3 概述
染色試驗(MBD)是診斷弓形蟲病的可靠和敏感的方法,其在早期感染即出現陽性,並能維持1年之久,但該試驗需用活的弓形蟲,一般的醫學檢驗室不易進行。補體結合試驗陽性反應出現在病程後期並轉陰較快,與染色試驗結合使用有參考價值,皆因操作繁瑣而爲間接血凝、熒光抗體和酶免疫吸附測定等法所取代。一些新的測抗體的方法在國內使用尚不普遍。本文主要介紹點免疫金滲濾法。
4 檢查名稱
6 弓形蟲點免疫金滲濾法的原理
7 試劑
DIFA試劑盒中的主要組分爲一滲濾裝置,最簡單的形式如圖1。扁形塑料小盒(4cm×3cm×0.6cm)中充滿吸水墊料(數層疊在一起的濾紙或吸水紙)。小盒分底,蓋兩部分。蓋部中央有直徑0.5cm小孔。小孔下緊貼吸水墊料放置一片硝酸纖維素或其他具合適吸附性能的微孔濾膜。閉緊盒蓋,即爲滲濾裝置。
8 操作方法
DIFA的操作與斑點-ELISA基本相同,只是反應與洗滌通過滲濾完成。以雙抗體夾心法測抗原爲例,操作過程如下:在滲濾裝置的盒蓋上膜的中央,點加抗體溶液約1μl,待幹(室溫約半小時,以後在乾燥條件下可長期保存)。以下試驗在膜上進行:①加封閉劑2滴(每滴約50μl),待滲入。②加洗滌液2滴,待滲入。③加血清標本1滴,待滲入。④加酶標抗體1滴,待滲入。⑤加洗滌液2滴,待滲入。⑥加底物液1滴,滲入後如反應爲陽性,即在膜中央出現着色斑點。⑦加洗滌液2滴,終止反應。每次加液滲入所需時間不到半分鐘,整個試驗過程可在5min內完成。
9 正常值
陰性:無色斑點。