5 β-血小板球蛋白的醫學檢查
5.1 檢查名稱
5.2 分類
5.3 化驗取材
5.4 β-血小板球蛋白的測定原理
用抗β-TG或抗PF4抗體包被酶標板，樣品中的β-TG或PF4結合於酶標板上，加OPD髮色基質液顯色。顯色的深淺爲樣品中β-TG或PF4的含量成正比關係。
5.5 試劑
β-TG和PF4ELISA法藥盒（上海第二醫科大學）。
（1）本藥盒的組成：板洗滌液10ml。樣品緩衝液5ml，基質稀釋液2ml，標準抗原0.1ml，酶標抗體0.1ml，OPD髮色基質16mg（避光），30%H2O2和3mol/L H2SO4自備，96孔ELISA包被板1塊，使用說明書1份。
（2）測定前準備：
①板洗滌液：將10ml原液倒入另外瓶中，加去離子水90ml，使總體積爲100ml爲應用液（EL－1）。
②樣品緩衝液：將5ml原液倒入另外瓶中，加去離子水50ml，使總體積爲55ml爲應用液（EL－2）。
③標準抗原：取標準抗原1支，加樣品緩衝應用液（EL－2）1ml，然後均分爲2份（0.5ml/份），取其中1份置於4℃冰箱中待用，另1份現用，用作第1管（200ng/ml）；此外，再取小塑料管6支，編號。各管依次寫上100，50，25，12.5，6.25，3.125，先在每管各加樣品緩衝液（EL－2）250ml，然後從第1管（即200ng/ml）中吸出250μl注入第2管中（即100ng/ml），依次對倍稀釋，即成7個減半濃度的標準抗原稀釋液。
④基質稀釋液：將2ml原液倒入另一瓶中。加去離子水18ml，使總體積爲20ml應用液（EL－3）。
⑤酶標抗體：取1支，加樣品緩衝液（EL－2）10.5ml，使成應用液（需用前新鮮配製）。
⑥髮色基質：將基質稀釋應用液（EL－3）20ml倒入小燒杯中，將16mg OPD髮色基質投入，溶解混勻（可在36℃水浴中溫育溶解），臨用時加30%H2O220μl（其含量爲0.8g/L）。
⑦3mol/L H2SO4：6ml用作終止反應用。
（3）採血和待測血漿稀釋法：①採血：同放射免疫法測定；②待測血漿稀釋法備標記“B”，“P”2支塑料管，在“B”管中先注入樣品緩衝液（EL-2）300μl。而在“P”管中注入400μl；吸待測血漿樣品100μl注入“P”管中混勻，即爲待測樣品稀釋液，用作PF4測定；然後從“P”管中吸100μl注入“B”管中，混勻，作爲β-TG測定用。
（4）酶標分析儀。
5.6 操作方法
（1）所提供96孔ELISA塑料板是經包被、凍幹處理的，故可直接上反應。
（2）加樣上反應：
①將ELISA包被板平放，第1、2排作標準品測定，從上至下（即從“A”到“G”）依次各加7個不同濃度梯度的標準品100μl，第8排（“H”）不加標準品，只加樣品緩衝液（EL－2）100μl作爲非特異性“穴”。
②從第3排起，作待測樣品測定，各孔加入樣品稀釋液100μl。
③置室溫（＞22℃）2h或在37℃溫箱中溫育1h，且需加蓋。
（3）酶標反應：
①將靜置3h的第一次反應板，吸去內液，用板洗滌液（EL－1）洗滌4次，具體洗滌法是在各孔內加板洗滌應用液（EL－1）200μl。輕輕搖幾次，然後吸出
內液，在吸水紙上拍幹，如此反覆4次。
②將已稀釋的酶標應用液，從左至右，從頭到尾，於每孔內各加100μl，然後在室溫靜置1h或37℃溫箱中溫育1h。第8排（“H”）孔仍用樣品緩衝液，不加酶標記液。
（4）髮色反應：
①酶標反應1h後，應立即用板洗滌應用液（EL－1），反覆洗滌4次，吸乾，然後再進行髮色反應。
②於每孔各加發色基質稀釋液200μl，加時應立即記錄時間，全部應在4.5～5min內完成，注意控制時間或髮色反應速度，顯示顏色不可太淡或太深（即第1排A值在1.0以上，第8排在0.1左右最佳）。
③待發色反應已見到有明顯梯度變色（參考反應時間爲4.5～7.0min）立即按原先前後次序，逐孔加入3mol/L H2SO4應用液50μl，以終止反應。10min後，以492nm濾光片在酶標反應儀上進行測定。
5.7 正常值
血漿β-TG爲16.4±9.8ng/ml；PF4爲3.2±2.3ng/ml。
5.8 化驗結果臨牀意義
5.9 附註
（1）吸取原液必須吸淨，用應用液反覆洗幾次。