5 血清脂蛋白和血清脂蛋白電泳醫學檢查
5.1 分類
5.2 原理
脂蛋白是在鹼性pH條件下，以瓊脂糖凝膠或醋酸纖維條帶作爲載體，從陽性方向來進行分離的。形成的蛋白區帶可以用脂肪染料如蘇丹黑或者油紅染色，它們只用於脂蛋白染色。在瓊脂中可能會有附加的聚陰離子和二價陽離子沉澱。脂蛋白沉澱帶用光密度計可立即定量分析。脂蛋白區帶也可以被切開後重新溶解，對各區帶進行膽固醇濃度的直接酶法檢測。另外，有報道在用薄層瓊脂糖凝膠上進行電泳分離後，可直接檢測各脂蛋白組分中的膽固醇含量的方法。
5.3 試劑
（1）巴比妥-巴比妥鈉緩衝液（pH 8.6±0.1、μ＝0.06）：以巴比妥2.21g、巴比妥鈉12.36g於500ml蒸餾水中，加熱溶解，待冷卻至室溫後加蒸餾水至1000ml。
（2）染色液：
①麗春紅S染色液：麗春紅9.04g、三氯醋酸6g，用蒸餾水溶解，並稀釋至100ml。
②氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶於無水乙醇20ml中，加冰醋酸5ml，甘油0.5ml使溶解。然後將磺柳酸2.5g，溶於少量蒸餾水中，加入前液，再以蒸餾水補足至100ml。
（3）漂洗液：
②甲醇45m，冰醋酸5ml和蒸餾水50ml混勻。用於氨基黑10B染色的漂洗。
（4）透明液：檸檬酸（C6H5Na3O7·2H2O）21g和N-甲基-吡咯烷酮150g，用蒸餾水溶解，並稀釋到500ml。亦可選用氫萘或液體石蠟透明。
（5）0.4mol/L氫氧化鈉溶液或0.1mol/L氫氧化鈉溶液。
5.4 操作方法
（1）將緩衝液加入電泳槽內，調節兩側槽內的緩衝液，使其處於同一平面。
（2）醋酸纖維素薄膜的準備：取醋酸纖維素薄膜（2cm×8cm）在毛面的一端（負極側）1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線，做點樣標記。編號，並標明正、負極後，將薄膜置於巴比妥-巴比妥鈉緩衝液中浸泡，待充分浸透後（一般爲20min）取出，夾於潔淨濾紙中間吸去多餘的緩衝液。
（3）將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼於電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無溶血血清3～5μl於橫線處沿橫線加樣，樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離，以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形，待血清滲入薄膜後，反轉薄膜，使光面朝上，平直地貼於電泳槽支架上，用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩衝液連通，稍待片刻。
（4）接通電源，注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極，切勿接錯。電壓90～150V，電流0.4～0.6mA/cm（不同的電泳儀所需電壓，電流可能不同，應靈活掌握），夏季通電45min，冬季通電時間稍長，約爲60min，電泳區帶展開約25～35mm即可。
（5）染色：通電完畢，取下薄膜直接浸於麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min（以白蛋白區帶染透爲止），然後在漂洗液中漂去剩餘染料，直至背景無色爲止。
（6）定量：
①比色法：將漂洗的薄膜吸乾，剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml（計算時吸光度乘以2），其餘各管加3ml，振搖數次，置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度，然後計算出各管的含量（同時做空白管對照）。
麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉，加入量同上法。10min後，白蛋白管內加400ml/L醋酸0.6ml（計算吸光度時乘以2），其餘各管加0.3ml，以中和部分氫氧化鈉，使色澤加深，必要時離心，取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度（同時作空白對照），然後計算各自的含量。
②光密度計掃描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液（爲防止透明液被稀釋影響透明結果），將薄膜浸入透明液中2～3min，然後取出，以滾動的方式平貼於潔淨無劃痕的載物玻璃片上（切勿產生氣泡），將此玻片豎立片刻，除去多餘透明液後，置於恆溫90～100℃的烘箱內，烘烤10～15min，取出冷卻至室溫，用此法透明的各蛋白區帶鮮明，薄膜平整，可供直接掃描和永久保存（用氫萘或液體石蠟透明，應將漂洗過的薄膜烘乾後進行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易發生皺摺）。②掃描定量：將已透明的薄膜放入全自動光密度計或其他光密度計暗箱內，進行掃描分析。
附註：
樣本：可用新鮮、未冷凍的血清分離脂蛋白。血漿不適合用來做脂蛋白電泳，因爲會出現一條纖維蛋白原區帶。
帶有清晰的分離組分的脂蛋白圖形是進行準確解釋的先決條件。如果能夠很好地滿足這些條件，在脂蛋白電泳和參考方法（超速離心法）之間就可以相當一致。各組分的精密度不同，用變異係數表示，估計一般都在5%以下。
偶爾α-脂蛋白會消失和（或）出現一條舌狀的窄的α-脂蛋白區帶。這是因爲遊離脂肪酸在。α-脂蛋白上積聚，造成了這些微粒帶有電荷相等。由於α-區帶密度增大，從而導致結果偏高。和沉澱技術相比，定量脂蛋白電泳的耗資較高。
5.5 正常值
乳糜微粒： 0g/L （0mg/dl）
極低密度脂蛋白：0.06～0.3g/L （6～30mg/dl）
低密度脂蛋白： ＜7g/L （＜700mg/dl）
高密度脂蛋白： 男：0.52±0.11g/L（43±18mg/dl）
女：0.55±0.13g/L（47±2mg/dl）
5.6 臨牀意義
