4 檢查名稱
7 腦脊液單克隆抗體檢測癌細胞的原理
將新鮮腦脊液標本經1150r/min離心10min，沉渣用白明膠包被於玻片上，然後用蘇木素和伊紅染色，用磷酸緩衝液沖洗。加適當稀釋度的單克隆抗體於玻片上，同時做陽性和陰性對照。置溼盒於室溫30min，取出後用PBS沖洗，加入純化的羊抗鼠IgG熒光素結合物，再置室溫30min，乾燥後加90%甘油於玻片上於熒光顯微鏡下觀察結果。
9 操作方法
①抗原基質片（活檢組織冰凍切片，被檢物直接塗片，培養物塗片等），經無水乙醇或丙酮、甲醇等（要根據實驗要求選擇固定劑）固定處理後室溫晾乾。
②加熒光標記同屬類特異性抗體於基質片上，放溼盒置室溫或37℃溫箱反應30min～1h。
③0.01mol/L pH7.2 PBS緩衝液沖洗15min（換3次PBS）。
④pH7.2或pH7.4緩衝甘油封片。
⑤熒光顯微鏡鏡檢。
①抗原（或抗體）基質片（各種組織冰凍切片或培養細胞等）基質片從冰箱取出立即風乾。使用前經無水乙醇或丙酮、甲醇等固定劑處理（根據實驗要求選擇固定劑），一般固定3～15min，室溫晾乾。
②被檢物（血清、腦脊液或其他滲出物等），根據需要用PBS適當稀釋（1∶5或1∶10）滴於抗原基質片上，置室溫或37℃溫箱反應30min～1h。
③0.01mol/L pH7.2 PBS沖洗15min（更換PBS 3次）。
⑤PBS沖洗同③。
（3）補體法：
①抗原基質片（組織冰凍切片或培養細胞），從冰箱取出立即風乾，經無水乙醇或丙酮、甲醇固定3～15min，室溫晾乾。
②被檢物（血清或其他），實驗前置56℃水浴中30min滅活，冷卻後用PBS根據實驗要求適當稀釋（1∶5或1∶10）。
③將上述滅活稀釋被檢物與新鮮豚鼠血清（生理鹽水1∶10稀釋）或新鮮正常人血清進行等量混合，滴加在基質片上。置室溫或37℃溫箱反應30min。
④PBS沖洗同（2）-③。
⑤滴加熒光標記抗補體抗體於基質片上置室溫或37℃溫箱反應30min。
⑥PBS沖洗同④。
⑦緩衝甘油封片，鏡檢同（2）-⑥。
（4）雙層法、加層法、混合法、補體法，可根據原理示意圖，用上述基本法操作即可。
（5）雙重染色法：用於同時示蹤兩種抗體或抗原，其操作方法同上，只是熒光標記物用兩種熒光素標記，一般用異硫氰酸熒光黃（FITC）發黃綠色熒光，另一種是羅丹明B200（RB200）發橙紅色熒光，兩種標記物可混合應用，也可先後分別應用，在紫外光下可同時被激發，在同一部位發出各自特異標記熒光。
（6）反襯染色法：在上述熒光染色鏡檢中，爲加強特異熒光與背景的對比度。常用反襯染色的方法，來消除背景熒光，突出特異熒光。常用於反襯染色試劑。有RB200、FITC分別做特異的和非特異的標記，二者混合間接熒光染色法染色以達到特異和非特異反襯目的。另一種試劑是伊文思藍（Evan blue）它發射與RB200類似的橙紅色熒光。使用方法可將FITC熒光染色的標本片，浸入1∶1 000～1∶10000稀釋的伊文思藍溶液中2～5min，取出後用PBS沖洗10min，封片鏡檢。也可將伊文思藍以適當的比例與熒光標記抗體溶液混合染色，鏡檢中可觀察到明顯襯出FITC黃綠色特異熒光。
10 正常值
陰性。