L牛血清清蛋白),每孔100μl,每份標本加試驗孔和對照孔各2孔。每板均設陽性(病毒抗原)和陰性(正常糞便)對照各1份。4℃過夜,洗3次。
(3)將豚鼠抗輪狀病毒抗體稀釋成最適濃度,每孔加100μl,37℃ 1h,洗3次。
(4)加入酶標羊抗豚鼠IgG,每孔100μl,37℃ 1h,洗3次。
(5)加入鄰苯二胺-H2O2底物溶液,每孔100μl,37℃ 20min。加入2mol/L H2SO4終止反應,用ELISA檢測儀測定492nm吸光度。
4.7 正常值
P/N≥2.1爲陽性。
4.8 化驗結果臨牀意義
4.9 附註
ELISA法較敏感,特異地以患者糞便中檢出輪狀病毒抗原,從而做出診斷。