3 概述
膽鹼酯酶(ChE)是肝合成而分泌入血的,它們和血漿白蛋白蛋白一樣,是肝合成蛋白質功能的指標。人和動物的ChE有兩類。一類是真膽鹼酯酶(AChE),分佈於紅細胞及腦灰質等中。另一類是擬膽鹼酯酶(PChE),分佈於肝、腦白質及血清等中。ChE的主要功能爲催化乙酰膽鹼的水解。常用比色法與連續監測法測定。
5 膽鹼酯酶的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 膽鹼酯酶的測定原理
血清中ChE使乙酰膽鹼水解成膽鹼和乙酸,未被水解的剩餘乙酰膽鹼與羥胺作用生成乙酰羥胺,乙酰羥胺與鐵離子在酸性溶液中形成棕色鐵複合物,根據顏色深淺計算剩餘乙酰膽鹼含量,推算出水解乙酰膽鹼的酶活力。
5.5 試劑
(1)磷酸鹽緩衝液(pH8.0):將2/15mol/L磷酸氫二鈉(Na2HPO4· 2H2O)23.752g溶於1000ml蒸餾水,2/15mol/L磷酸二氫鉀(KH2PO418.150g溶於1000ml蒸餾水中),將上述兩液按94.7∶5.3比例混合而成。
(2)0.001mol/L的醋酸鈉溶液:稱取醋酸鈉(CH3-COONa·3H2O,AR)0.136g,
溶於蒸餾水使成爲1000ml。
(3)0.008mol/L乙酰膽鹼底物液:精確稱取氯化乙酰膽鹼0.1453g或溴化乙酰膽鹼0.1809g,用0.001mol/L醋酸鈉溶液溶解稀釋至100ml。此液冰箱保存1周。
(6)鹼性羥胺:將140g/L鹽酸羥胺溶液與140g/L氫氧化鈉溶液等量混合而成,按當天需要量配製。
(7)33.3%鹽酸溶液(V/V):取濃鹽酸一份加蒸餾水兩份混合而成。
(8)0.6mol/L三氯化鐵溶液:稱取三氯化鐵(FeCl3· 6H2O,AR)10g溶於0.1mol/
5.6 操作方法
按表1操作。
混勻後,離心沉澱,再加入三氯化鐵溶液後10min,取上清液用520nm波長比色,以空白管調“0”,讀取各管吸光度。
5.7 正常值
30~80U/ml。
5.8 化驗結果臨牀意義
血清膽鹼酯酶測定的臨牀意義在於酶活力降低。肝臟合成PChE,故肝實質細胞損害時降低。有機磷毒劑是AChE及PChE的強烈抑制劑,測定血清ChE與測定全血ChE一樣,是協助有機磷中毒診斷及預後估計的重要手段。
5.9 附註
(1)此法顯色不穩定,特別是室溫超過20℃時影響明顯,加三氯化鐵顯色,應迅速過濾或離心沉澱取上清液比色,否則誤差較大,室溫過高時,最好於冰水浴操作和過濾。
(2)某些患者濾液混濁不清,比色困難,此類現象見於肝膿腫,敗血症,可能是由於此類患者血清粘蛋白含量往往很高,三氯醋酸未能使蛋白完全沉澱,在有些方法中加磷酸可克服此缺點。